转入IL-18 cDNA的鼻咽癌细胞在hu-PBL-SCID鼠中致瘤性的影响

为了探讨人白细胞介素 18(hIL 18)的表达对鼻咽癌细胞体内致瘤性的影响 ,我们构建了hIL 18的真核表达载体pcD NA3/hIL 18,转染人鼻咽癌细胞株SUNE细胞 ;然后以转染阳性的SUNE细胞和未转染的SUNE细胞接种到用健康人外周血白细胞免疫重建的SCID鼠 (hu PBL SCID鼠 ) ,观察成瘤情况。结果发现 ,所构建的真核表达载体在鼻咽癌细胞中能高效表达hIL 18;ELISA法测得转染阳性细胞培养上清液中hIL 18的含量为 (85± 10 )pg/ml,而未转染的SUNE细胞的培养上清液中hIL 18的含量低于 5pg/ml。将转染阳性的细胞克隆和未转染的SUNE细胞接种hu PBL SCID小鼠后连续观察 5 0d ,发现前者形成的肿瘤其生长速度明显慢于后者 ,其平均瘤重也有显著性差异 (P <0 0 0 1)。说明在体内hIL 18的表达能有效地抑制鼻咽癌细胞的成瘤作用。     

THE INTRACELLULAR FORM OF EPSTEIN-BARR VIRUS GENOME IN NASOPHARYNGEAL CARCINOMA

ＴＨＥＩＮＴＲＡＣＥＬＬＵＬＡＲＦＯＲＭＯＦＥＰＳＴＥＩＮＢＡＲＲＶＩＲＵＳＧＥＮＯＭＥＩＮＮＡＳＯＰＨＡＲＹＮＧＥＡＬＣＡＲＣＩＮＯＭＡＷａｎｇＨｕｉｍｉｎ１汪慧民ＣｈｅｎＪｕｎ１陈军ＺｅｎｇＭｕｓｈｅｎｇ１曾木圣ＬｉＭａｎｚｈｉ１李满枝Ｊｉａ...     

鼻咽癌中p53基因突变的研究

目的：探讨鼻咽癌中ｐ５３基因突变情况。方法：用非同位素不对称ＰＣＲ－单链构象多态性技术（ａＰＣＲ－ＳＳＣＰ），分析了鼻咽癌活检组织、细胞株和裸鼠移植瘤中ｐ５３基因第５、６、７和８外显子（ｅｘｏｎ）的基因突变，并对其中ｅｘｏｎ８突变的ＳＵＮＥ－１和ＳＵＮＴ－１进行ＤＮＡ测序。结果：在２０例鼻咽癌活检组织中没有发现突变；但在鼻咽癌细胞株ＣＮＥ１、ＣＮＥ２、ＳＵＮＥ－１和瘤株ＳＵＮＴ－１中存在第８外显子突变，而ＨＫ１为第５外显子突变。ＤＮＡ测序发现ＳＵＮＥ－１和ＳＵＮＴ－１的突变点在ｅｘｏｎ８的密码子（ｃｏｄｏｎ）２８０上，由ＡＧＡ（精氨酸）→ＡＣＡ（苏氨酸）。结论：ｐ５３基因突变热点的ｅｘｏｎ５、６、７和８可能在鼻咽癌变过程中没有重要意义，而在裸鼠移植瘤和细胞株建立过程中起重要作用。ＥＢＶ由于和鼻咽癌的关系密切，在鼻咽癌中可能存在ＥＢＶ编码蛋白与ｐ５３结合或蛋白表达被ＥＢＶ抑制等其他途径使ｐ５３失活。     

深部X线治疗对鼻咽癌患者血清中EB病毒VcA-IgA抗体的近期影响

近年来抗EB病毒壳抗原的免疫球蛋白A抗体(VcA-IgA)的检测已被广泛地采用为鼻咽癌的辅助诊断。血清学的动态检测还发现,VcA-IgA抗体滴度随病程的进展和肿瘤转移而升高;随放疗后患者存活期的延长而渐趋下降;一旦复发,抗体滴度又回复上升至疗前水平。因此,VcA-IgA抗体水平的动态变化在一定程度上可以反映鼻咽癌患者的病情变化与疗效。本文报告我们对56例经深部X线治疗的鼻咽癌患者血清中抗VcA-IgA抗体的近期观察结果。 材料与方法:血清标本采自中山县人民医院,随机采集56例经病理确诊的鼻咽癌患者的疗前,深部X线治疗期中(即第二段放疗开始)与疗后一个月的血     

检测EB病毒VCA-IgA抗体在提高鼻咽癌检出率上的意义

在鼻咽癌患者血清中,常可测到高滴度的抗Epstein-Barr(EB)病毒多种特异性抗原的抗体。其中,抗EB病毒壳抗原(VCA)的特异性免疫球蛋白A抗体VCA-IgA更具特异性,已被广泛应用于临床。鼻咽癌患者血清VCA-IgA抗体的阳性率达90.14％及95.07％。然而,这一血清学诊断不能单独作为确诊鼻咽癌的依据,只是一种辅助方法。为了确定其在帮助发现鼻咽癌病例上的意义,我们     

鼻咽癌细胞中表达的人白细胞介素18(hIL-18)对鼻咽癌患者外周血 CD8+T细胞细胞毒活性增强作用的研究

目的探讨人白细胞介素18在鼻咽癌细胞中的表达能否提高鼻咽癌病人外周血CD8+T细胞的杀伤活性以及作用途径.方法构建人白细胞介素18的真核表达载体[pcDNA3.1(-)/hIL-18,转染人鼻咽癌细胞株SUNE;以转染的SUNE细胞和未转染的SUNE细胞为靶细胞,以鼻咽癌患者外周血的CD8+T细胞为效应细胞,混合培养12 h,用LDH释放法测定CD8+T细胞的细胞毒活性;用免疫组化法测定混合培养物中CD8+T细胞上Perlorin、Fas-L、Granzyme B的表达.结果所构建的真核表达载体在鼻咽癌细胞中能高效表达hIL-18;ELISA法测得转染阳性细胞培养上清液中hIL-18的含量为(85±10)pg/ml,而未转染的SUNE细胞的培养上清液中hIL-18的含量低于5 pg/ml.将表达hIL-18的SUNE细胞与鼻咽癌患者外周血CD8+T细胞混合培养12 h后,CD8+T细胞的细胞毒活性显著增强(P＜0.001),尤其是当效应细胞/靶细胞为101时,CD8+T细胞对转染的SUNE细胞的裂解率高达46.7%,而CD8+T细胞对未转染的SUNE细胞的裂解率仅为4.6%.免疫组化法表明,这种杀伤活性的增强与CD8+T细胞表达Perforin有关,而与Fas-L和Granzyme B途径无关.结论hIL-18能显著增强鼻咽癌患者外周血CD8+T细胞的体外杀伤活性,这种杀伤活性与CD8+T细胞表达Perlorin有关.     

靶向人Trb3基因shRNA真核表达载体的构建及鉴定

目的 构建并鉴定靶向果蝇同源蛋白3(tribbles-related protein 3,Trb3)基因的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体,并检测其对靶基因的沉默效应.方法 根据Genbank数据库中Trb3序列,设计、合成3对互补并特异性编码其shRNA序列的寡核苷酸,克隆...     

唾液中EB病毒抗体检出用于早诊鼻咽癌的研究

目的：建立在唾液标本中检出 EB病毒 IgA抗体的方法,以快速、特异诊断鼻咽癌。方法：人工合成 EBV-DNA酶及 EA-D多肽片段,分别作为捕捉抗原,采用 ELISA法检测鼻咽癌患者和健康人血清及唾液中 IgA/ EBV-DNA酶和 EA-D抗体。结果：通过检出 O.D值,经统计学处理,选出鼻咽癌诊断阈值为：血清 O.D值≥ 0.3,唾液 O.D值≥ 0.45（ DNA酶与 EA-D两者阈值一致）。鼻咽癌与健康者两组间 DNA酶与 EA-D的 IgA滴度均为 P< 0.0001,有非常显著性差异,与病理确诊相比,阳性符合率为 72.6％～ 77.3％。结论：证实 EBV合成肽链作为捕捉抗原,唾液为标本,用 ELISA法是可行的,方法简便,重复性好,价廉,但诊断符合率需进一步提高。     

鼻咽癌组织中 EBV-BARF0基因序列的测定

目的： EB病毒 (Epstein-Barr virus,EBV)存在的变异影响到其生物学功能（如 LMP1基因）。 BamHI A区右向框 0（ BamHI A rightward fram0, BARF0）是在鼻咽癌 (Nasopharyngeal Carcinoma,NPC)病人中检出率很高的一个 EB病毒基因,对其变异性的研究尚未见报道,本研究是为了明确广东鼻咽癌组织中 EBV-BARF0基因的序列及其变异。方法：应用 PCR技术从 20例鼻咽癌组织中,扩增 EBV基因 BARF0,并对它们的序列进行测定。结果：与标准株 B95-8相比,鼻咽癌组织中 EBV-BARF0均有 4个位点发生突变： 160473（ G→ T）、 160545（ C→ T）、 160701（ C→ A）、 160707（ G→ C）,并导致相应的氨基酸的改变： 2（ Ala→ Ser）、 26（ Leu→ Phe）、 78（ Arg→ Ser）、 80（ Ala→ Pro）。结论：由于 EBV的 BARF0基因在鼻咽癌细胞株及活检组织中 100％表达,在淋巴瘤组织及淋巴瘤细胞株中表达较低或不表达,本研究首次报道鼻咽癌组织中 EBV-BARF0的序列分析,与 B95-8相比存在变异,并导致了蛋白质的一级结构的改变,推测该基因很可能在鼻咽癌变过程中起着重要的作用。     

EBV-LMP1基因对上皮细胞增殖的影响

ＥＢＶ－ＬＭＰ１基因对上皮细胞增殖的影响陈宜芳郭辉玉汪慧民李满枝ＥＢ病毒（Ｅｐｓｔｅｉｎ－ＢａｒｒＶｉｒｕｓ，ＥＢＶ）的潜伏感染与多种人类肿瘤有关，ＥＢＶ在潜伏状态时，至少有１１种基因表达，其中潜伏膜蛋白１（Ｌａｔｅｎｔｍｅｍｂｒａｎｅｐｒｏ－ｔｅｉ...