利用同源重组构建大鼠甘油二酯激酶γ(DGKγ)慢病毒过表达载体

文题释义： 甘油二酯激酶γ(DGKγ)：属于第Ⅰ类DGK亚型,主要分布于神经系统,参与浦肯野细胞树突的发育、突触可塑性调节、神经上皮细胞的增殖和迁移、神经元分化等功能活动。 同源重组技术：一种利用同源重组的原理,进行无缝克隆的技术。该技术无需考虑插入片段的酶切位点,可将插入片段PCR产物定向克隆至任意载体的任意位点。同源重组技术还能实现多个DNA片段的一步组装,操作简单,重组效率高。 背景：慢病毒载体作为外源性转基因载体已被广泛应用,但是大鼠甘油二酯激酶γ(diacylglycerol kinase γ,DGKγ)基因慢病毒载体未见报道。 目的：用同源重组的方法构建大鼠DGKγ慢病毒过表达载体。 方法：提取成年SD大鼠脑组织总RNA,以反转录得到的cDNA作为模板,通过PCR反应分段扩增大鼠DGKγ基因CDS区5'端1 029 bp和3'端1 362 bp,用同源重组技术将这2个片段与线性化载体进行定向连接,构建CMV-rat DGKγ-GFP慢病毒载体并进行PCR扩增及测序鉴定。经293T细胞包装后产生慢病毒,收集慢病毒感染293T细胞,荧光显微镜下观察细胞中GFP的表达并应用实时荧光定量PCR和Western blotting法检测细胞中DGKγ mRNA和蛋白的表达。 结果与结论：CMV-rat DGKγ-GFP慢病毒载体经PCR扩增和测序鉴定构建成功;经CMV-rat DGKγ-GFP慢病毒感染后的293T细胞,荧光显微镜下呈GFP阳性,实时荧光定量PCR显示DGKγ mRNA的表达较空载体组显著升高(P < 0.01),Western blotting显示DGKγ蛋白表达较空载体组极显著升高(P < 0.001)。提示：成功构建了大鼠DGKγ慢病毒过表达载体,DGKγ在293T细胞有效高表达。 ORCID: 0000-0001-9352-3043(李蕾) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

脾胃不好多吃薏米

薏米,又叫苡米或薏米仁,一般超市里都能买到,很多人因为不了解它的健康功效而很少食用。其实,薏米不仅具有很好的抗癌作用,还能够健脾、补肺、清热、利湿,甚至是天然美容食品。在日本,薏米被看成典型的“抗癌食品”,这是因为薏米中的薏米酯、亚油酸是非常重要的抗癌成分,还能减轻肿瘤患者放化疗的毒副作用。临床上一般建议肿瘤患者用生薏米30克￣50克,加水适量浸泡3￣4小时后煮熟食用每日两次,连食数月就能起到比较明显的治疗效果。现代研究表明,薏米是非常有营养的食物,其中蛋白质的含量比米、面高出很多,还含有人体必需的八种氨基酸。因此…