粉防己碱预处理对心肌缺血/再灌注损伤大鼠肿瘤坏死因子-α表达及核因子活化的影响

目的探讨粉防己碱预处理对心肌缺血/再灌注过程中大鼠肿瘤坏死因子-α表达及与核因子活化的影响以及相关关系。方法60只SD大鼠随机分为3组:缺血/再灌注损伤组、假手术组、粉防己碱治疗组,缺血/再灌注损伤组结扎大鼠左前降支造成心肌缺血30min后再灌注24h后处死大鼠;假手术组只穿针不结扎,余步骤同缺血/再灌注损伤组;粉防己碱治疗组在缺血前30min腹腔注射粉防己碱,余步骤同缺血/再灌注损伤组。24h后取心肌标本,用酶联免疫吸附法检测心肌组织中肿瘤坏死因子-α表达水平,凝胶电泳迁移率变化分析检测核因子的活性。结果粉防己碱组与缺血再灌注组相比肿瘤坏死因子-α表达水平明显减低(208.40±25.12 VS 306.65±17.78,P<0.01)而与假手术组相比表达明显增强(208.40±25.12 VS 61.45±9.20,P<0.01)。粉防己碱组核因子的活性明显低于缺血再灌注组(29.58±1.56 VS 40.33±4.39,P<0.01)而与假手术组无显著性差异(29.58±1.56 VS 30.09±3.46,P>0.05)。结论粉防己碱预处理可以使心肌缺血/再灌注损伤过程中肿瘤坏死因子-α生成明显减少,核因子的活化受到有效抑制,从而起到减轻心肌缺血/再灌注损伤的作用。     

脑钠素与心血管疾病

脑钠素(Brain natriuretice peptide BNP)是日本学者Sudon等于1998年从猪脑中分离出来的，主要由心脏分泌，它是继心钠素(ANP)之后发现的肽家族又一利钠多肽，它与ANP在结构、功能方面有许多相似之处，BNP具有强大的利尿、利钠、扩张血管、抑制醛固酮分泌及肾素活性等作用，在心血管方面的生理作用被许多研究者证实。     

重组人生长激素对心肌梗死大鼠心功能及心肌炎性因子表达的影响

目的 观察重组人生长激素(rhGH)对大鼠急性心肌梗死后心功能及心肌炎性因子表达的影响. 方法 结扎大鼠左冠状动脉前降支建立心肌梗死模型,将术后24 h存活的大鼠随机分为对照组和rhGH组,另设假手术组.rhGH组给予rhGH 2 mg.kg-1.d-1皮下注射,对照组和假手术组给予等体积的生理盐水皮下注射,4周后观察rhGH对大鼠心功能及心肌细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1p(IL-1p)、白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)mRNA表达的影响. 结果 与假手术组比较,对照组心肌组织中促炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-β和IL-10 mRNA表达(假手术组分别为0.10±0.02、0.08±0.01、0.18±0.01和0.14±0.05;梗死区分别为0.77±0.15、0.93±0.17、1.10±0.14和0.73±0.11;非梗死区分别为0.88±0.14、0.95±0.17、1.18±0.11和0.83±0.16)明显升高.与对照组比较,rhGH组心肌组织中TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达(梗死区分别为0.35±0.10、0.36±0.10、0.43±0.11;非梗死区分别为0.51±0.10、0.42±0.11、0.51±0.12)明显下降,IL-10 mRNA表达(梗死区为1.18±0.18;非梗死区为1.21±0.22)升高,P＜0.05.心脏超声显示rhGH组左室功能明显改善. 结论 早期rhGH治疗改善了心肌梗死大鼠心肌炎性因子表达和心脏功能.rhGH有效改善心功能与其降低心肌细胞促炎细胞因子和升高抗炎因子的作用有关.     

粉防己碱预处理对心肌缺血/再灌注损伤大鼠肿瘤坏死因子-α表达及核因子-κB活化的影响

目的 探讨粉防己碱预处理对心肌缺血/再灌注过程中大鼠肿瘤坏死因子-α表达及与核因子-кB活化的影响以及相关关系.方法 60只SD大鼠随机分为3组缺血/再灌注损伤组、假手术组、粉防己碱治疗组,缺血/再灌注损伤组结扎大鼠左前降支造成心肌缺血30 min后再灌注24 h后处死大鼠;假手术组只穿针不结扎,余步骤同缺血/再灌注损伤组;粉防己碱治疗组在缺血前30 min腹腔注射粉防己碱,余步骤同缺血/再灌注损伤组.24 h后取心肌标本,用酶联免疫吸附法检测心肌组织中肿瘤坏死因子-α表达水平,凝胶电泳迁移率变化分析检测核因子-κB的活性.结果 粉防己碱组与缺血再灌注组相比肿瘤坏死因子-α表达水平明显减低(208.40±25.12 VS 306.65±17.78,P＜0.01)而与假手术组相比表达明显增强(208.40±25.12 VS 61.45±9.20,P＜0.01).粉防己碱组核因子-κB的活性明显低于缺血再灌注组(29.58±1.56 VS 40.33±4.39,P＜0.01)而与假手术组无显著性差异(29.58±1.56 VS 30.09±3.46,P＞0.05).结论 粉防己碱预处理可以使心肌缺血/再灌注损伤过程中肿瘤坏死因子-α生成明显减少,核因子-кB的活化受到有效抑制,从而起到减轻心肌缺血/再灌注损伤的作用.     

肠道菌群代谢产物在心血管疾病中的作用及机制研究

心血管疾病(cardiovascular disease, CVD)是严重危害人类健康的重大疾病。最新研究发现肠道菌群通过多种机制参与了CVD的发生和发展,其引起的代谢产物紊乱是主要的作用机制。本文着重介绍肠道菌群代谢产物在CVD发生中的作用及机制,以期更好地了解肠道菌群与CVD间的关联性,为CVD微生物标志物的发现及临床上CVD的精准干预治疗起到积极的推动作用。     

低强度游泳运动对自发性高血压大鼠左心室重构的影响

目的观察运动训练对自发性高血压大鼠（SHR）左心室重构的影响。 方法将20只8周龄雄性SHR按随机数字表法分为高血压对照组和高血压运动组，每组10只；另选取8周龄健康雄性Wistar大鼠10只作为正常对照组。高血压运动组大鼠进行为期12周低强度的无负重游泳运动，每周6次、每次60min；高血压对照组和正常对照组大鼠仅常规饲养，不进行任何训练。3组大鼠每周测量1次血压，运动12周后ELISA检测血清中去甲肾上腺素（NE）和血管紧张素Ⅱ（ANGⅡ）水平。组织学检测左心室心肌形态学的变化及心肌细胞直径，天狼星红染色检测左心室胶原沉积，半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫印迹检测重塑的左心室心肌组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)，白介素-6(IL-6)，白介素-1β(IL-1β)和转化生长因子β1(TGF-β1)的表达。 结果入组12周后，高血压运动组的收缩压和舒张压分别为（150.6±6.7）mmHg和（91.6±7.1）mmHg，与组内入组后当天和高血压对照组入组12周后比较，均显著下降（P<0.05），但与正常对照组比较，差异仍有统计学意义（P<0.05）。入组12周后，高血压运动组的LVW/BW、NE和ANGⅡ水平显著低于高血压对照组大鼠（P<0.05），但仍显著高于正常对照组大鼠（P<0.05）；高血压运动组和高血压对照组大鼠的左心室心肌细胞直径均显著大于正常对照组（P<0.05），而高血压对照组的左心室心肌细胞直径亦大于高血压运动组（P<0.05）；高血压运动组和高血压对照组大鼠的胶原容积分数(CVF)值均显著高于正常对照组(P<0.05)，而高血压对照组的CVF值亦显著高于高血压运动组(P<0.05)。入组12周后，高血压运动组和高血压对照组重塑的左心室心肌中TNF-α，IL-6，IL-1β和TGF-β1的mRNA及蛋白的表达均显著高于正常对照组（P<0.05）；高血压运动组重塑的左心室心肌中TNF-α，IL-6，IL-1β和TGF-β1的mRNA及蛋白的表达均显著低于高血压对照组（P<0.05）。 结论游泳运动可显著降低SHR的血压水平，改善SHR大鼠的左心室重构，其改善左心室重构的机制不仅与降低交感神经与肾素-血管紧张素系统的活性有关，还与降低细胞因子TNF-α，IL-6，IL-1β和TGF-β1的表达有关。     

咖啡酸苯乙酯对激活的大鼠血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的探讨脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）激活血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMC）后,咖啡酸苯乙酯（caffeic acid phenethyl ester,CAPE）对细胞过度增殖的影响。方法采用不同浓度的CAPE处理LPS激活的VSMC。MTT法用于检测细胞的生长情况;免疫细胞化学法检测增殖核抗原（PCNA）和存活素（Survivin）蛋白的阳性率;流式细胞仪检测细胞周期分布。结果5、10、20、40、80 mg/L CAPE处理LPS激活的VSMC后,MTT检测发现细胞的生长明显受到抑制并呈剂量和时间依赖;VSMC经CAPE处理72 h后,细胞中PCNA和Survivin蛋白阳性表达率随药物剂量增加而显著降低（P<0.05）;细胞周期分析表明5、10、20 mg/L CAPE处理VSMC 24 h后,对照组和实验组G0/G1期细胞百分率分别为（40±4.3）%和（52±6）%,（65±1）%,（76±4）%,S期细胞百分率由对照组的（32.4%±2.6）%逐渐下降20 mg/L组的（11.2%±1.4）%,呈剂量依赖性（P<0.05）。结论CAPE可能通过调控细胞周期,减少PCNA和Survivin蛋白的表达而发挥细胞增殖抑制作用,其效能与作用时间和药物剂量存在一定的相关性。     

GFP基因转染示踪成肌细胞植入体内的转归

目的实现绿色荧光蛋白(GFP)报告基因在成肌细胞中高效稳定持久的表达,观察成肌细胞作为基因的载体细胞植入SD大鼠体内后的转归。方法构建携带GFP的逆转录病毒载体(pLgXSN),经PT67包装,G418筛选得到稳定的产毒克隆,用含GFP的病毒上清感染成肌细胞。被感染的成肌细胞植入同种动物的后肢的肌肉内,观察其在同种动物体内的转归。于术后4周取动物后肢肌肉,在共聚焦显微镜下观察GFP的表达,HE染色观察组织的结构。结果经双酶切鉴定及测序鉴定证实重组逆转录病毒载体构建成功。转染成肌细胞后48h,在共聚焦显微镜的激光激发下可观察到明亮的绿色荧光,转染效率33%,G418筛选后转染效率达90%。术后4周,在HE染色及共聚焦显微镜下观察可见SD大鼠骨骼肌中转基因的GFP荧光阳性的成肌细胞已与宿主的成肌细胞融合。结论构建的重组逆转录病毒载体,能在成肌细胞中稳定持久的表达,成肌细胞可作为生物细胞工程治疗的载体细胞。     

人胰岛素样生长因子Ⅰ基因修饰成肌细胞移植心肌梗死大鼠心肌细胞胰岛素样生长因子Ⅰ及端粒酶反转录酶mRNA的表达

目的：检测人胰岛素样生长因子Ⅰ基因修饰的鼠骨骼肌成肌细胞移植后，心肌梗死大鼠血浆及心肌组织内胰岛素样生长因子Ⅰ蛋白浓度的变化，以及心肌细胞内胰岛素样生长因子Ⅰ和端粒酶反转录酶mRNA水平的表达。 方法：人胰岛素样生长因子Ⅰ基因修饰的鼠骨骼肌成肌细胞、未转染的正常鼠骨骼肌成肌细胞均由实验室前期制备。健康雄性SD大鼠90只，取12只作为假手术组，剩余大鼠结扎冠状动脉左前降支建立心肌梗死模型，结扎后24 h存活36只，随机分为对照组和实验组，18只/组。造模后24 h，实验组在动物后肢局部分多点注射总量为0.1 mL的人胰岛素样生长因子Ⅰ基因修饰的鼠骨骼肌成肌细胞悬液,（2~4）×1010 L-1细胞；对照组和假手术组给予等量未转染的正常鼠骨骼肌成肌细胞悬液。应用ELISA法检测血浆和心肌组织胰岛素样生长因子Ⅰ的表达，RT-PCR检测心肌细胞中胰岛素样生长因子Ⅰ与端粒酶反转录酶mRNA水平。 结果：①细胞移植后1，2，4周，假手术组血浆和心肌组织内鼠胰岛素样生长因子Ⅰ的表达无明显变化（P > 0.05）；与假手术组比较，实验组和对照组血浆中鼠胰岛素样生长因子Ⅰ的质量浓度均显著降低（P < 0.01），心肌组织中鼠胰岛素样生长因子Ⅰ的含量均明显升高，于第2周达峰值（P < 0.01），且实验组较对照组升高更为显著（P < 0.01）。②细胞移植后1，2，4周，假手术组和对照组大鼠血浆和心肌组织内均未检测到人胰岛素样生长因子Ⅰ的表达；实验组于第1周即表达人胰岛素样生长因子Ⅰ，含量显著高于其余两组（P < 0.01）。③细胞移植后第1周，实验组和对照组心肌细胞鼠胰岛素样生长因子ⅠmRNA相对表达量明显高于假手术组（P < 0.01）；至第2周实验组达峰值，显著高于对照组（P < 0.01），然后逐步下降。实验组和对照组心肌细胞端粒酶反转录酶mRNA的表达均逐渐呈升高趋势，且实验组更为显著（P < 0.01）。 结论：人胰岛素样生长因子Ⅰ基因修饰的鼠骨骼肌成肌细胞植入心肌梗死大鼠体内1周后，能有效合成和分泌胰岛素样生长因子Ⅰ，明显促进心肌梗死早期大鼠心肌细胞鼠胰岛素样生长因子Ⅰ及端粒酶反转录酶mRNA的表达，同时可持续促进心肌及全身其他组织鼠胰岛素样生长因子Ⅰ的分泌。     

人胰岛素样生长因子Ⅰ基因修饰成肌细胞移植心肌梗死大鼠心肌细胞胰岛素样生长因子Ⅰ及端粒酶反转录酶mRNA的表达

目的:检测人胰岛素样生长因子Ⅰ基因修饰的鼠骨骼肌成肌细胞移植后,心肌梗死大鼠血浆及心肌组织内胰岛素样生长因子Ⅰ蛋白浓度的变化,以及心肌细胞内胰岛素样生长因子Ⅰ和端粒酶反转录酶mRNA水平的表达。方法:人胰岛素样生长因子Ⅰ基因修饰的鼠骨骼肌成肌细胞、未转染的正常鼠骨骼肌成肌细胞均由实验室前期制备。健康雄性SD大鼠90只,取12只作为假手术组,剩余大鼠结扎冠状动脉左前降支建立心肌梗死模型,结扎后24h存活36只,随机分为对照组和实验组,18只/组。造模后24h,实验组在动物后肢局部分多点注射总量为0.1mL的人胰岛素样生长因子Ⅰ基因修饰的鼠骨骼肌成肌细胞悬液,(2~4)×1010L-1细胞;对照组和假手术组给予等量未转染的正常鼠骨骼肌成肌细胞悬液。应用ELISA法检测血浆和心肌组织胰岛素样生长因子Ⅰ的表达,RT-PCR检测心肌细胞中胰岛素样生长因子Ⅰ与端粒酶反转录酶mRNA水平。结果:①细胞移植后1,2,4周,假手术组血浆和心肌组织内鼠胰岛素样生长因子Ⅰ的表达无明显变化(P>0.05);与假手术组比较,实验组和对照组血浆中鼠胰岛素样生长因子Ⅰ的质量浓度均显著降低(P<0.01),心肌组织中鼠胰岛素样生长因子Ⅰ的含量均明显升高,于第2周达峰值(P<0.01),且实验组较对照组升高更为显著(P<0.01)。②细胞移植后1,2,4周,假手术组和对照组大鼠血浆和心肌组织内均未检测到人胰岛素样生长因子Ⅰ的表达;实验组于第1周即表达人胰岛素样生长因子Ⅰ,含量显著高于其余两组(P<0.01)。③细胞移植后第1周,实验组和对照组心肌细胞鼠胰岛素样生长因子ⅠmRNA相对表达量明显高于假手术组(P<0.01);至第2周实验组达峰值,显著高于对照组(P<0.01),然后逐步下降。实验组和对照组心肌细胞端粒酶反转录酶mRNA的表达均逐渐呈升高趋势,且实验组更为显著(P<0.01)。结论:人胰岛素样生长因子Ⅰ基因修饰的鼠骨骼肌成肌细胞植入心肌梗死大鼠体内1周后,能有效合成和分泌胰岛素样生长因子Ⅰ,明显促进心肌梗死早期大鼠心肌细胞鼠胰岛素样生长因子Ⅰ及端粒酶反转录酶mRNA的表达,同时可持续促进心肌及全身其他组织鼠胰岛素样生长因子Ⅰ的分泌。