白藜芦醇抗肿瘤免疫的研究

白藜芦醇(resveratrol，Res)属非黄酮类多酚化合物，广泛存在于自然界种子植物中，多是常见的药用植物。它的生物学效应主要有抗肿瘤、抗炎、肝脏保护、神经保护、心血管保护、免疫调节作用等，其中最引人注目的是抗肿瘤作用。以往的研究多采用肿瘤细胞株进行体外实验，本文进行动物体内试验，观察Res的抗肿瘤效果。     

树突状细胞在胆囊癌组织内浸润的研究

目的通过对胆囊癌组织中树突状细胞浸润情况的研究,阐述树突状细胞与肿瘤免疫之间的关系。方法采用免疫组化SP法。结果树突状细胞在胆囊癌组织的浸润程度与年龄、性别和病理组织学类型无关,与病理分化程度呈负相关关系(P<005)。结论树突状细胞在胆囊癌组织的浸润程度与病理分化程度、Nevin分期、肝浸润及淋巴结转移存在密切的关系。树突状细胞的定量检测可作为估计胆囊癌预后的标志。     

氯霉素乙酰基转移酶双抗体夹心ELISA检测方法的建立

目的 建立氯霉素乙酰基转移酶（chloramphenicol acetyltransferase,CAT)双抗体夹心ELISA的实验室检测方法。方法 从质粒pBLCAT6经PCR扩增CAT基因序列，插入到原核表达质粒pGEX-2T中，在大肠埃希菌DH5α中诱导表达；以纯化的融合蛋白GST-CAT为抗原免疫实验用兔，得到的CAT抗血清进行生物素标记，并在此基础上利用生物素链和亲和素放大系统建立双抗体夹心ELISA法，构建不同YY1结合位点突变的HPV16LCRCAT报道质粒，体外瞬时转染真核细胞，提取胞质蛋白，以建立的方法进行CAT表达检测。结果 SDS-PAGE显示表达的GST-CAT融合蛋白相对分子质量约为54000；制备的CAT抗血清可有效地识别原核及哺乳动物细胞表达的CAT蛋白；在不同启动子及调节序列的控制下，利用建立的CAT检测技术证明在瞬时转染的细胞中可诱导2-8倍的CAT表达增强。结论 建立的双抗体夹心ELISA方法可敏感地反映上游序列的启动子活性，以及启动子调节序列变化对启动子活性的影响，使CAT作为报道基因的研究更为简单化。     

超声处理对羊瘙痒病脑组织中PrPSc聚集状态的影响

目的 研究超声处理对感染羊瘙痒症仓鼠脑组织中PrP^Sc聚集状态的影响，寻找产生PrP^Sc低聚体的条件。方法 裂解液制备脑组织提取物，用各种超声条件处理不同阶段的脑组织提取物；以蛋白酶消化后的Western blot方法和图象分析系统观测PrP^Sc蛋白的分布和聚集状态。结果 适当的超声处理(15s共30次)可增加脑组织匀浆上清中PrP^Sc含量1．29～1．58倍；同样条件下超声处理可明显增加羊瘙痒因子263K感染仓鼠脑组织匀浆上清中PrP蛋白总量，而对正常对照仓鼠脑组织匀浆上清中PrP蛋白总量影响不大；对经常规高速离心获得的PrP^Sc的超声处理显示约90％的PrP^Sc存在于离心上清液中。结论 对感染动物脑组织进行超声处理可增加PrP^Sc的提取量，利于实验室检测。适当的超声处理可破碎大的相对分子质量的PrP^Sc聚集物，产生小的相对分子质量的PrP^Sc产物。     

Relationship between serum or tissue ouabain and blood pressure in 1k1c hypert ensive rats

Objective To evaluate the role of endogenous ouabain (EO) in the development of hypertension and the characteristics of EO secretion in 1k1c (one kidney, one clipped) hypertensive rats. Methods EO content of serum and tissues in 1k1c hypertensive rats and normal control Sprague-Dawley (SD) rats was detected by the method of enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). The relationship between serum or tissue ouabain and blood pressure was analyzed in 1k1c hypertensive rats. Results The ouabain content of serum, heart, kidney, adrenal gland, pituitary and hypothalamus was significantly higher in 1k1c hypertensive rats than that in normal control SD rats (2.25, 2.63, 3.35, 40.37, 3.34, 15.7 μg/kg tissue in 1k1c hypertensive rats vs 1.12, 1.79, 1.73, 27.54, 1.83, 10.10 μg/kg tissue in control SD rats, respectively. P&lt;0.05 for all of these comparisons). The ouabain content of the adrenal gland and the hypothalamus was higher than that of other tissues or serum, both in 1k1c rats and in control SD rats. The EO content of serum, kidney and hypothalamus was significantly correlated with blood pressure in 1k1c hypertensive rats (r=0.59, 0.63, 0.52, respectively. P&lt;0.05). The ouabain content of heart, liver, adrenal gland and pituitary was not correlated with blood pressure. Conclusions EO might play an important role in the development of hypertension in 1k1c hypertensive rats. The adrenal gland may be a major source of EO and the hypothalamus-pituitary-adrenal axis may be involved in the regulation of EO secretion.     

白藜芦醇抑制胆囊癌细胞生长与诱导细胞凋亡的实验研究

目的:探讨白藜芦醇(Res)对胆囊癌细胞(GBC)和正常成纤维细胞(3T3)体外增殖的影响,进而观察Res对GBC和3T3细胞凋亡的影响.方法:MTT法测定肿瘤细胞生长抑制率;流式细胞术分析细胞周期,检测细胞凋亡;SABC法检测细胞bcl-2、c-myc、p53蛋白表达.结果:Res呈浓度依赖性抑制GBC细胞的生长与增殖(P＜0.01),抑制率最高可达54%.Res能明显诱导GBC细胞凋亡,凋亡率最高为30.52%;处理组较对照组G1期细胞由34.88%上升至55.47±3.95%,S期细胞减少8.41%～17.54%,呈明显的G0/G1期阻滞现象.GBC细胞的bcl-2、c-myc基因蛋白表达降低,而p53基因蛋白表达增强.结论:Res能通过诱导GBC细胞凋亡而抑制其生长与增殖,但对3T3细胞无此作用.     

IFN-α对SNI神经源性疼痛模型小鼠中的镇痛作用

目的:研究IFN-α2a在小鼠SNI神经痛模型中的镇痛作用。方法:采用SNI疼痛模型小鼠,以VonFrey Filaments刺激法和冷盘法测定腹腔给予IFN-α2a的镇痛作用,并测定阿片肽受体拮抗剂纳洛酮对其镇痛作用的阻断。结果:①IFN-α2a的给药剂量为1 000 U/g体重时,基本无镇痛作用;剂量为5 000 U/g体重时,给药后30 min有明显的镇痛作用,持续5-20 min;剂量为10 000 U/g时,镇痛作用可维持50-60 min。②纳洛酮可以完全阻断IFN-α2a的镇痛作用。结论:①IFN-α2a在小鼠SNI模型中具有镇痛作用,且呈剂量效应。②IFN-α的镇痛作用可能通过阿片受体传导。     

非小细胞肺癌血清及癌组织中EGFR蛋白定量检测

目的:探讨EGFR蛋白定量水平与非小细胞肺癌(NSCLC)的临床生物学行为及预后的关系.方法:采用双抗体夹心ELISA法定量检测30例NSCLC患者及17例良性肺疾病和健康对照者血清和组织中EGFR蛋白水平.结果:30例NSCLC患者血清和癌组织中EGFR蛋白水平升高(P<0.01),且EGFR蛋白水平与NSCLC患者TNM分期及淋巴结转移呈正相关(P<0.05).但NSCLC患者术前血清EG-FR蛋白水平与术后3 d及10 d的血清水平无统计学差异(P>0.05).结论:EGFR蛋白水平与NSCLC的发生、发展和转移密切相关,血清EGFR蛋白水平可作为评估NSCLC进展、复发和预后的有价值指标.     

干扰素-α对小鼠神经源性痛的镇痛作用

目的:研究干扰素-α(IFN-α)对神经源性痛的镇痛作用及可能机制,为临床治疗神经源性痛筛选新的、毒副作用小的镇痛药物奠定基础。方法:单侧L5/L6脊神经结扎痛模型小鼠腹腔注射不同剂量IFN-α(1.0,2.5和5.0×106U/kg)后,利用机械刺激和冷刺激诱发的痛觉超敏实验测定模型小鼠患侧脚掌给药前后的痛阈变化;同时,通过给药前30m in注射纳洛酮(1mg/kg)观察阿片受体拮抗剂对其镇痛作用的影响。结果:腹腔注射IFN-α可产生剂量依赖性镇痛作用,其中5.0和2.5×106U/kg IFN-α均可产生明显的镇痛作用,镇痛效应分别维持60和30 m in,而1.0×106U/kgIFN-α无明显的镇痛作用。IFN-α产生的镇痛效应可被阿片受体拮抗剂纳洛酮完全阻断。结论:IFN-α对小鼠神经源性痛具有镇痛作用,其镇痛效应可能通过阿片受体介导。