荧光定量PCR检测VEGF-C、CEACAM-1在胃肠肿瘤中的表达及意义

目的 观察血管内皮生长因子C(VEGF-C)和癌胚抗原相关黏附分子1(CEACAM-1)在消化道癌组织和癌旁组织中的表达情况,探讨其表达与肿瘤分期的关系,与术前血清癌胚抗原(CEA)水平一起比较其在肿瘤诊断中的价值.方法采用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测53例消化道肿瘤及相应癌旁对照组织中VEGF-C、CEACAM...     

pcDNA3.1(+)-LYVE-1真核表达质粒的构建及其在COS-7细胞中的表达

目的 构建人淋巴管内皮细胞特异标志物LYVE-1融合基因表达质粒,观察其在COS-7细胞中的表达,为进一步探讨该标志物在肿瘤淋巴转移中的作用提供工具.方法 从本院结肠癌根治术患者术所取组织中的淋巴结抽提总RNA,RT-PCR扩增LYVE-1基因片段,并将其插入pMD19-T Simple Vector进行测序,鉴定正确后构建pcDNA3.1(+)-LYVE-1并转染COS-7细胞,RT-PCR、Western印迹检测目的 蛋白表达,间接免疫荧光检测该基因表达在COS-7细胞上.结果 成功获取了人淋巴管内皮细胞特异标志物LYVE-1全长cDNA,构建了其真核表达载体pcDNA3.1(+)-LYVE-1,转染COS-7细胞后检测出目的 蛋白的表达,并且证明该基因表达在细胞上.结论 成功构建了pcDNA3.1(+)-LYVE-1重组质粒,为进一步研究LYVE-1在肿瘤淋巴管转移中的功能提供了重要的实验材料.     

实时荧光定量PCR检测CD44和RHAMM在胃肠肿瘤中的表达研究

目的探讨CD44和透明质酸介导运动的受体（RHAMM）在胃肠肿瘤组织中的表达，研究其在肿瘤诊断中的价值。方法收集病理分期为Ⅱ～Ⅲ级胃肠道恶性肿瘤样本30例，并通过实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）对CD44和RHAMM进行定量分析。结果CD44和RHAMM在癌组织中相对于管家基因GAPDH的表达中位数分别为1．587和1．074，正常组织中分别为0．704和0．098；肿瘤组织中，区域淋巴结转移组的CD44拷贝数／GAPDH拷贝数的中位数为1．650，未转移组相应的均值为1．431；区域淋巴结转移组的RHAMM拷贝数／GAPDH拷贝数的中位数为1．301，未转移组的中位数为1．064。区域淋巴结转移样本其CD44和RHAMM表达同步增高，肿瘤组织中CD44和RHAMM之间的相关系数（r）为0．96。结论胃肠肿瘤中的CD44和RHAMM表达高于正常组织，且两者表达具相关性。CD44和RHAMM的表达量增加的多少不足以判断肿瘤是否有区域淋巴转移，CD44和RHAMM同时增高可能预示肿瘤的淋巴转移。     

siRNA干扰Ezrin基因对人脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的探讨细胞膜与细胞骨架连接蛋白埃兹（Ezrin）对人脐静脉内皮细胞生长和转移能力的影响。方法培养人脐静脉内皮细胞,选择3对小干扰RNA（siRNA）序列下调Ezrin的表达,实时定量PCR和Western-blot印迹法分别检测Ezrin mRNA和蛋白表达水平的变化。BrdU ELISA法检测Ezrin siRNA干扰后细胞增殖能力的改变,伤口愈合实验检测Ezrin siRNA干扰后细胞迁移能力的变化,流式细胞术检测Ezrin siRNA干扰后细胞凋亡能力。结果实时定量PCR和Western-blot印迹结果显示,siRNA干扰后Ezrin的基因和蛋白水平均显著下调;BrdU法显示Ezrin siRNA干扰后细胞生长速率降低（P〈0.05）,划痕实验显示Ezrin siRNA干扰后细胞迁移率降低（P〈0.05）,流式细胞仪检测显示Ezrin siRNA干扰后细胞凋亡率升高。结论 Ezrin蛋白可影响脐静脉内皮细胞的增殖和迁移能力,推测其在血管功能和肿瘤研究中可能具有重要意义。     

siRNA干扰Ezrin基因对人脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的探讨细胞膜与细胞骨架连接蛋白埃兹(Ezrin)对人脐静脉内皮细胞生长和转移能力的影响。方法培养人脐静脉内皮细胞,选择3对小干扰RNA(siRNA)序列下调Ezrin的表达,实时定量PCR和Western-blot印迹法分别检测Ezrin mRNA和蛋白表达水平的变化。BrdU ELISA法检测Ezrin siRNA干扰后细胞增殖能力的改变,伤口愈合实验检测Ezrin siRNA干扰后细胞迁移能力的变化,流式细胞术检测Ezrin siRNA干扰后细胞凋亡能力。结果实时定量PCR和Western-blot印迹结果显示,siRNA干扰后Ezrin的基因和蛋白水平均显著下调;BrdU法显示Ezrin siRNA干扰后细胞生长速率降低(P<0.05),划痕实验显示Ezrin siRNA干扰后细胞迁移率降低(P<0.05),流式细胞仪检测显示Ezrin siRNA干扰后细胞凋亡率升高。结论 Ezrin蛋白可影响脐静脉内皮细胞的增殖和迁移能力,推测其在血管功能和肿瘤研究中可能具有重要意义。     

应用高效毛细管电泳筛检和鉴定血清中M蛋白

目的:应用毛细管区带电泳法(CZE)和毛细管区带电泳-免疫削减法(IS-CZE)对M蛋白进行筛检和鉴定。方法:运用CZE和琼脂糖凝胶电泳(AGE)分别对532例血清进行M蛋白的筛检;用IS-CZE和免疫固定电泳(IFE)对M蛋白阳性的64例标本进行免疫分型。结果:与AGE相比较,CZE筛检M蛋白的阳性率为96.9%;与IFE相比较,IS-CZE分型的符合率为89.1%;自包被固相抗体能满足试验要求。结论:毛细管区带电泳可高效、快速完成M蛋白的筛检和鉴定,适合临床推广。     

原代人脐静脉内皮细胞分离和培养方法的改进

目的建立一套高效、方便、可靠的脐静脉内皮细胞的体外分离和培养方法。方法取剖腹产新生婴儿脐带,加入Ⅰ型胶原酶消化分离人脐静脉内皮细胞,内皮专用培养基EGM-2培养传代。应用相差显微镜观察细胞形态。DiL-Ac-LDL染色证实细胞具有内皮功能。免疫荧光染色证明新分离细胞表达FⅧ相关抗原。流式细胞仪检测细胞表面表达CD31。结果原代培养细胞培养10～15d左右长成单层,细胞呈多角形,铺路石样排列。DiL-Ac-LDL染色阳性,证实细胞具内皮吞噬功能。免疫荧光检测证明细胞特异性表达FⅧ相关抗原。流式细胞仪检测证明细胞表面高表达CD31。结论通过酶灌注法消化脐静脉血管获得细胞,操作简便、高效,EGM-2培养基可保证内皮细胞具有较高纯度,细胞形态学观察和细胞生物学鉴定证明获得人脐静脉血管内皮细胞。     

原代人脐静脉内皮细胞分离和培养方法的改进

目的建立一套高效、方便、可靠的脐静脉内皮细胞的体外分离和培养方法。方法取剖腹产新生婴儿脐带,加入Ⅰ型胶原酶消化分离人脐静脉内皮细胞,内皮专用培养基EGM-2培养传代。应用相差显微镜观察细胞形态。DiL-Ac-LDL染色证实细胞具有内皮功能。免疫荧光染色证明新分离细胞表达FⅧ相关抗原。流式细胞仪检测细胞表面表达CD31。结果原代培养细胞培养10～15d左右长成单层,细胞呈多角形,铺路石样排列。DiL-Ac-LDL染色阳性,证实细胞具内皮吞噬功能。免疫荧光检测证明细胞特异性表达FⅧ相关抗原。流式细胞仪检测证明细胞表面高表达CD31。结论通过酶灌注法消化脐静脉血管获得细胞,操作简便、高效,EGM-2培养基可保证内皮细胞具有较高纯度,细胞形态学观察和细胞生物学鉴定证明获得人脐静脉血管内皮细胞。     

CHB患者血清miRNA-122和miRNA-155检测的价值

目的探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者血清微小RNA(miRNA)-122和miRNA-155水平与乙型肝炎病毒(HBV)复制情况、抗病毒治疗及耐药基因突变等的关系。方法检测35例CHB患者和24名体检健康者的血清mi RNA-122、mi RNA-155、HBV DNA载量、乙型肝炎血清学标志物[乙型肝炎表面抗原(HBs Ag)、乙型肝炎表面抗体(HBsAb)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、乙型肝炎e抗体(HBeAb)、乙型肝炎核心抗体(HBcAb)]、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、HBV耐药基因突变、HBV基因型等指标。采用Spearman相关分析评估各项目间的相关性。结果 CHB组血清miRNA-122相对表达量明显高于正常对照组(P0.05),血清miRNA-155表达量明显低于正常对照组(P0.05)。根据是否使用核苷类药物进行抗病毒治疗将CHB患者分为治疗组(17例)和非治疗组(18例)。Spearman相关分析结果显示,非治疗组血清mi RNA-122相对表达量与乙型肝炎血清学标志物模式呈正相关(r=0.73,P=0.00),与HBV DNA载量及HBsAg、HBeAg、ALT水平均呈正相关(r值分别为0.69、0.74、0.53、0.48,P0.05),与年龄呈负相关(r=-0.58,P=0.01)。治疗组血清mi RNA-122相对表达量与HBs Ag水平呈正相关(r=0.54,P0.05),血清mi RNA-155相对表达量与HBV DNA载量呈负相关(r=-0.54,P0.05)。根据是否检测到HBV DNA将治疗组CHB患者分为HBV DNA阴性组和HBV DNA阳性组,HBV DNA阳性组血清mi RNA-155相对表达量明显低于HBV DNA阴性组(P0.05)。结论 CHB患者血清miRNA-122与乙型肝炎相关指标HBV DNA、HBsAg、HBeAg、ALT密切相关,或可用于评价HBV复制情况和CHB的严重程度;血清mi RNA-155与HBV DNA载量密切相关,或可用于预测和评价CHB的疗效。