基于PNO基因序列分析隐孢子虫种系发育关系

本文以核基因组的功能蛋白丙酮酸∶NADP^＋氧化还原酶（pyruvate∶NADP^＋ oxidoreductase,PNO）编码基因作为研究对象,对本实验室分离保存的隐孢子虫虫株进行扩增测序,用ClustalX 1.81对扩增序列与GenBank相关参考序列进行比对,用Paup4.0程序中邻接法（Neighbor-joining method,NJ）、最大简约法（Parsimony,MP）和最大似然法（Maximum Likelihood,ML）进行聚类分析,以确定不同隐孢子虫分离株之间的遗传进化关系,并以18S rRNA和HSP70基因构僵的基因树作参照,进而评价PNO这一基因座是否适合作为隐孢子虫基因分型和进化关系分析的基因座。结果表明通过PNO构建的进化树将隐孢子虫分为2大类：Cryptosporidium bailey和C.meleagridis处于一个分枝,C.hominis、C.parvum牛基因型和C.parvum鼠基因型处于另一个分枝上。不同隐孢子虫之间的同源性介于95.0%-100%,能有效区分隐孢子虫不同基因型。因此,PNO基因序列也适合作为隐孢子虫分离株种系发育的遗传标记。     

人源隐孢子虫分离株种类鉴定与种系发育关系分析

目的确定郑州某医院分离到1株隐孢子虫(PRHN)所属种/基因型。方法用PCR对该分离株18S rRNA、HSP70、Cpn60和AOX进行PCR扩增,并对扩增产物进行测序,扩增序列经用DNAstar和ClustalX与GenBank参考序列比对,用PAUP4.0构建种系发育进化树,以确定该分离株与其他隐孢子虫虫种之间的亲缘关系。结果通过18S rRNA、HSP70基因分析该分离株与Cryptosporidium parvum(C.parvum)鼠基因型同源性最高,分别为99.9%和99.2%,在种系发育树上,PRHN均与C.parvum鼠基因型亲缘关系最近;对Chaperponin 60(Cpn60)和Alternative oxidase(AOX)进行序列分析时,该分离株与本实验室分离到的猪隐孢子虫(C.suis)亲缘关系最近。结论该分离株为C.parvum鼠基因型。     

隐孢子虫线粒体研究进展

隐孢子虫病是一种重要的人兽共患的原虫病，目前尚无用于治疗隐孢子虫病的特效药物。线粒体是真核生物中拥有蛋白和酶最多的细胞器，因而隐孢子虫线粒体也可能成为药物潜在的作用靶位。最近一些研究表明隐孢子虫存在线粒体诱生的细胞器，但和其他原生动物的线粒体存在着差异。隐孢子虫具有退化的线粒体，但缺少线粒体基因组，完全依赖核基因来编码所需的功能蛋白。本文对隐孢子虫线粒体存在的依据及其可能具有的功能作一综述。