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1.
C基因截短的HBV复制与包装   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 探讨C基因截短型HBV变异体的复制与包装。方法 采用分子克隆、人工定点突变等技术构建C基因截短型HBV变异体质粒,用脂质体法转染HepG2细胞,提取细胞内及培养上清液中DNA分别进行Southem杂交,PCR及实时定量荧光PCR分析。结果 经DNA测序及酶切鉴定证实C基因截短型HBV质粒载体构建成功;C基因截短型HBV为复制缺损型,与辅助质粒共转染HepG2细胞,可在细胞内及培养上清液中检测到HBV各种DNA构型;DNA定量分析提示C基因截短型HBV的包装效率较野生型HBV提高3~40倍。结论 C基因截短型HBV变异体为复制缺损型,单独转染后不能在肝细胞内包装与复制,但在缺失包装信号ε的相应辅助病毒辅助下可有效复制并包装成子代病毒颗粒分泌到胞外,且包装效率大大提高。  相似文献   
2.
目的 检测和研究丙型肝炎病毒 (hepatitisCvirus,HCV)核心蛋白在患者外周血单个核细胞 (peripheralbloodmononuclearcells ,PBMC)内核表达的意义 ,并探讨其与临床的关系。方法 对 6 6例慢性丙型肝炎患者PBMC标本进行免疫组化检测 ,并将HCV蛋白抗原定位分布情况与患者临床状况进行比较分析 ,对其中 2 7例患者PBMC进行HCVRNA和HCVAg的平行检测和分析。结果 免疫组化结果显示 ,慢性丙型肝炎患者PBMCHCVAg(core +NS3)阳性检出率为 77 2 7% (5 1 6 6 )。结果还证实 ,HCV核心蛋白均定位于胞核内 ,且呈强表达 ;NS3蛋白主要定位于胞质内 ,呈弱表达。当进行HCVAg在PBMC内定位情况与患者临床状况比较分析时显示 ,病情较重患者PBMC内核心蛋白表达阳性率 (35 2 9% )明显高于病情较轻者 (5 88% ) (P <0 0 0 1)。结论 HCV核心蛋白在PBMC内核表达与患者临床状况相关 ,提示其可能是丙型肝炎慢性化的一个指标 ,并可能在肝硬化和肝癌发生上起一定作用  相似文献   
3.
目的 了解未经拉米夫定及干扰素抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者中HBV多聚酶YMDD变异情况。方法 应用错配PCR扩增方法检测病人血清HBV的YMDD位点,选择65例病史超过半年以上、肝功能异常、HBV DNA阳性的慢性乙型肝炎患者。结果 在65例患者中,YMDD变异阳性6例(9.07%),阴性59例,6例变异中2例为YIDD阳性,其中1例为YMDD野毒株和变异株混合存在,4例为YYDD阳性,其中1例为YMDD野毒株和变异株混合存在。结论 本检测方法简便、实用,在未经抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者中可存在YMDD变异株,其与野生株一样是自然存在的。  相似文献   
4.
以乙型肝炎病毒为载体的基因治疗研究   总被引:6,自引:1,他引:6  
目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV)作为肝靶向性基因治疗载体的可能性。方法 用外源报告基因绿色荧光蛋白(GFP)取代HBV S基因读码框构建重组HBV载体,通过脂质体转染HepG2细胞,荧光显微镜下观察外源基因的表达,半巢式聚合酶链反应(PCR)检测细胞核内HBV 共价闭合环状DNA构型,常规PCR和Southern杂交检测上清液重组病毒DNA。结累 携带外源基因GFP的重组HBV载体能够在肝细胞内表达外源蛋白,此重组载体为复制缺损型,单独转染后不能在肝细胞包装与复制,在缺失包装信号ε的辅助HBV质粒下可被包装成携带外源基因的成熟重组HBV颗粒并分泌到胞外。结论 HBV可被改造成肝靶向性基因治疗载体。  相似文献   
5.
探讨肝病患者血清透明质酸(HA),Ⅲ型前胶原(PCⅢ),型胶原(CⅣ)及脯氨酸肽酶(PLD)水平与肝纤维化程度的关系。用酶联免疫(ELISA)法及生化比色法检测225例各种肝病患者血清中HA、PCⅢ、CⅣ及PLD水平,并与肝活检病理炎症分级和纤维化分期相比较。四项指标与肝组织炎症坏死及纤维化程度均呈显著相关(P〈0.05)。HA、PCⅢ及CⅣ与肝纤维化相关性高于炎症,PLD与炎症的相关性高于纤维化。血清学指标与肝组织病理病变程度一致,联合检测肝病患者血清HA、PCⅢ、CⅣ及PLD水平,既可反映肝纤维化严重程度,又能了解肝坏死情况,为临床诊断治疗提供参考。  相似文献   
6.
蛋白芯片技术联合检测肿瘤标志物的临床应用及意义   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的探讨多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统对于肿瘤检测的临床应用价值。方法采用多肿瘤标志物蛋自芯片检测仪检测168例健康的体检者,211例各期各种恶性肿瘤患者和36例肿瘤手术后患者血清中的12种肿瘤标本物进行对比分析。结果168例健康体检者用蛋白芯片检测有5例受检者出现异常结果,后证明为癌症早期;已明确诊断的各期肿瘤患者中有148例次指标结果异常,与临床及病理诊断的符合率为96.32%,追踪观察36例原发性肝癌手术前后检测结果,19例1年内结果正常,17例结果异常。结论多肿瘤标志物蛋白芯片检测系统对恶性肿瘤的诊断具有参考价值,可广泛用于肿瘤的早期筛查、预后和疗效观察。  相似文献   
7.
RNAi靶向抑制HBV复制和HBeAg表达   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的观察靶向HBVC基因区的RNA干扰对HBV复制的抑制作用。方法选择HBV基因组C区的Nt2021-2049作为靶序列,合成相应的正、反义寡核苷酸,退火后形成双链,克隆入shRNA表达质粒,将得到的质粒与HBV质粒共转染HepG2细胞,观察HepG2细胞中HBV的受抑制情况。结果病毒复制及HBeAg的表达明显受到抑制。结论所选靶区通过RNA干扰可有效抑制HBV复制。  相似文献   
8.
目的:探讨检测粪便中血红蛋白(Hb)和转铁蛋白(TF)对诊断消化道出血性疾病及结直肠癌筛查中的临床应用价值。方法分别采用联合免疫法、单克隆抗体法和 Quick chaser 法对有消化道出血性疾病的患者粪便样本进行检测,同时结合患者临床资料,对检测结果的一致性程度进行综合分析,初步评估其临床应用价值。结果联合免疫法、单克隆抗体法和 Quick chaser 法检测血红蛋白的灵敏度分别为0.2、0.4和2μg/mL,单克隆抗体法仅对人的血红蛋白发生反应,联合免疫法和 Quick chaser 法对人和动物的铁蛋白和血红蛋白均发生反应。结论联合免疫法灵敏度高、特异性强,对于诊断消化道出血性疾病及结直肠癌的诊断具有重要的参考价值。  相似文献   
9.
目的探索叶下珠、干扰素α-2b(IFNα-2b)不同组方治疗慢性低酶型乙型肝炎的临床治疗效果。方法用叶下珠片治疗低酶型乙型肝炎152例,3个月内ALT升高达1000U/L以上者,随机分为叶下珠继续治疗组(Ⅱa组),加用IFNα-2b组(Ⅱb组),改用IFNα-2b组(Ⅱc组),仍属低酶者设为对照组(Ⅰ组)继续应用叶下珠,Ⅰ组、Ⅱ组所有患者在相同条件下,采用不同方案继续治疗6个月。结果Ⅱa、Ⅱb、Ⅱc组均在ALT复常,HBeAg阴转,抗-HBe阳转,HBVDNA阴转方面优于Ⅰ组(P<0.05);Ⅱb、Ⅱc组明显优于Ⅰ组(P<0.05);Ⅱb、Ⅱc之间无差异(P>0.05)。结论慢性低酶型乙型肝炎患者应用叶下珠初始治疗,在ALT升高达100U/L以上,适时加用或改用IFNα-2b治疗慢性乙型肝炎可获得满意的临床疗效。  相似文献   
10.
C基因截短突变体抗乙型肝炎病毒作用机制的研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的 探讨C基因截短突变体抗乙型肝炎病毒(HBV)的作用机制。方法 构建C基因截短的真核表达载体pcDNA3-△C及野生型C基因真核表达载体pcDNA3-C,瞬时转染HepG2细胞,用SDSPAGE western blot检测pcDNA3-△C、pcDNA3-C的蛋白表达。pcDNA3-△C与adwR9共转染HepG2细胞,以pcDNA3与adwR9为对照,用荧光定量PCR检测培养上清液及细胞内病毒量,用Native western blot分析C基因截短蛋白干扰核心颗粒形成。结果重组载体pcDNA3-△C、pcDNA3-C均可表达,DcDNA3-△C与adwR9共转染组上清液和细胞内病毒量较对照组降低,pcDNA3-△C和pcDNA3-C共转染组Native western blot条带与pcDNA3和pcDNA3-C共转染组条带相比较明显淡。结论 C基因截短突变体可干扰核心颗粒的形成,导致HBV复制下降。  相似文献   
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