cyclin G2荧光蛋白重组质粒的构建及其对宫颈癌HeLa细胞的作用

目的 构建包含人cyclin G2基因的荧光蛋白重组质粒,探讨cyclin G2对宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响.方法 运用RT-PCR和基因克隆技术构建pDsRed2-Cyclin G2重组质拉;脂质体法转染重组质粒至HeLa细胞中,荧光显微镜下观察其蛋白的表达和定位;流式细胞术检测HeLa细胞的凋亡率.结果 成功地构...     

cyclin G2在乳腺病变组织中表达及其对MCF-7细胞的作用

目的 研究细胞周期蛋白G2(cyclin G2)在乳腺病变中的表达及意义,探讨cyclin G2对乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响.方法 用免疫组化SP法检测cyclin G2在人乳腺不同病变中的蛋白表达,并进行显微图像分析;利用阳离子介导的脂质体法转染pDsRed2-cyclin G2融合基因至人乳腺癌细胞系MCF-7细胞中,流式细胞术检测MCF-7细胞的凋亡率.结果 (1)cyclin G2在乳腺增生症中的阳性表达率及表达强度与正常乳腺组织相当,而在导管原位癌(ductal carcinoma in situ,DCIS)以及浸润性导管癌(invasive ductal carcinoma,IDC)中表达逐渐下降,差异有统计学意义(P<0.05).(2)转染了重组质粒pDsRed2-cyclin G2的MCF-7细胞凋亡率明显增高(P<0.01).结论 cyclin G2蛋白表达随着乳腺疾病恶性程度增加而降低,外源性转染cyclin G2至MCF-7细胞中可促进其凋亡,抑制细胞增殖.     

一种简单快速祛黑色素的改良方法

日常病理工作中的标本有时会遇到黑色素在组织和细胞中沉积,造成组织结构和细胞形态不清楚、细胞的异型性和核分裂观察困难.病理标本处理中使用的脱色素法包括:氯化钾乙醇盐酸法、高锰酸钾草酸法、溴水脱色法、铬酸脱色法、过氧化氢脱色法、过醋酸脱色法等[1].郭以河等[2]报道两种(0.25%高锰酸钾和2%草酸)脱黑色素法.比较常用的是高锰酸钾草酸法和过氧化氢脱色法.用传统高锰酸钾草酸法,容易掉片;过氧化氢脱色法,需24～48 h,耗时较长.本文现采用10%过氧化氢加热处理法,对因黑色素沉积严重影响诊断的组织进行快速处理,时间仅需3～14 min,祛除黑色素的组织细胞形态和结构清晰,免疫组化标记定位准确,取得良好的效果.     

XIAP、OMI/HTRA2蛋白对HeLa细胞的影响及两种蛋白间相互作用

目的探讨XIAP、Omi/HtrA2、米非司酮对HeLa细胞凋亡的影响以及XIAP、Omi/HtrA2的相互作用。方法细胞转染、米非司酮诱导HeLa细胞凋亡,利用共聚焦显微镜及流式细胞术观察XIAP、Omi/HtrA2在细胞内的表达和定位,并检测其对HeLa细胞凋亡影响的情况,使用共聚焦显微镜检测XIAP、Omi/HtrA2的相互作用。结果 (1)在转染了重组质粒pDsRed2-XIAP、pDsRed2-Omi/HtrA2的HeLa细胞中,加入米非司酮后其凋亡率分别是:只加米非司酮组为46.16%;米非司酮+转染质粒pDsRed2-XIAP为26.41%;米非司酮+转染质粒pDsRed2-Omi/HtrA2为78.85%。(2)利用共聚焦显微镜检测XIAP、Omi/HtrA2在HeLa细胞中存在能量共振转移现象。结论米非司酮能促进HeLa细胞凋亡;DsRed2-XIAP融合蛋白能够抑制由米非司酮诱导的HeLa细胞凋亡;DsRed2-Omi/HtrA2融合蛋白能够促进HeLa细胞凋亡,米非司酮能增加Omi/HtrA2促凋亡作用。在活HeLa细胞中,利用荧光共振能量转移技术直接证实XIAP与Omi/HtrA2在部分细胞中存在相互作用。     

Cyclin G_2表达载体的构建及其对乳腺癌MCF-7细胞的作用

目的构建包含Cyclin G2基因的真核表达载体,探讨其对乳腺癌MCF-7细胞体外增殖的作用。方法运用RT-PCR和基因克隆技术构建pDsRed2-Cyclin G2重组质粒,脂质体法转染至MCF-7细胞中,荧光显微镜下观察其蛋白的表达及定位;AnnexinⅤ-FITC染色流式细胞术检测细胞凋亡率。结果成功构建了pDsRed2-Cyclin G2融合表达质粒,转染MCF-7细胞后散在分布于细胞质和细胞,核转染重组质粒的MCF-7细胞凋亡率明显增高（P〈0.01）。结论 Cyclin G2重组质粒转染至MCF-7细胞后能有效促进细胞凋亡。