抗人整合素β3亚基单克隆抗体的制备及其抗肿瘤活性的研究

目的制备抗人整合素β3亚基的单克隆抗体(mAb),研究其对肿瘤治疗的作用。方法用RT-PCR方法扩增人β3胞膜外基因,将其克隆至原核表达载体pQE30中,获得含β3胞膜外基因的高效表达载体pQE30-β3,将其转化大肠杆菌M15,通过诱导表达及纯化,获得β3蛋白。将此蛋白免疫BALB/c小鼠,应用B淋巴细胞杂交瘤技术制备抗β3亚基mAb,Western blot鉴定mAb的特异性。通过小鼠体内抑制黑色素瘤生长实验筛选出具有抑制肿瘤生长作用的mAb。进一步用MTT法及流式细胞术观察该mAb体外抑制人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖及诱导其凋亡的作用。结果扩增获得了β3胞膜外基因,构建了β3蛋白的原核表达载体,表达纯化了β3蛋白,成功制备了8株mAb,Western blot证明了其特异性。经过体内抑瘤实验筛选出一株具有显著抑制肿瘤生长的mAb4F12。该mAb可抑制HUVEC细胞增殖并诱导其凋亡。结论成功表达了β3蛋白,并制备了有活性的mAb,抗体具有抑制肿瘤生长的作用,这可能是通过抑制血管内皮细胞的增殖和诱发凋亡实现的。     

小细胞肺癌2F7单抗ScFv的高效表达及复性研究

目的 在大肠杆菌中高效表达小细胞肺癌单抗2F7的单链抗体（ScFv)，并获得具有生物学活性的ScFv。方法 利用PCR方法将2F7单抗重链可变区（VH）和轻链可变区（VL）通过一人工设计的柔性连接肽（Linker)连接，再将单链抗体基因重组到原核表达载体pQE31中，构建单链抗体高效表达载体pQE-2F7-ScFv。将pQE-2F7-ScFv质粒转化大肠杆菌M15后诱导表达，并对表达产物进行纯化和稀释复性。结果 获得了2F7单链抗体的高效表达，表达蛋白大小约27.4kD，以包涵体形式存在。包涵体蛋白在经过变性、纯化和稀释复性后，获得了有功能的单链抗体。结论 成功地构建和表达了小细胞肺癌单抗F27的单链抗体，并对其进行了纯化和复性，将进一步促进2F7单抗小分子抗体的应用。     

心肌细胞凋亡在急性期心肌梗死后心室重塑中的作用

急性心肌梗死后,由于心室重塑而导致的心力衰竭是急性心肌梗死的严重并发症,以往认为,心肌细胞的缺血和坏死,是引起心室重塑的原因,而近年来,随着分子生物学技术的迅猛发展,大量的研究发现,急性心肌梗死后细胞凋亡在心室重塑中起着重要作用。本文将就这方面的研究进行综述。1细胞凋亡的概念1972年美国病理学家Kerr等[1]。首次提出细胞凋亡(apoptosis)的概念,是指机体在生理或病理条件下受刺激后,经过多种途径的信号传递,遵循自身程序的一种细胞主动死亡过程,与坏死不同,具有独特的分子生态学,是在基因调控下的细胞主动死亡过程,因此又称为…     

现制现售珍珠奶茶的卫生学调查

现制现售珍珠奶茶因其制作工艺简单、食用方便和独特的口感，在饮料行业中赢得一席市场。由于投入成本不高，一般经营企业规模较小，自身管理能力较差。目前，其食品卫生行政许可审核尚无相应规范，虽然有地方标准，但经营单位的加工、销售还存在很多问题。珍珠奶茶作为直接人口的饮料食品，其产品质量至关重要。因此，小型饮料店的卫生状况应引起有关部门的高度重视。     

肝癌抑制基因-1与转运功能相关的451 bp序列区的确定

背景与目的:肝癌抑制基因-1(HCCS1)是一种潜在的肝癌抑制基因,并且在细胞内蛋白分拣运输中也发挥着重要作用,其抑癌作用有可能是通过其蛋白转运的功能而发挥的,本文以寻找HCCS1序列中与转运相关的最小功能序列区域为目的.方法:通过亚克隆技术,构建以pEGFP-C2为载体的含不同长度HCCS1cDNA片段的亚克隆,将构建的亚克隆转染子宫颈癌HeLa细胞,通过免疫荧光共聚焦显微镜观察不同长度HCCS1蛋白的分布,以及与6-磷酸甘露糖受体(M6PR)的共定位.结果:成功构建了以pEGFP-C2为载体的10个含有不同长度HCCS1片段的亚克隆;HCCS1cDNA从3'端向5'端逐渐缺失的片段中:2 100 bp片段至778 bp片段编码的不同长度HCCS1蛋白呈颗粒状分布于核周的胞质内,其中2 100 bp片段至1 571 bp片段编码的不同长度HCCS1蛋白均呈颗粒状、极性分布于核周的胞质内,且与M6PR有共定位;而1 120 bp片段至778 bp片段编码的不同长度HCCS1蛋白虽然也呈颗粒状分布于核周,但极性分布消失,且与M6PR共定位消失;HCCS1cDNA片段678 bp片段至339 bp片段编码的不同长度HCCS1蛋白呈散点状弥散分布于胞质以及胞核内.结论:确定了HCCS1cDNA 1 571 bp片段的3'端451 bp的序列为与HCCS1转运功能相关的最小区域范围.     

维吾尔族宫颈癌患者外周血中CD+4CD+25CDlow/-127调节性T淋巴细胞与细胞因子的临床意义

宫颈癌是位居妇科肿瘤第一的恶性疾病[1].如何有效预防和治疗宫颈癌,提高患者生存质量是目前的研究热点.CD+4 CD+25 Treg在维持自身耐受和免疫稳定的同时,也抑制着免疫系统对肿瘤的免疫应答[2].经TGF-β和IL-10处理的细胞可获得明显的抑制效应性T淋巴细胞增殖的作用,炎症因子IFN-γ则与Treg起相反的作用[3].维吾尔族是宫颈癌高发民族,死亡率高[4].本研究通过流式细胞术检测维吾尔族宫颈癌患者外周血CD+4 CD+25 CDlow/-127 Treg细胞含量,采用ELISA检测血清中细胞因子TGF-β、IL-10及IFN-γ的水平,以便有针对性地开展新疆地区宫颈癌防治工作.     

乳糖酸修饰mPEG-PLGA-PLL纳米粒靶向肝癌细胞Huh7的研究

背景与目的:去唾液酸糖蛋白受体(asialoglycoprotein receptor,ASGPR)是一种肝细胞特异性表达的膜表面蛋白,能够特异性地识别带有半乳糖残基的糖蛋白。乳糖酸含有半乳糖基团,可以作为靶向肝癌的特异性配基。该研究旨在探讨乳糖酸修饰的聚乙二醇/聚丙交酯-乙交酯/聚赖氨酸[methoxy-poly(ethylene glycol)-b-poly(D,L-lactide-co-glycolide)-b-poly(L-lysine)(mPEG-PLGA-PLL)纳米粒,mPEG-PLGA-PLL-GAL NPs)]对肝癌Huh7靶向效果,为构建新型的靶向肝癌的纳米递送系统提供实验数据。方法:MTT法确定Huh7细胞摄取mPEG-PLGA-PLL NPs与mPEG-PLGA-PLL-GAL NPs适当的浓度;通过激光共聚焦和荧光显微镜定性观察Huh7对罗丹明B标记的mPEG-PLGA-PLL NPs和mPEG-PLGA-PLL-GAL NPs的摄取;并采用流式细胞计数仪定量研究Huh7细胞对两者的摄取差别;尾静脉注射荷Huh7瘤裸鼠研究两者体内分布情况。结果:mPEG-PLGA-PLL NPs与mPEG-PLGA-PLL-GAL NPs的浓度在0.2 mg/mL时细胞存活率较高且对Huh7细胞的毒性较小。激光共聚焦断层扫描显示Huh7细胞可以较好地摄取mPEG-PLGA-PLL-GAL NPs,同时流式细胞仪定量显示mPEG-PLGA-PLL-GAL NPs在Huh7细胞的分布较mPEG-PLGA-PLL NPs高40%(P<0.05)。mPEG-PLGA-PLL NPs与mPEG-PLGA-PLL-GAL NPs在移植瘤中的分布明显多于其他脏器,并且随时间的延长mPEG-PLGA-PLL-GAL NPs体现了更好的靶向效果。结论:体外与体内实验证明乳糖酸修饰的mPEG-PLGA-PLL NPs对肝癌细胞Huh7有很好的靶向效果,可为肝癌的靶向治疗提供较好的药物载体。     

小细胞肺癌抗独特型疫苗功能的试验研究

目的探讨小细胞肺癌(SLCL)抗独特型抗体3F6和其单链抗体(3F6SeFv)诱导体液和细胞免疫应答的能力,以证明其作为抗SCLC疫苗的可行性。方法3F6和3F6SeFv(Ab2)免疫BALB/c小鼠获得抗血清,以ELISA和Western blot方法分别检测抗血清中Ab3结合SCLC细胞膜表面特异抗原(NCI-H128抗原)的能力,用竞争Western blot检测Ab3与2F7竞争结合NCI-H128抗原的能力。以迟发型超敏反应(DTH反应)和小鼠脾脏淋巴细胞增殖实验检测3F6及3F6SeFv诱发细胞免疫应答的潜能。结果ELISA和Western blot方法均证明,3F6和3F6SeFv免疫同系小鼠所产生的Ab3能特异的与NCI-H128抗原相结合,与对照血清相比,差异有统计学意义(P<0.001),且有很强的与2F7(Ab1)竞争结合靶抗原的能力。在DTH反应中,3F6和3F6SeFv所致小鼠足垫肿胀的程度均明显高于对照组(P<0.001)。小鼠脾脏淋巴细胞增殖反应试验证明,用3F6和3F6SeFv免疫的小鼠脾脏淋巴细胞对靶细胞的再次刺激有明显的增殖反应,与阴性肿瘤细胞对照组和阴性抗体对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论抗独特型抗体3F6和3F6ScFv均有模拟SCLC细胞膜表面特异抗原的能力,成功诱导了相应的体液和细胞免疫应答,可作为抗SCLC疫苗进行深入研究。     

全复配食用菌提物的抗衰老作用研究

目的 探讨全复配食用荫提物的抗衰老作用.方法 以果蝇生存试验比较不同浓度全复配食用菌提物对果蝇生存期的影响;以果蝇及小鼠的血清超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量比较不同浓度全复配食用菌提物的抗氧化功能.结果 全复配食用菌提物可延长果蝇的生存时间,降低果蝇及小鼠的MDA含量,增强SOD活性.结论 全复配食用菌提物具有抗衰老功能,提高机体内源性抗氧化酶活性、降低过氧化水平可能是其作用途径之一.     

抗人整合素β3亚基单链抗体基因的构建及在大肠杆菌中表达

目的:构建抗人整合素β3亚基单链抗体(ScFv)基因,在大肠杆菌中表达并获得具有活性的ScFv。方法:从分泌抗人整合素β3亚基单抗(mAb)的杂交瘤细胞4F12中提取总RNA,RTPCR扩增VH和VL基因,通过PCR在VH和VL基因间插入柔性连接子(Gly4Ser)3,并将其克隆至原核表达载体pQE中,获得含β3抗体基因的高效表达载体pQEβ3ScFv。将重组子转化大肠杆菌M15后诱导表达,并对表达产物进行纯化和凝胶柱上在位复性。结果:获得抗β3单抗的VH和VL基因,构建了pQEβ3ScFv,并在大肠杆菌中获得了表达,表达蛋白相对分子质量约为26×103,以包涵体形式存在,纯化和复性后,ELISA证实其具有良好的抗原结合活性。结论:成功构建、表达了抗人整合素β3亚基的ScFv基因,并获得了有活性的ScFv。