携带人livin α基因腺病毒载体的构建及其在树突状细胞的表达

目的:本研究旨在利用AdMax系统构建携带人抗凋亡基因livinα的重组腺病毒载体(rAd-livinα),并感染树突状细胞(Dendritic cells,DCs),制成DCs疫苗,为下一步用此疫苗抗肿瘤实验奠定基础。方法:以质粒pIRES2-EGFP-livinα为模板,通过PCR扩增出人livinα基因cDNA序列,再将livinα基因cDNA亚克隆于穿梭质粒pDC316-EGFP-cmv,获得重组质粒pDC316-EGFP-cmv-livinα。将鉴定后的重组穿梭质粒pDC316-EGFP-cmv-livinα与腺病毒辅助质粒pBHGlox(delta)E1,3Cre共转染HEK293细胞,同源重组获得重组腺病毒rAd-livinα。用重组腺病毒rAd-livinα感染人DCs后,Western blot方法分析livinα蛋白表达,流式细胞仪检测DCs的表型变化。结果:在HEK293细胞内能观察到重组腺病毒rAd-livinα绿色荧光蛋白的表达。rAd-livinα经PCR鉴定特异性地扩增出符合预期大小的片段。rAd-livinα感染的DCs中可检测到livinα蛋白的表达,并且感染的DCs与未感染DCs比较,可明显提高了细胞表面分子CD83、CD86和HLA-DR的表达(P<0.05)。结论:通过AdMax系统成功构建了重组腺病毒rAd-livinα,使livinα蛋白有效表达于DCs中,并且重组腺病毒感染的DCs的成熟度得到提高。     

噬菌体对多重耐药肺炎克雷伯菌所致小鼠肺炎和体外生物被膜的作用

目的 探究噬菌体对多重耐药肺炎克雷伯菌所致的肺炎小鼠模型的治疗效果及其对体外生物被膜的作用。方法选取2019年1月至2021年12月就诊于江西省人民医院的肺炎患者,分别从肺炎患者痰液和医院处理前废水中获取提纯病原菌和噬菌体,经检测结果分析为多重耐药肺炎克雷伯菌和裂解性噬菌体。提纯的宿主菌和噬菌体分别进行体外和体内实验。先测定共培养物650 nm处吸光度值,观察炎症噬菌体在体外的裂解效果。体内实验对构建的肺炎小鼠模型通过滴鼻给药的方式进行噬菌体干预,对比小鼠存活情况,以观察噬菌体对肺炎的治疗效果。结果 体外实验表明,噬菌体在体外具有很好的裂解效果。噬菌体在体内可以有效地治疗肺炎克雷伯菌引起的小鼠肺炎。噬菌体对小鼠感染肺炎的保护作用与感染复数呈正相关。结论 噬菌体可治疗多重耐药肺炎克雷伯菌引发的小鼠肺炎,提示临床治疗多重耐药菌肺炎也可采用噬菌体进行治疗,为多重耐药肺炎克雷伯菌肺炎提供新的治疗思路。     

布鲁菌病误诊报告并文献复习

目的探讨布鲁菌病临床特点、诊治方法及误诊原因、防范措施。方法对初诊误诊的布鲁菌病3例的临床资料进行回顾性分析,并复习相关文献。结果 3例均因发热就诊,但伴随症状各不相同。于外院首诊分别误诊为血液系统疾病、泌尿系结石伴感染及骨关节结核。按误诊疾病治疗效果不佳。3例均有羊接触史。入院后皆经血培养确诊,给予多西环素及利福平或加用头孢曲松钠治疗后均痊愈。结论流行病学改变、临床表现多样、细菌培养阳性率低和对该病认识不足是导致布鲁菌病误诊的主要原因。加强对该病警惕性,临床遇及疑似患者应详细询问有无感染源接触史,多次行血培养检查,并常规进行血清凝集试验和虎红平板试验等,以减少布鲁菌病误诊误治。     

重组人5型腺病毒对Lewis肺癌小鼠移植瘤生长的抑制作用

目的探讨重组人5型腺病毒(rAd-5)对Lewis肺癌小鼠移植瘤生长的影响。方法建立C57BL/6小鼠Lewis肺癌移植瘤动物模型,实验组瘤内直接注射rAd-5腺病毒后,测量移植瘤体积;切除肿瘤,再次接种Lewis肺癌细胞,观察肿瘤生长情况。对照组注射相应体积的PBS。结果 Lewis肺癌细胞接种第8天,全部小鼠长出肿瘤。实验组肿瘤的体积在肿瘤细胞接种第11、14天时,都显著小于对照组(P<0.01);再次接种Lewis肺癌细胞后,实验组肿瘤的生长速度也显著小于对照组,在再次接种肿瘤细胞后第14～22天,肿瘤体积都显著小于对照组(P<0.05或0.01)。结论 rAd-5对Lewis肺癌细胞生长具有抑制作用,对肿瘤切除术后再次接种的肿瘤生长也具有抑制作用。