突变MyD88重组质粒的构建及其抑制绿脓杆菌诱导的A549细胞IL-8表达

构建突变MyD88真核表达质粒(MyD88 DN),转染人呼吸道上皮细胞株A549,探讨其对绿脓杆菌及其分泌产物刺激IL-8表达的影响.结果显示突变MyD88成功构建入pcDNA3.1/zeo真核表达质粒,转染A549细胞后,可降低绿脓杆菌培养上清或活菌刺激诱导的IL-8分泌.提示突变MyD88可阻断绿脓杆菌感染引起的呼吸道上皮细胞IL-8释放,为呼吸道炎症的基因治疗提供了新的靶基因.     

肺炎克雷伯杆菌分泌因子及活菌诱导人肺上皮细胞表达分泌IL-8的研究

目的 :探讨肺炎克雷伯杆菌 (Klebsiellapneumoniae ,Kp)分泌因子及活菌诱导肺上皮细胞株表达和分泌IL 8的状况。方法 :用临床分离株Kp0 3 1 1 6、Kp0 3 1 83的细菌培养上清或活菌刺激肺上皮细胞株A5 49和SPC A 1 ,酶联免疫吸附实验 (ELISA)检测细胞IL 8表达量。结果 :①两株Kp培养上清分别刺激A5 49或SPC A 1后 ,IL 8表达量均有显著增高 (P <0 .0 1 ) ,且随上清刺激浓度增加而上升。②两株Kp及DH5 (活菌分别与SPC A 1共孵育 2h ,用庆大霉素杀死胞外菌 ,继续孵育 2 4h后两株Kp诱导细胞IL 8表达量均显著高于DH5α(P <0 .0 1 ) ,且随细菌数 /细胞数比例增大而上升。结论 :Kp分泌因子及活菌都能够诱导肺上皮细胞IL 8表达 ,而活菌上调IL 8的效应较培育上清分泌因子更显著 ,提示肺上皮细胞在Kp感染刺激的肺部炎症反应中起重要作用。     

结核分支杆菌培养上清诱导呼吸道上皮细胞IL-8表达

目的：观察呼吸道上皮细胞对结核杆菌产物产生的炎症反应，探讨炎症反应信号传递的机制。方法：制备结核分枝杆菌强毒力H37RV株培养上清，用培养上清刺激肺上皮细胞株SPC-A-1和A549，酶联免疫吸附实验检测细胞IL-8表达量。用突变MyD88表达重组质粒转染SPC-A-1细胞，观察MyD88与结核杆菌培养上清诱导上皮细胞炎症反应信号传递的关系。结果：结核分枝杆菌强毒力H37RV株培养上清明显增加SPC-A-1和A549细胞IL-8的表达。用突变MyD88表达重组质粒pcDNA3．1-MyD88转染SPC-A-1。结果显著抑制了结核杆菌培养上清对SPC-A-l细胞的炎症刺激作用。结论：结核杆菌培养上清能够诱导呼吸道上皮细胞IL-8表达，，Toll／IL-1受体信号通路及MyD88分子与细胞炎症反应的信号传递相关，提示在肺结核病发病过程中。结核杆菌的代谢产物可能刺激肺上皮细胞产生炎症细胞因子，参与肺结核炎症病变的形成。     

MyD88缺去突变基因转染降低病原菌感染的人呼吸道上皮细胞IL-8的分泌

白细胞介素-8（1L-8）是呼吸道炎症反应的重要介质。本实验通过构建突变MyD88真核表达质粒（MyD88 DN），转染人呼吸道上皮细胞株A549及SPC-A-1，探讨其对病原菌感染上皮细胞IL-8表达的影响。结果显示：MyD88 DN转染可降低结核杆菌、绿脓杆菌培养上清诱导的IL-8释放；对肺炎克雷伯杆菌和绿脓杆菌活菌侵袭细胞所刺激的IL-8分泌也有明显的阻断作用。提示突变MyD88能够阻断细菌感染引起的呼吸道上皮细胞IL-8表达，可能成为呼吸道严重炎症反应基因治疗的新靶基因。