抗大肠杆菌耐热性肠毒素ST1 McAb杂交瘤细胞系的建立及应用

目的 耐热性肠毒素ST1单克隆抗体制备及在感染性腹泻诊断中的应用。方法 应用基因工程菌株分泌的肠毒素制备ST1包涵体，免疫Balb／c小鼠，成功制备了3株特异性抗ST1的单克隆抗体细胞株，用其中1株McAb建立了检测ST1的双单克隆抗体夹心ELISA法。结果 检测52株从临床腹泻病人粪便中分离的大肠杆菌，检出ST1阳性率为26．92％，与ST1检测的经典方法乳鼠灌胃法符合率为96．15％。结论 该方法是一种简捷、灵敏和特异的检测方法，具有实际应用价值。     

某区儿童常见病原菌耐药性的分析

目的探讨锦州市妇婴医院2008年²013年常见病原菌的耐药情况。方法收集2013年常见病原菌标本,分类并进行药敏实验。结果革兰阴性菌中,肠杆菌科和非发酵革兰阴性杆菌分别占61.97%和27.89%;革兰阳性菌中,金黄色葡萄球菌,凝固酶阴性葡萄球菌,肠球菌,肺炎链球菌分别占36.10%,36.75%,13.58%和10.93%,其他占3.60%。肺炎克雷伯杆菌和铜绿假单胞菌主要对头孢哌酮,头孢吡肟和亚胺培南敏感。鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素最为敏感,其次为第四代头孢菌素。肺炎克雷伯杆菌对阿米卡星,头孢吡肟和亚胺培南极为敏感,但对氨苄西林耐药。结论病原菌的耐药性越来越流行,要对抗生素使用进行必要的监督,从而减少耐药菌株的产生和传播。     

单克隆抗体ELISA捕捉法检测传染性法氏囊病病毒抗体(文摘)

作者用抗传染性法氏囊病病毒(IBDV)McAb 2 G10,建立了检测幼鸡血清中IBDV抗体的单克隆抗体ELISA捕捉法(McAb-ELISA),并与常规ELISA进行了比较。McAb-ELISlA的操作程序为:用0.05mol/L碳酸盐缓冲液(pH9.6)400倍稀释的McAb 2 G10包被ELISA板,每孔50ul,37℃孵育2h,PBST液(含0.05％吐温-20的PBS液)冲洗3次后,每孔加入50ul PBS液80倍     

肠道致病大肠埃希菌流行病学和分子机制的研究进展

肠道大肠埃希菌既是人类正常菌群又是造成全世界发病和死亡的重要病原体。肠道致病大肠埃希菌传统上分为6种：肠道致病性大肠埃希菌（EPEC）、肠道出血性大肠埃希菌（EHEC）、肠道侵袭性大肠埃希菌（EIEC）、肠道聚集性大肠埃希菌（EAEC）、肠道产毒素性大肠杆（ETEC）和弥漫黏附大肠埃希菌（DAEC）。本文中提出肠道致病型大肠埃希菌分为8种,还包括2种新的致病型大肠埃希菌——黏附浸润性大肠埃希菌（AIEC）和产志贺毒素的聚集性大肠埃希菌（STEAEC）。在人类宿主细胞中,通过检测肠道大肠埃希菌移植和研究疾病的分子机制．发现肠道致病型大肠埃希菌根据Ⅲ型分泌系统（T3SS）,可分为依赖T3SS致病型（EHEC、EPEC、EIEC）和非依赖T3SS致病型（ETEC、EAEC、STEAEC、DAEC、AIEC）2大类。本文主要介绍了肠道致病大肠埃希菌的流行病学和分子机制的研究进展。     

CPB-ST融合基因的构建及表达研究

用限制性核酸内切酶ＥｃｏＲＩ和ＳａｌⅠ双酶切含有大肠杆菌耐热性肠毒素ＳＴ１前体蛋白基因的质粒ｐＸＳＴ１，回收３２５ｂｐ的ＳＴ基因片段，然后，通过Ｔ４ＤＮＡ连接酶将其定向连接于事先经同样的双酶切处理的带有产气荚膜梭菌β－毒素基因（ＣＰＢ）的重组质粒ｐＥＣＢ２中ＣＰＢ基因的下降，转化受体菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中，经ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＩ酶切反应鉴定重组质粒，得到了理想重组质粒ｐＥＣＢ－ＳＴ１。重组菌株Ｂｌ２１（ＤＥ３）（ｐＥＣＢ－ＳＴ１）经ＩＰＴＧ诱导后，其表达产物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｉｎｇ及ＥＬＩＳＡ检测，结果表明重组菌株可以表达ＣＰＢ－ＳＴ融合蛋白，而且该融合蛋白无天然β－毒素和ＳＴ１的生物毒性。     

表达大肠杆菌肠毒素ST_1—LT_B融合蛋白工程菌株的免疫原性研究

已构建的能表达大肠杆菌肠毒素ＳＴ１—ＬＴＢ融合蛋白的工程菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴ－ＳＬＴ１）及其表达产物经动物试验证实没有毒性反应。用从ＩＰＴＧ诱导的工程菌中提取的包涵体或经甲醛灭活的工程菌制成抗原，免疫小鼠，结果免疫小鼠至少能抵抗１．５ＬＤ１００的大肠杆菌强毒株Ｃ８３９０２（Ｋ８８ａｃ，ＳＴ＋，ＬＴ＋）的攻击。用提取的包涵体免疫家兔后，采集的血清能够中和天然ＳＴ１的毒性。这表明构建的工程菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴＳＬＴ１）可以作为预防幼畜大肠杆菌性腹泻基因工程菌苗的候选株。     

鼠源性IgM类单克隆抗体的纯化方法

本文综述了鼠源性IgM类单克隆抗体(McAb)的纯化方法,并对其进行了比较。(1)聚乙二醇(PEG)沉淀法具有操作简便,适于大批量生产的特点。(2)免疫亲和层析法纯化的单克隆抗体具有良好的免疫活性,其纯度较高。(3)高效液相色谱法(HPLC)具有纯化条件温和,操作时间短,样品纯度高,且对单克隆抗体活性无不良影响的优点;但其设备昂贵,样品处理量相对较少。在实际应用中,可根据不同用途来选择纯化方法,获得理想的单克隆抗体。     

A型产气荚膜梭菌α毒素保护性抗原基因的高效表达

将含Ａ型产气荚膜梭菌α毒素基因的质粒ｐＫＭＡ１００用核酸内切酶ＢａｍＨＩ和ＨｉｎｄⅢ双酶切，经电泳分离、透析袋电洗脱法回收了０．９５ｋｂα毒素基因片段，再将载体ｐＥＴ－２８ｂ（＋）用ＢａｍＨＩ和ＨｉｎｄⅢ双酶切，然后将处理好的ｐＥＴ－２８ｂ（＋）与０．９５ｋｂ的α毒素基因片段进行连接、转化。经ＢａｍＨＩ和ＨｉｎｄⅢ酶切分析和序列分析，证明重组质粒ｐＸＥＴＡ１含有α毒素基因，且具有正确的阅读框架。构建的重组菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴＡ１）能表达α毒素，但已经完全丧失其毒性。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和薄层凝胶扫描分析，ＩＰＴＧ诱导后的ＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴＡ１）所表达的目的蛋白占菌体总蛋白的３３．２１％。经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析和免疫试验结果表明，表达产物能被α毒素抗血清识别，且免疫小鼠后，用强毒株培养上清攻击，结果免疫小鼠能抵抗至少４ＬＤ１００的攻击，这说明表达产物具有良好的免疫原性。     

抗A型产气荚膜梭菌α毒素mAb V_H和V_L基因的克隆与序列测定

用提取的Ａ 型产气荚膜梭菌α毒素包涵体为免疫原, 制备了１ 株ｍＡｂ ２Ｅ３ 。其Ｉｇ 亚类为ＩｇＧ３, 细胞培养上清和腹水的ｍＡｂ 效价分别为１∶１０２４ 和１∶１０８ 。该ｍＡｂ ２Ｅ３ 可中和α毒素的磷脂酶Ｃ 活性和溶血活性, 对α毒素致死性腹腔攻击的小鼠具有良好的被动保护作用。另外, 应用ＲＴＰＣＲ 技术, 从杂交瘤细胞株２Ｅ３ 中, 扩增出ｍＡｂ ＶＨ 和ＶＬ基因, 分别克隆至载体ｐＧＥＭＴ中。序列分析证实, ＶＨ 基因为３５７ ｂｐ, 编码１１９ 个氨基酸;ＶＬ 基因为３２４ ｂｐ, 编码１０８ 个氨基酸。计算机分析表明,ＶＨ 和ＶＬ基因均为新发现的基因序列, 符合功能性重排的鼠抗体可变区基因的特征。ＶＨ 和ＶＬ 基因分别属于鼠免疫球蛋白重链Ⅱ（ Ｂ） 和轻链κⅢ家族。