趋化因子RANTES快速募集DCs及DCs疫苗的抗结肠癌作用

目的 观察RANTES促进小鼠外周血Des前体细胞动员及DCs疫苗对结肠癌细胞的体外杀伤作用.方法 C57BL/6J(B6)小鼠静脉注射RANTES,不同时间间隔(0、4、8、16、24、48、72 h)采集外周血分离单个核细胞(PBMNCs),通过流式细胞仪分选出F4/80-B220-CD11c+细胞并其进行检测.反复冻融法制备结肠癌可溶性抗原,将其与RANTES动员的DCs共同培养,制备成DCs疫苗以激活T细胞,MTT法检测活化的T细胞在体外对结肠癌细胞的杀伤作用.γ干扰素(IFNγ)酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测IFNγ的分泌情况.结果 B6小鼠外周血中F4/80-B220-CD11c+细胞数量随着注射时间的延长逐渐增多,大约在24 h达到高峰,占PBMNCs(13.45±1.25)%.新鲜分离的F4/80-B220-CD11c+细胞为DCs前体细胞.负载结肠癌抗原的DCs激活的T细胞表现出对结肠癌细胞的特异性杀伤作用,产生高水平的IFNγ(1595.00±38.03)ng/L,而对B16黑色素瘤细胞没有杀伤作用,不产生高水平的IFNγ(175.44±6.55)ng/L.结论 RANTES动员的DCs在体外可以诱导出针对结肠癌细胞的特异性杀伤作用.     

乳腺癌干细胞相关亚群细胞周期分析

目的:流式细胞仪分选乳腺癌细胞系MCF-7的肿瘤干细胞相关SP亚群(side population,SP),并检测SP和非SP细胞周期。方法:MCF-7细胞悬液经Hoechst33342染色,流式细胞仪分选SP和非SP后,乙醇固定,PI染色,流式细胞仪检测细胞周期。结果:SP细胞在MCF-7细胞中占4%,Verapamil阻断后比例减为0·5%。SP细胞中S/G2/M期细胞最低,仅占7·9%,而非SP细胞增殖期比例相对高,S/G2/M期细胞约占34·2%。未分选细胞中S/G2/M期细胞比例居中,为22·9%。结论:人乳腺癌细胞系MCF-7含SP亚群,比例约为4%,且SP细胞多处于静止期,具有一般干细胞的特性。     

乳腺癌MCF-7肿瘤细胞SP亚群初步分析

目的鉴定乳腺癌干细胞系MCF-7中是否包含肿瘤干细胞相关的SP(side popu lation)亚群。方法制备MCF-7细胞悬液,经Hoechst33342和PI染色(其中一组同时加入拮抗剂维拉帕米作为对照),流式细胞仪分析SP亚群。另取贴壁生长的MCF-7细胞,用Hoechst33342和羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)原位染色,荧光显微镜下观察细胞染色情况。结果SP亚群占MCF-7细胞的4%,维拉帕米阻断后减少为0.5%。荧光显微镜下见Hoechst33342阳性细胞约占95%。结论人乳腺癌细胞系MCF-7中存在SP亚群,即提示乳腺癌干细胞的存在;维拉帕米可抑制染料外排而减少SP细胞的比例。     

乳腺癌干细胞相关亚群细胞周期分析

目的：流式细胞仪分选乳腺癌细胞系MCF-7的肿瘤干细胞相关SP亚群（side population，SP），并检测SP和非SP细胞周期。方法：MCF-7细胞悬液经Hoeehst33342染色，流式细胞仪分选SP和非SP后，乙醇固定，PI染色，流式细胞仪检测细胞周期。结果：SP细胞在MCF-7细胞中占4％，Vempamil阻断后比例减为0．5％。SP细胞中S／G2／M期细胞最低，仅占7．9％，而非SP细胞增殖期比例相对高，S／G2／M期细胞约占34．2％。未分选细胞中S／G2／M期细胞比例居中，为22．9％。结论：人乳腺癌细胞系MCF-7含SP亚群，比例约为4％，且SP细胞多处于静止期，具有一般干细胞的特性。     

胃癌患者腹腔冲洗液中细胞内端粒酶活性的检测及临床意义

目的　探讨胃癌患者腹腔冲洗液中细胞内端粒酶活性的表达情况及临床意义。方法　术中收集38例胃癌和10例良性胃溃疡患者的腹腔冲洗液,采用PCR TRAP方法测定腹腔冲洗液中游离细胞内端粒酶的活性,同时做腹腔冲洗液细胞学检查(PLC)。结果　10例胃良性溃疡患者腹腔冲洗液细胞内端粒酶活性均为阴性。胃癌患者腹腔冲洗液中细胞内端粒酶活性的阳性率为4 2 .1% (16 / 38) ,明显高于PLC阳性率18.4 % (7/ 38) (P <0 .0 5 )。结论　两种方法(端粒酶活性检测和PLC)均适用于胃癌腹腔脱落癌细胞的诊断或腹膜转移的预测。但对微量癌细胞检出的灵敏度,以端粒酶活性检测为优。     

肌钙蛋白T及心肌酶在小儿肺炎伴心肌损害中的意义研究

【目的】观察心肌肌钙蛋白T（cardiac troponin T，CTnT）及心肌酶改变在小儿支气管肺炎合并心肌损害中的关系及意义，为临床诊断及治疗提供依据。【方法】对62例小儿支气管肺炎急性期CTnT和心肌酶进行检测，且对部分患儿进行心电图、心脏超声检测观察。【结果】支气管肺炎患儿中有44例（70．96％）心肌酶谱异常；8例（12．90％）CTnT异常均为重症肺炎患儿；在44例心肌酶异常患儿中15例有心电图异常，5例心脏超声异常，心脏损害与不同病原体感染有一定的关系，其中呼吸道合胞病毒和肺炎支原体感染较多见。【结论】支气管肺炎患儿急性期心肌损害十分常见，心肌酶改变是早期诊断肺炎合并心肌损害较敏感的指标，结合CTnT、心电图、心脏超声及病原学检测对判断预后有重要的意义。     

乳腺癌干细胞的富集及相关基因表达

目的通过微球体培养富集乳腺癌干细胞,并检测其相关基因的表达。方法将MCF-7乳腺癌细胞进行第一代微球体培养,7d后消化微球体获得单细胞悬液,取部分细胞进行第二代微球体培养,另一部分细胞则在胶原底物进行分化培养。于培养第11天收集第二代微球体细胞、分化细胞,采用流式细胞术进行干细胞比例分析;同时应用Real-time PCR技术检测β-catenin、CXCR4、SOX2、ALDH3A1 mRNA表达。结果流式细胞分析显示,微球体细胞和分化细胞的侧亚群细胞比例分别为(7.36±0.54)%和(4.32±0.42)%(P<0.05),CD55high比例分别为(17.41±1.09)%和(4.47±0.33)%(P<0.05)。Real-time PCR检测结果表明,微球体细胞与分化细胞相比,β-catenin、CXCR4、SOX2及ALDH3A1 mRNA表达分别上调了约1.5、5.0、4.0和5.7倍(P<0.01)。结论微球体细胞富集了较高比例的乳腺癌干细胞,且β-catenin、CXCR4、SOX2、ALDH3A1 mRNA呈现高表达。     

人脐带/外周血树突状细胞的培养及特性研究

利用人脐带血单个核细胞，联合粒／巨噬细胞集落刺激因子（GM－CSF）和肿瘤坏死因子-α（TNF－α），经2周左右可培养出大量树突状细胞（DCs）；来自正常人外周的单个核细胞，经GM－CSF和IL-4作用，8－10天后亦可培养出大量（4－5）×10~6／50ml）DCs。该研究为进一步研究DCs负载肿瘤抗原作为疫苗，为肿瘤免疫中的应用奠定了物质基础。     

TNFα-在小鼠叶酸诱导肾病中的致病作用及其机理研究

目的研究TNF-α在小鼠叶酸诱导肾病中的致病作用及其机制。方法建立小鼠叶酸诱导肾病模型,运用抗TNF-α多克隆抗体及对照抗体干预治疗,检测小鼠血清以及肾组织中TNF-α水平,肾小管上皮细胞凋亡情况以及凋亡相关蛋白的表达水平。结果在CD1小鼠叶酸诱导肾病模型中,尿素氮水平显著升高,肾小管上皮细胞坏死和凋亡增加,小鼠血清以及肾组织中TNF-α水平显著升高,肾皮质组织中Bcl-xL表达水平显著下降,运用抗TNF-α多克隆抗体干预治疗可保持Bcl-xL在肾组织中的表达水平,减少肾小管上皮细胞凋亡,有效减轻小鼠肾功能损害。结论TNF-α在小鼠叶酸诱导肾病发病机制中具有重要作用,阻断TNF-α是治疗急性肾衰的一种潜在有效手段。     

单克隆抗体C225对乳腺癌干细胞的抑制作用

目的 研究表皮生长因子受体(EGFR)的单克隆抗体西妥昔单抗(C225)对乳腺癌细胞系MCF-7中乳腺癌干细胞的抑制作用.方法 MTT法检测C225对MCF-7细胞增殖的影响.将MCF-7进行微球体培养,根据培养液中是否加入表皮生长因子(EGF)和C225分为对照组、C225组、EGF组、EGF+ C225组;培养13 d,观察四组微球体形成大小及数量,计算微球体形成率(MFE);流式细胞术检测微球体细胞及常规培养MCF-7中CD44+CD24-细胞比例.结果 MCF-7细胞增殖抑制率随C225质量浓度的增加而上升.与对照组比较,C225组微球体体积明显减小,且MFE和微球体中CD44+CD24-细胞比例明显降低,分别为(0.61±0.04)% vs (1.44±0.09)% (P<0.01)和(3.50±0.29)% vs (9.07±0.52)% (P<0.01).与EGF组比较,EGF+C225组微球体体积明显减小,且MFE和微球体中CD44+CD24-细胞比例明显降低,分别为(0.68±0.04)% vs (1.61±0.05)% (P<0.01)和(4.00±0.58)% vs (10.47±0.79)% (P<0.01).常规培养MCF-7中CD44+CD24-细胞比例为(2.03±0.15)%,与EGF组和对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).EGF组与对照组微球体形成大小、MFE以及微球体中CD44+CD24-细胞比例的比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 C225对MCF-7中CD44+CD24-细胞有明显抑制作用.