SDF-1/CXCR4信号轴通过NF-κB通路诱导人退变髓核细胞凋亡

目的探讨趋化因子SDF-1/CXCR4信号轴对人退变椎间盘髓核细胞凋亡的调控作用及其分子机制。方法将术中摘取的椎间盘标本根据Pfirrmann退变程度分为正常组和退变组。用免疫组织化学法、定量PCR和Western blot等检测SDF-1和CXCR4的表达。用退变椎间盘髓核原代细胞培养,取第3~5代的细胞给予10 ng/mL SDF-1刺激、CXCR4-siRNA转染及NF-κB特异性抑制剂PDTC(20μmol/L)等不同处理,Western blot和q-PCR验证转染效率和信号通路上靶蛋白(基因)的表达;Annexin V/PI检测细胞凋亡率;细胞免疫荧光检测NF-κB的重要基团P65的核转移情况。结果 SDF-1和CXCR4在退变椎间盘组织中表达显著升高(P0.05);SDF-1可以诱导退变髓核细胞的凋亡,但在CXCR4的表达受到沉默后,SDF-1的促凋亡作用被抑制(P0.05);加入SDF-1的诱导后,磷酸化P65的表达水平明显增高(P0.05),P65向核内移位;用PDTC抑制NF-κB活性后,SDF-1促凋亡作用明显减弱(P0.05)。结论 SDF-1/CXCR4信号轴促进髓核细胞凋亡的机制可能与Akt/NF-κB信号通路相关。     

冬凌草甲素抑制多发性骨髓瘤细胞H929增殖和诱导凋亡的分子机制

目的:研究不同浓度的冬凌草甲素对多发性骨髓瘤细胞H929增殖和凋亡的影响及其调控机制。方法:使用不同浓度的冬凌草甲素处理多发性骨髓瘤细胞H929；利用CCK-8法检测细胞增殖抑制率；利用Annexin-FITC/PI双染和流式细胞仪检测细胞凋亡能力；利用蛋白印迹实验检测凋亡通路中BCL-2家族蛋白及PI3K/Akt通路中相关蛋白的表达水平。结果:细胞增殖实验结果显示冬凌草甲素显著抑制了多发性骨髓瘤H929细胞的增殖，且呈浓度和时间依赖性；细胞凋亡实验结果显示冬凌草甲素显著促进了多发性骨髓瘤H929细胞的凋亡，呈浓度和时间依赖性递增；蛋白印迹实验结果显示，随着冬凌草甲素浓度的增加，多发性骨髓瘤H929细胞中BCL-2蛋白、p-PI3K蛋白和p-Akt蛋白表达量递减，Bax蛋白表达量递增。结论:冬凌草甲素能有效抑制骨髓瘤H929细胞增殖，诱导细胞发生凋亡，其机制可能与PI3K/Akt信号通路的受抑及凋亡通路的活化有关。     

杜仲提取物改善抑郁小鼠的骨代谢机制研究

目的探讨杜仲提取物改善抑郁小鼠的骨代谢机制。方法用慢性温和不可预见性刺激结合孤养方法建立抑郁症小鼠模型。按照体重将小鼠随机分为4组:正常组、模型组和低、高2个剂量实验组,每组10只;造模后第21天开始给药,低、高2个剂量实验组分别灌胃给予杜仲提取物20,40 mg·kg^-1(均3 mL),正常组和模型组给予等量的0.9%NaCl,1次/天,连续4周。以双能X线骨密度检测仪检测小鼠骨密度(BMD);以酶联免疫吸附法检测血清骨代谢相关指标;以免疫印迹法检测L5骨组织中磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)和磷酸化AP1(p-AP1)蛋白相对表达水平。结果正常组、模型组和低、高2个剂量实验组的小鼠骨BMD分别为(0.48±0.01),(0.39±0.02),(0.41±0.01)和(0.43±0.01)g·cm^-2;这4组骨组织中p-JNK蛋白相对表达量分别为0.97±0.05,2.44±0.08,1.99±0.04和1.58±0.03;这4组骨组织中p-AP1蛋白相对表达量分别为0.96±0.04,3.13±0.03,2.75±0.06和2.22±0.08。上述指标:模型组与正常组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);2个剂量实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论杜仲提取物可能通过降低JNK、AP1磷酸化水平,发挥对抑郁症小鼠骨骼的保护作用。     

独活寄生汤延缓人椎间盘髓核细胞退变机制的研究

探讨独活寄生汤(Duhuo Jisheng decotion,DHJSD)延缓人椎间盘退变的作用及其可能的分子机制。术中摘取人椎间盘标本,根据磁共振Pfirrmann退变程度分为正常组和退变组。Western blot和Real-time PCR法检测椎间盘组织中炎症因子TNF-α,IL-1β和胞外基质分解酶MMP-3,MMP-13的表达。体外培养人髓核细胞,用CCK-8法测定在基质细胞衍生因子1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1,10μg·L-1)和各种不同浓度的DHJSD共同处理下,髓核细胞的活力情况,并筛选出DHJSD合适的作用浓度。随后分为3组:对照组、SDF-1组、DHJSD+SDF-1组,检测各组细胞TNF-α,IL-1β,Agg,co IⅡ,MMP-3,MMP-13的表达情况。为进一步探讨其分子机制,采用NF-κB抑制剂(BAY11-7082)或CXCR4-siRNA转染髓核细胞,检测CXCR4,NF-κB主要基团P65磷酸化水平(p-P65)以及P65核转移情况,细胞炎症因子和细胞外基质的表达情况。通过检测2组椎间盘组织发现退变髓核组织中TNF-α,IL-1β,MMP-3,MMP-13的表达明显升高(P0.05)。而体外细胞实验发现,CCK-8法检测显示当DHJSD质量浓度为300 mg·L-1时髓核细胞的活力明显增加。将实验分为3组后,检测发现与单独SDF-1组相比,用DHJSD处理后TNF-α,IL-1β,MMP-3,MMP-13含量明显降低,而Agg和co IⅡ表达明显上升。采用CXCR4-siRNA转染髓核细胞后发现,SDF-1可以明显提高CXCR4和p-P65的表达,促进P65向核内转移,而给予DHJSD或CXCR4-siRNA处理后其作用明显被抑制。进一步采用BAY11-7082处理髓核细胞后发现,能明显降低髓核细胞炎症因子TNF-α和IL-1β,以及胞外基质分解酶MMP-3和MMP-13的表达。独活寄生汤可抑制炎症因子表达,促进胞外基质合成,其潜在机制与SDF-1/CXCR4/NF-κB信号通路有关。