单细胞内注射法显示再生视网膜节细胞纤维的研究

单细胞内注射法用于视觉中枢神经形态学研究已有报道,但对于显示视网膜节细胞(RGC)再生纤维末端,是一新的尝试,本文将此法做详细介绍。 材料与方法 本实验选用成年金黄地鼠(Golden Hamster)60只,在苯巴比妥钠(Sagatal,50 mg/kg体重)腹膜腔内注射麻醉下,手术显微镜下取一段长2～3 mm的周围神经(PN),经眼球壁以注射针头扎通的孔洞植入至眼玻璃体内。同时,在动物颅顶做一切口,逐层切开组织,暴露视神经(ON),在眼球后2 mm处用镊子挤压ON直至ON完全分离,注意勿损伤其外膜,缝合切口。     

新世纪局部解剖学课程要适应临床各专业的需求

在医学院校基础课中 ,局部解剖学是一门十分重要的课程 ,因为它必须以尸体作为实验操作的基本条件 ,这是任何医学基础课程都无法比拟的 ,随着社会经济的不断发展 ,尸体来源将面临短缺的困境 ,使得开设这样的课程时必须更加珍惜 ,需不断总结以往的实践和经验 ,使得这一古老的学科更具有科学性和实践性。一、局部解剖的教学目的必须明确医学生学习解剖课程一般分为 2个阶段进行。第一阶段为学习人体系统解剖学 ;医学生在进行基础医学课学习时 ,人体解剖学便是一门基础医学中的基础课 ,它是医学基础课的基础 ,讲课方法一般以系统为基础 ,实习课…     

甲基强的松龙上调受损视网膜节细胞内Hsp27蛋白的表达

目的研究甲基强的松龙（MP）上调热休克蛋白（Hsp27）蛋白对受损中枢神经元自我保护及修复机制的激发和增强作用,为进一步促进受损中枢神经元存活和纤维再生创造有利的条件.方法建立中枢神经损伤模型（视神经眼眶内切断术）,经或未经MP治疗的术后动物分别存活4、7 14、21、28 d,取视网膜,切片,Nissl染色观察视网膜节细胞（RGCs）形态和存活数量的变化,用免疫组织化学染色的方法观察节细胞层中Hsp27的表达（检测A值）.用SAS软件对数据进行统计学处理.结果 MP治疗组可见受损RGCs在7、14 d的存活数量增多,有统计学意义（P＜0.01）,在受损RGCs表达增多的Hsp27表达更加强烈（检测A值）.RGCs存活率与A值在各个时间点的变化趋势相似.结论 MP可使具有保护作用的Hsp27表达上调,从形态学角度提示了MP可能激发并增强受损中枢神经的自我保护及修复机制.     

甲基强的松龙对嗅鞘细胞移植治疗受损视网膜神经节细胞的早期保护效应

目的:观察注射甲基强的松龙对嗅鞘细胞移植治疗受损视网膜节细胞的早期保护作用。方法:实验于2005-09/2006-09在北京大学医学部神经解剖实验室完成。实验动物分组:成年雄性SD大白鼠55只随机取出7只为正常对照组,不进行任何实验处理;其余48只为实验组,在手术显微镜下经动物的左侧眶上缘暴露视神经,然后将视神经鞘顺向划开,在距眼球后壁2mm处将视神经剪断。将实验组动物随机分成4组,每组12只:①损伤组。②静脉注射甲基强的松龙组,动物实施术后30min给予一次性尾静脉注射甲基强的松龙注射液(90mg/kg)。③嗅鞘细胞移植组,动物术后移植嗅鞘细胞组织层。④给药后嗅鞘细胞移植组,动物术后30min给予一次性尾静脉注射甲基强的松龙注射液(90mg/kg),然后移植嗅鞘细胞组织层。术后21d麻醉下处死各组大鼠。实验评估:通过视神经逆行荧光标记和蛋白免疫印迹方法观察视网膜神经节细胞存活状况以及热休克蛋白27表达情况。结果:55只SD大鼠均进入结果分析。①视网膜神经节细胞的存活数量:甲基强的松龙静脉注射组高于损伤组[(16.525±9.557),(9.889±5.585)个/视野,P<0.1],给药后嗅鞘细胞移植组明显高于甲基强的松龙静脉注射组和嗅鞘细胞移植组[(28.881±13.660),(16.525±9.557),(13.513±6.840)个/视野,P<0.1,<0.01]。②各组视网膜神经节细胞热休克蛋白27的表达:甲基强的松龙静脉注射组高于损伤组,给药后嗅鞘细胞移植组明显高于甲基强的松龙静脉注射组和嗅鞘细胞移植组。结论:早期注射甲基强的松龙使受损视网膜神经节细胞存活率升高,并使热休克蛋白27表达上调,同时亦表现出了对移植嗅鞘细胞移植治疗受损视网膜神经节细胞的显著保护效应。     

两种物理疗法干预对受损周围神经的修复与再生作用

背景：周围神经纤维再生环境的改变，可以促进神经纤维的再生速度，加速神经功能的恢复。物理疗法可改善损伤部位局部微循环的流速，增进和刺激创伤的恢复进程，因此，对不同物理疗法的选择和照射剂量的控制，可否促进神经纤维再生速度?目的：观察不同物理方法照射对大鼠受损神经纤维再生的促进作用。设计：随机分组对照的动物实验。单位：北京大学医学部人体解剖学与组织胚胎学系实验室。对象：实验于2001—09／2002—09在北京大学医学部人体解剖学与组织胚胎学系实验室完成，雄性SD大鼠15只，体质量185～220g。干预：建立大鼠坐骨神经损伤模型后，随机分为3组。生物频谱组5只，红外线照射组5只，分别给予相应的物理照射。损伤对照组5只不做照射。3组动物分别在手术后第14天，取手术侧坐骨神经段切片，以光镜下观察受损神经纤维溃变率的减少间接了解物理疗法对神经受损后的保护功能。主要观察指标：神经断裂处及靠近脊髓侧4点(1，2，3，4mm)和远离脊髓侧4点(1，2，3，4mm)受损处神经纤维的溃变率。结果：15只大鼠均进入结果分析。①生物频谱组和红外线照射组的坐骨神经纤维与对照组在断裂处的远离脊髓侧神经纤维溃变率无差异(均为100％)。②在断裂处生物频谱组和红外线组的神经纤维溃变率明显降低(68％，89％)，对照组最高(100％)。③3组靠近脊髓侧4点神经纤维溃变率呈递减趋势，即越靠近脊髓侧溃变率越低；并且生物频谱组最低，红外线组次之，对照组最高。结论：受损周围神经修复后，选用物理疗法辅助治疗可使溃变的神经纤维数量减少，有促进和加快神经纤维恢复的作用，其中生物频谱照射法效果更好些。     

嗅神经鞘细胞和自体坐骨神经移植修复受损视神经

背景:有研究已初步证明了甲泼尼龙对受损视网膜节细胞的早期保护作用。目的:观察甲泼尼龙联合嗅神经鞘细胞和自体坐骨神经移植大鼠受损视神经纤维及其髓鞘的形态学及计数变化。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2005-09/2006-03于北京大学医学部神经解剖实验室完成。材料:选取成年雄性SD大鼠40只,取其中4只做形态学正常对照。方法:其余36只大鼠按随机数字表法分为6组,即视神经损伤模型组、甲泼尼龙组、嗅神经鞘细胞移植组、嗅神经鞘细胞移植 甲泼尼龙组、坐骨神经移植组、坐骨神经移植 甲泼尼龙组,每组6只。主要观察指标:取视神经,制作冰冻切片,移植后14,21d分别从各组切片中随机抽取10张载玻片,对生物素标记的葡聚糖胺染色的视神经纤维及甲苯胺蓝染色的视神经髓鞘进行形态学观察,电镜下对视神经纤维髓鞘进行计数。结果:顺行追踪剂生物素标记的葡聚糖胺在视神经中的染色结果主要表现为嗅神经鞘细胞移植 甲泼尼龙组、坐骨神经移植 甲泼尼龙组,与视神经损伤模型组相比,神经纤维排列较整齐,发生中晚期溃变的纤维比例较小。移植后14,21d,甲泼尼龙组视神经纤维髓鞘数量均显著高于视神经损伤模型组(P<0.05,0.01)。坐骨神经移植 甲泼尼龙组均显著高于坐骨神经移植组(P<0.05)。嗅神经鞘细胞移植 甲泼尼龙组均显著高于嗅神经鞘细胞移植组(P<0.05)。结论:形态学结果表明嗅神经鞘细胞和自体坐骨神经移植与甲泼尼龙的联合作用能激发并增强受损中枢神经的自我保护及修复作用,对视神经纤维及其髓鞘溃变速度有延缓作用。     

大鼠正中神经和桡神经纤维起始细胞的分布与分布模式

将辣根过氧化物酶(HRP)注入大鼠正中神经或桡神经干内,标记细胞出现在注射侧脊髓前角和脊神经节内。正中神经组:出现在脊髓C_4～T_2节段,在前角外侧群中的分布偏向背侧;在脊神经节分布于C_6～T_2节段。桡神经组:出现在脊髓C_4～T_1节段,在前角外侧群中的分布偏向腹侧;在脊神经节分布于C_6～T_1节段。     

用TMB法显示HRP逆行标记视网膜节细胞的实验技术

哺乳动物视网膜起源于中枢神经系统(CNS)，因此视神经轴索切断(简称轴切Axotomy)成为研究CNS损伤及再生的良好模型。研究发现：超过90％的视网膜节细胞(RGCs)在视神经轴切后1月内死亡，因此损伤后没有足够数量的RGC8存活是阻止再生的最大障碍。目前RGC8定量分析研究多采用荧光物质逆行标记，但荧光物质标记需用荧光显微镜观察，而且荧光衰退很快，不利于阳性结果的观察保存，因而限制了其推广应用。本文用HRP在视神经断端逆行标记RGCs，     

大鼠坐骨神经移植段对受损的视网膜节细胞影响的形态学研究

选用成年大鼠,切断视神经后,将自体周围神经段(2mm/每段)植入眼球玻璃体内,存活2周,取视网膜沿视轴纵切开,Nissl染色,光镜观察,并用计算机图像分析仪(IBAS 2000)测量面积。结果发现,植入周围神经段的各组视网膜节细胞未见溃变现象,测量的视网膜节细胞胞体平均面积比正常动物者明显增加,每组均可见一些超过正常视网膜节细胞面积的巨大细胞,胞体呈椭圆形,其长轴与节细胞排列方向一致;当增加周围神经移植段数量或缩短两个周围神经移植段植入点的距离时,视网膜节细胞的平均面积和巨大节细胞构成比即随之增大。仅切断视神经的对照组动物视网膜神经节则出现溃变。