PCR－RFLP用于Ⅰ型脊髓灰质炎病毒野毒株与疫苗相关株的鉴别

利用互补于Ⅰ型脊髓灰质炎病毒ＶＰ１区的一对引物，扩增病毒核酸中约２６８ｂｐ的片段。产物经ＨａｅⅢ、ＲｓａⅠ、ＸｂａⅠ三种限制性内切酶切割后，用２％琼脂糖凝胶电泳检测，观察各分离株与ＳａｂｉｎⅠ型株酶切图谱的异同。在所检测的１３株病毒分离株中，只有１株的酶切图谱与ＳａｂｉｎⅠ型株的相同，为疫苗相关株，其它的１２株均为野毒株。本实验的结果表明从不同地区、不同年份所得的Ⅰ型脊髓灰质炎病毒分离株的碱基组成是有差异的。     

CEA单抗轻重链可变区基因的克隆和序列分析

从分泌具有高亲和力和特异性的小鼠抗癌胚抗原（ＣＥＡ）的单抗杂交瘤细胞株Ｃ５０中提取总ＲＮＡ，通过ＲＴＰＣＲ扩增并克隆了抗体的轻、重链可变区基因。核苷酸序列分析表明所克隆基因分别为抗体轻、重链可变区基因。     

原核分泌型表达载体的构建及癌胚抗原单链抗体的表达

目的构建分泌型载体并表达癌胚抗原单链抗体。方法以ｐＧＥＭ－１１ｚｆ（＋）为基础，插入化学合成的１４个寡核苷酸片段（共１７６ｂｐ），构建成含核糖体结合位点（ＲＢＳ）、翻译起始点（ＡＴＧ）、果胶酶信号肽基因（ｐｅｌＢ）和翻译终止点（ＴＡＡ）的分泌型表达载体（ＲＰＹ）。化学合成带有抗体重、轻链可变区基因插入位点和惰性连接序列的８２ｂｐ片段，并克隆到ＲＰＹｐｅｌＢ信号肽的下游，构建成抗体分泌型表达载体ＲＰＹＡ。将ＣＥＡ单抗重、轻链可变区基因（ＶＨ、ＶＬ）插入到ＲＰＹＡ的相应位点，转化大肠杆菌ＨＢ２１５１，ＩＰＴＧ诱导表达。结果序列测定表明ＲＰＹＡ的序列与原设计序列一致，免疫印迹实验表明表达产物具有ＣＥＡ结合活性，分子量为２．６×１０３，胞浆内结合有ｐｅｌＢ信号肽的表达产物分子量为３２×１０３。结论ＲＰＹＡ载体可用于单链抗体基因的表达     

抗胰岛素样生长因子Ⅰ型受体单克隆抗体m590抑制乳腺癌细胞增生和迁移

目的 探讨抗胰岛素样生长因子Ⅰ型受体(IGF-IR)抗体,m590,抑制乳腺癌细胞增生、迁移及其机制.方法 免疫组织化学染色30例乳腺浸润性导管癌标本;免疫印迹法、免疫荧光细胞染色及其他试验检测m590 对MCF-7细胞的作用及其机制.结果 87％的乳腺浸润性导管癌高表达IGF-IR;m590抑制胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-I)诱导的细胞外调节蛋白激酶(ERK)和蛋白激酶B(Akt)磷酸化以及细胞骨架蛋白(F-actin)和细胞骨架黏合班蛋白(Vinculin)在细胞内的分布,使细胞增生、迁移和黏附分别降低至58％、56％和55％,并促进细胞凋亡;M590 与赫赛汀联用抑制IGF-I诱导的ERK和 Akt 磷酸化,使细胞增生降低 76％.结论 m590 是一个有效抑制乳腺癌细胞增生、迁移和黏附的抗IGF-IR抗体.     

逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）用于鉴别脊髓灰质炎病毒和其它肠道病毒

用一对选自脊髓灰质炎病毒及一对由Ｈｙｙｐｉａ所设计的细小ＲＮＡ病毒核酸５’端非编码区的引物，逆转录并扩增脊髓灰质炎病毒及其它肠道病毒的核酸，从而把脊髓灰质炎病毒和其它非脊髓灰质炎肠道病毒进行鉴别。１０５份被血清中和试验定型为脊髓灰质炎病毒的标本，逆转录一聚合酶链反应（ＲＴ─ＰＣＲ）的结果亦定为脊髓灰质炎病毒，灵敏度为１ｍ％；１３３份被血清中和试验定为非脊髓灰质炎肠道病毒的标本，均被判定为非脊髓灰质炎病毒，特异度为１００％。该方法可用于脊髓灰质炎病毒的检测及脊髓灰质炎病毒与其它非脊髓灰质炎肠道病毒的鉴别。