蛋白激酶C在卵母细胞成熟、受精和早期胚胎发育过程中的作用

小鼠胚胎发育过程中,蛋白激酶C(PKC)家族在调节卵的活化、完成减数分裂和开始有丝分裂、胚胎的致密,以及囊胚形成过程中都有作用,但其多个亚型的功能还知之甚少.研究表明,已知的十种PKC亚型以及PKC锚定蛋白--活化的磷脂酶C受体(RACK)在小鼠胚胎2-细胞期至囊胚期都有表达.本文归纳了近年来对PKC亚型各自不同的动态分布模式和表达水平的研究,这些研究表明它们在早期胚胎发育的各个时期都至关重要,尤其在胚胎4-细胞期的早期,个别亚型在核内的浓度是瞬间升高的,提示我们这些PKC亚型也许控制着早期小鼠胚胎核的组建以及机能调节.本文对核移植胚胎中PKC的可能作用也进行了分析.     

口服Ⅱ型胶原治疗大鼠佐剂性关节炎的研究

目的:探讨口服Ⅱ型胶原蛋白(CⅡ)诱导免疫耐受对大鼠佐剂性关节炎(AA)的治疗作用,研究外周淋巴器官及关节液中肿瘤坏死因子(TNF-α)水平的变化.方法:应用免疫组化法检测口服和未口服CⅡ的大鼠外周淋巴器官中TNF-α水平的变化,应用双抗体夹心酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测大鼠关节液中TNF-α水平的变化.结果:口服耐受的AA大鼠的外周淋巴器官和关节液中TNF-α的水平明显低于未口服CⅡ的AA大鼠.结论:口服CⅡ诱导免疫耐受可以有效降低TNF-α水平,从而治疗佐剂性关节炎.     

大鼠佐剂性关节炎模型的建立与评价

目的诱导大鼠产生佐剂性关节炎（adjuvant arthritis，AA）并进行综合评价。方法大鼠左后足垫皮下注射完全弗氏佐剂（CFA）诱导AA后，采用关节炎评分法对关节肿胀程度进行评估，应用ELISA法检测大鼠血清中抗Ⅱ型胶原（Collagen Ⅱ,CⅡ）抗体的含量，并用透射电镜观察眉窝淋巴结和病变关节滑膜的超微结构的变化。结果注射CFA后模型组血清中抗CⅡ抗体含量明显升高，透射电镜显示呈典型的类风湿性关节炎病变。结论CFA能成功诱导大鼠AA模型，为研究类风湿性关节炎（rheumatoid arithritis，RA）的发病机制及药物疗效提供理想的实验模型。     

不同类型的转基因细胞核供体对生产小鼠转基因克隆胚胎的影响

目的 利用体细胞核移植(SCNT)技术生产小鼠转基因克隆胚胎. 方法 利用所构建的含新霉素抗性(Neor)基因和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的双标记选择载体, 通过电穿孔的方法, 分别转染小鼠胎儿成纤维细胞和小鼠胚胎干细胞,经G418筛选14d后用于核移植.同时以未转基因小鼠卵丘细胞和成纤维细胞为核供体,进行体细胞核移植. 结果 转基因与未转基因胎鼠成纤维细胞的重构胚的囊胚(154/160)发育率为19.23%和22.91%,差异不显著(P＞0.05);转基因胚胎干细胞与胎鼠成纤维细胞的重构胚的囊胚(152/154)发育率为41.54%和19.23%,差异显著(P＜0.05);未转基因卵丘细胞与成纤维细胞的重构胚的囊胚(171/160)发育率为41.17%和22.91%,差异显著(P＜0.05). 结论 利用体细胞核移植技术,小鼠胎儿成纤维细胞和胚胎干细胞可以有效地生产小鼠转基因囊胚.     

神经系统疾病的基因治疗

很可能不久在许多中枢神经系统疾病和损伤的治疗中建立起遗传学治疗方法。这类治疗的对象不仅包括致病基因，而且还包括神经生长因子（神经生长因子影响神经元的存在和功能）和异常的继发代谢及神经传导功能。     

NuMA和γ-tubulin在核移植克隆胚胎中的动态变化和作用

核有丝分裂器蛋白(NuMA)和γ-微管蛋白(γ-tubulin)在卵母细胞成熟、受精和核移植胚胎早期发育过程中起重要作用。供体细胞γ-tubulin和NuMA参与了核移植克隆胚有丝分裂纺锤体的组装,NuMA主要参与了纺锤体极的装配和维持,而供体中心体调节核移植胚最初纺锤体的形成。核移植重构胚中心体结构异常经常伴随染色体异常排列、纺锤体结构异常,而中心体分布异常经常伴随异常卵裂。     

一种简单迅速筛选肿瘤基因组中基因突变的方法

目的 建立一种新的非同位素ＳＳＣＰ分析方法。方法 常规提取人类基因组ＤＮＡ作为模板,ＰＣＲ扩增ｎｍ２３－Ｈ１基因,变性ＰＣＲ产物,６％非变性聚丙烯酰胺凝胶ＳＳＣＰ电泳,银染后分析结果。结果 改进了目前ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析中应用同位素标记的检测方法,采用银染方法,建立起简单迅速的非同位素ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析方法和适宜条件。并将这种方法成功地应用于肿瘤转移抑制基因点突变的检测。结论 非同位素聚合酶链反     

细胞骨架在卵母细胞成熟、受精及核移植胚胎的作用

细胞骨架系统,不仅是活细胞的支撑结构,决定细胞的形状,赋予其强度,而且是对各细胞器乃至某些大分子进行空间的组织安排,并且参与细胞外信号向核的转导及核对整个细胞活动的调节。哺乳动物卵母细胞和早期胚胎细胞骨架具有其独特的分布和功能,使卵母细胞和胚胎呈现出精确的时空性变化特点。确保受精及胚胎发育按时有序地进行。本文综述了细胞骨架在卵母细胞成熟、受精、早期胚胎发育和核移植发育过程中的分布和作用。     

神经系统疾病的基因治疗

很可能不久在许多中枢神经系统疾病和损伤的治疗中建立起遗传学治疗方法。这类治疗的对象不仅包括致病基因,而且还包括神经生长因子(神经生长因子影响神经元的存在和功能)和异常的继发代谢及神经传导功能。     

口服伤寒杆菌前后消化道黏膜上皮内淋巴细胞的作用及其变化规律的实验研究

目的研究口服伤寒杆菌后，大鼠小肠和大肠上皮内淋巴细胞（IEL）的形态学特征及分布特点的变化，为探讨粘膜免疫的机制打下基础。方法给大鼠口服伤寒杆菌，应用免疫组化染色和电镜的方法对大鼠消化道各部分的黏膜IEL表型进行分析，观察其形态特征。结果电镜观察显示大鼠被免疫后肠道淋巴细胞超微结构与对照组相比功能活跃；免疫组化观察到大鼠被免疫后肠道各段IEL的亚群数量明显增加，消化管各部IEL数量有差异。结论服伤寒杆菌后，大鼠小肠和大肠IEL活性明显增强，是免疫反应的形态基础。IEL数量的大量增加，进一步表明淋巴细胞在粘膜免疫中起重要作用。