外源性硫化氢对肝细胞NLRP3炎症小体的影响

目的:研究外源性硫化氢(H_2S)对人肝细胞NLRP3炎症小体的影响。方法:采用不同浓度的脂多糖(LPS)诱导人肝细胞L02和SMMC-7721建立炎症模型,Western blot检测细胞中NLRP3炎症小体的表达并结合细胞毒性实验(MTT法)确定合适的LPS浓度。细胞分为4组:对照组用普通培养基培养18.5 h;LPS组用普通培养基培养0.5 h后,再用100μg/L LPS刺激18 h;LPS+H_2S组和H_2S组用200μmol/L硫氢化钠(Na HS)刺激0.5 h后,再分别用100μg/L LPS和普通培养基培养18 h。各组处理后分别收集细胞,Western blot检测细胞中NLRP3和caspase-1的蛋白表达量。结果:与对照组相比,LPS组细胞内NLRP3和caspase-1的表达增加(P0.05),H_2S组细胞内的NLRP3和caspase-1表达无明显变化;与LPS组相比,LPS+H_2S组细胞内的NLRP3和caspase-1表达减少(P0.05)。结论:外源性H_2S可抑制人肝细胞中NLRP3炎症小体的表达。     

GYY4137对小鼠原代肝细胞胞质内脂质分解的影响

目的:探讨新合成的硫化氢(H2S)供体GYY4137对小鼠原代肝脂肪变性细胞胞质内脂质分解的影响。方法:体外用油酸诱导肝细胞脂肪变性模型。采用两步原位灌流法分离C57BL/6小鼠原代肝细胞并分为4组:对照组用正常培养液培养54 h;模型组用含1.2 mmol/L油酸(溶于10%BSA)的培养液培养48 h,再用RPMI-1640培养液培养6 h;H2S组和DL-炔丙基甘氨酸(PAG;胱硫醚γ-裂解酶抑制剂,抑制H2S合成)组则用含有1.2mmol/L油酸的培养液培养48 h,再用无血清无酚红的RPMI-1640培养液(分别给予含有1 mmol/L GYY4137和200μmol/L PAG)培养6 h。测量细胞甘油释放量及胞内激素敏感性脂肪酶(HSL)的蛋白表达量。结果:和模型组相比,H_2S组培养液中甘油释放量和磷酸化HSL(p-HSL)蛋白表达水平明显降低,而PAG组又明显升高。结论:在小鼠原代脂肪变性肝细胞中,GYY4137可能通过抑制HSL的磷酸化水平而减少胞质内脂质分解。     

22R序列loop和泡突变对GFP报告基因表达的作用

目的:我们研究室的前期工作在猴空泡病毒40(SV40)早期mRNA PolyA序列(SV40PolyA)中发现1个活化基因的原件22R(5' -GTGAAAAAAATGCTTTATTTGT-3'),该片段可以解除Alu串连序列(或Line-1重复序列)对GFP报告基因的抑制作用.我们研究22R突变对GFP报告基因表达的...     

前列腺癌及良性增生组织中DNA聚合酶β、PTEN及Ha-ras基因mRNA检测

目的:探讨前列腺癌(Pca)及良性前列腺增生(BPH)组织中DNA聚合酶β(polβ)、PTEN及Ha-ras基因mRNA的表达。方法:应用RT-PCR法检测12例Pca组织及20例BPH组织中polβ、PTEN及Ha-ras基因mRNA的表达状况。结果:与BPH组织比较,Pca组织中polβ、Ha-ras基因mRNA表达增高,PTEN基因mRNA表达降低(P均<0.01)。Pca组织中polβ与Ha-ras基因mRNA的表达呈正相关(r=0.67,P<0.05),PTEN与polβ、Ha-ras基因mRNA的表达呈负相关,r分别为-0.58、-0.71,P均<0.05,结果:polβ及Ha-ras的表达上调及PTEN的表达下调是Pca发生中的重要分子事件。     

前列腺癌与增生组织中MnSOD基因片段的克隆分析

目的:探讨前列腺癌(Pca)及良性前列腺增生(BPH)组织中MnSOD基因的突变情况。方法:用RT-PCR的方法分别检测30例Pca组织中和20例BPH组织中SOD2基因片段的突变情况。结果:在6例前列腺癌组织标本和4例良性前列腺增生(BPH)组织中发现SOD2基因的点突变位点,其中前列腺癌组织标本(P3)中发现了SOD2基因的两个相连的点突变位点:372nt G---T颠换和373nt T---G颠换。结论:MnSOD基因的突变在前列腺癌的发生和发展过程中可能具有重要意义。     

医学生物化学实验教学中学生创新思维能力的培养

提高科研思维能力是高校成功培养高素质人才的重要因素。生物化学实验是培养的途径之一,因此,探讨生化实验课教学方法尤为重要。该文结合生化学科的特点,从实践中培养学生的动手能力和缜密的科研思维能力,强调能力培养,提高了医学生的培养质量,取得较好的效果。     

超氧化物歧化酶同工酶活性及含量在食管癌和癌前增生患者中的变化

食管癌是我国常见的恶性肿瘤。目前已探知的病因有霉菌毒素、亚硝胺类、微量元素失衡等,但其作用的生化及分子机制尚未充分阐明。近年来肿瘤发生的自由基理论受到广泛关注。有研究表明,过量存在于生物体内的自由基及其引发的过氧化脂质可造成DNA等生物分子的氧化损伤。许多环境污染物或致癌物亦可经氧化还原代谢转变为自由基中间物,由此引发的损伤效应可能是癌肿发生的分子机制之一。本研究以高发区内食管上皮细胞正常、轻度增生、     

重复序列竞争反式调节因子模型的构建和初步研究

目的构建不同拷贝数的重复串联序列表达质粒,研究串联重复序列对表达质粒中GFP报告基因表达的影响作用。方法将不同拷贝数的2F2R、AC和AT串联重复序列插入pEGFP-Alu14或pEGFP-C1中,构建表达载体,瞬时转染HeLa细胞,提取RNA做Northern印记检测。结果在4个拷贝数范围以内,2F2R随拷贝数增加活化基因作用增强,再增加拷贝数其活化基因作用反而下降;装有重复序列的质粒随转染剂量上升表达先上升后下降。结论重复序列可能通过竞争反式调节因子来调节基因表达。     

前列腺癌及良性增生组织中DNA聚合酶β、PTEN及Ha-ras基因mRNA检测

目的:探讨前列腺癌(Pca)及良性前列腺增生(BPH)组织中DNA聚合酶β(polβ)、PTEN及Ha-ras基因mRNA的表达.方法:应用RT-PCR法检测12例Pca组织及20例BPH组织中polβ、PTEN及Ha-ras基因mRNA的表达状况.结果:与BPH组织比较,Pca组织中polβ、Ha-ras基因mRNA表达增高,PTEN基因mRNA表达降低(P均＜0.01).Pca组织中polβ与Ha-ras基因mRNA的表达呈正相关(r=0.67,P＜0.05),PTEN与polβ、Ha-ras基因mRNA的表达呈负相关,r分别为-0.58、-0.71,P均＜0.05,结果:polβ及Ha-ras的表达上调及PTEN的表达下调是Pca发生中的重要分子事件.     

前列腺癌组织中SOD2的cDNA克隆及其序列分析

目的 构建前列腺癌组织中SOD2的cDNA克隆,并进行序列分析.方法 从人前列腺癌组织细胞中提取总RNA并逆转录成cDNA, PCR扩增 cDNA片段, 将cDNA克隆入载体pGEM-T中构建T-A克隆, 对阳性克隆进行序列测定分析.结果 在1例前列腺癌组织标本中发现了SOD2基因的两个相连的点突变位点:372nt T→G颠换和373nt G→T颠换.蛋白序列比较分析显示:对应SOD2编码蛋白的第89位氨基酸由亮氨酸变为精氨酸.结论 SOD2基因突变在前列腺癌的发生中可能起重要作用.