Kv1.5对大鼠低氧高二氧化碳性PASMCs增殖、凋亡的影响及与MAPK通路的关系

 目的：探讨电压依赖性钾离子通道Kv1.5对大鼠低氧高二氧化碳性肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）增殖、凋亡的影响及其与丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）信号通路的关系。方法：体外培养大鼠PASMCs,复制低氧高二氧化碳模型,随机分组如下：常氧组（N组）;低氧高二氧化碳组（HH组）;低氧高二氧化碳+溶剂DMSO对照组（HD组）;低氧高二氧化碳+ERK1/2通路抑制剂U0126组（HU组）;低氧高二氧化碳+p38 MAPK通路抑制剂SB203580组（HS组）;低氧高二氧化碳+MAPK通路激动剂茴香霉素（anisomycin）组（HA组）。采用CCK-8法检测细胞活性,蛋白免疫印迹法检测Kv1.5、增殖细胞核抗原（PCNA）及Bax蛋白的表达水平。结果：与N组相比,HH组和HD组细胞活性增加（P<0.01）,PCNA蛋白表达上调,Kv1.5及Bax蛋白表达均明显降低（P<0.01）,HH组和HD组间各指标变化均无显著差异（均P>0.05）;较之HD组,HU组、HS组及HA组细胞活性降低（P<0.05或P<0.01）,PCNA蛋白表达下调,Kv1.5及Bax蛋白表达均明显增加,差异均显著（P<0.01）,其中以HA组各指标变化最明显。结论：钾离子通道Kv1.5对低氧高二氧化碳性大鼠PASMCs增殖、凋亡的调节可能与MAPK通路的激活有关。     

对乙酰氨基酚所致急性肝损伤防治的研究进展

对乙酰氨基酚（APAP）作为临床上广泛使用的解热镇痛药,其肝毒性问题日益突出,已成为引起药物性急性肝损伤甚至肝衰竭的最常见药物之一。线粒体氧化应激被认为是APAP诱导肝损伤的主要细胞事件。除了线粒体氧化应激外,多种其他的细胞事件也参与了APAP所诱导的肝损伤的发生发展。笔者综述了APAP肝毒性涉及的各种细胞事件以及针对这些事件可能有效的治疗措施,有望为相关药物性肝损伤的防治提供新的线索和思路。     

成纤维细胞生长因子1通过改善线粒体氧化应激缓解对乙酰氨基苯酚所致小鼠急性肝损伤

目的：探讨成纤维细胞生长因子1（FGF1）缓解对乙酰氨基苯酚（APAP）所致小鼠急性肝损伤的机制。方法：①将C57BL/6J小鼠随机分为Control组、APAP 3 h组、APAP 6 h组、APAP 12 h组和APAP 24 h组,500 mg/kg剂量APAP腹腔注射造模后于对应时间点处死小鼠,肝脏DHE染色和F4/80 染色观察活性氧（ROS）含量以及炎症细胞数目确定APAP小鼠急性肝损伤最显著时间点;②将C57BL/6J小鼠随机分为Control组、APAP组、APAP+FGF1 1 mg/kg组、APAP+FGF1 2 mg/kg组APAP+FGF1 5 mg/kg组,500 mg/kg剂量APAP造模1 h后,腹腔注射对应剂量FGF1,于造模后6 h处死小鼠,通过肝脏HE染色观察损伤面积,酶标仪法检测谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量,qPCR检测过氧化氢酶（CAT）、SOD2、核因子E2 相关因子2（NRF2）、趋化因子配体5（CCL5）、肿瘤坏死因子α（TNFα）和白细胞介素-6（IL-6）基因表达,确定FGF1缓解APAP小鼠急性肝损伤的最优剂量;③将C57BL/6J小鼠随机分为Control组、3 h APAP组、3 h APAP+FGF1组、6 h APAP组和6 h A PAP+FGF1组,500 mg/kg剂量APAP造模1 h后,腹腔注射2 mg/kg剂量FGF1,于造模后对应时间点处死小鼠,酶标仪法检测ATP含量,Western Blot检测线粒体氧化磷酸化蛋白相对表达量;④使用不同浓度APAP（0、1、5、10、15、20、40和60 mmol/L）处理HepG2细胞24 h,采用细胞毒性实验（CCK-8）检测细胞活性;⑤在20 mmol/L APAP的MEM基础培养基中,加入不同浓度FGF1,使FGF1终浓度为0、0.5、1、5和10 mg/mL,处理24 h后CCK-8实验检测细胞活性。结果：①在APAP所致小鼠急性肝损伤中,ROS含量在造模后3 h明显升高,6 h时达高峰;炎症细胞数目在6 h明显升高且达到最高,12 h和24 h开始下降。②在APAP所致小鼠急性肝损伤中,FGF1蛋白的表达水平皆明显下降（均P ＜0.01）。③在不同剂量的FGF1治疗后,肝脏损伤面积缩小,血清ALT和AST水平均显著下调（均P ＜0.01）;肝脏组织ROS含量显著减少,MDA含量下调,SOD含量上调,抗氧化应激指标CAT、SOD2 和NRF2的mRNA表达上调（均P ＜0.01）;肝脏炎症细胞数目显著减少,炎症因子CCL5、TNFα和IL-6的mRNA表达下调（均P ＜0.01）。上述结果均在2 mg/kg剂量时治疗效果最佳。④15、20、40、60 mmol/L浓度的APAP均能造成HepG2细胞活性显著下降,不同剂量FGF1均能上调20 mmol/L APAP所致HepG2细胞损伤中的细胞活性（均P ＜0.01）。⑤FGF1能显著上调3 h和6 h时APAP所致小鼠肝损伤的肝脏ATP含量（均P ＜0.01）,上调6 h时复合物4-线粒体编码的细胞色素C氧化酶1、复合物2-琥珀酸脱氢酶B和复合物1-泛醌氧化还原酶B8亚基蛋白表达,下调3 h和6 h时3-硝基酪氨酸蛋白表达（均P ＜0.05）。结论：FGF1能通过抑制线粒体氧化应激,从而缓解APAP所致急性肝损伤。     

益气活血通络解毒方通过抑制caspase-12减轻小鼠肺缺血/再灌注损伤

 目的:探讨益气活血通络解毒方(Yiqi Huoxue Tongluo Jiedu Fang, YHTJF)对小鼠肺部缺血/再灌注损伤及caspase-12表达的影响。方法:选取雄性10~12周龄C57BL/6J小鼠70只,体重21~25g,复制在体左肺缺血/再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)损伤模型。随机分为7组:正常对照(control)组,羧甲基纤维素钠(carboxyl methyl cellulose-Na,CMC-Na)组,假手术(sham)组,I/R模型组,YHTJF低(low,L)、中(meddle,M)、高(high,H)浓度干预组。CMC-Na、sham和I/R组术前连续7 d腹腔注射CMC-Na溶液,YHTJF-L、YHTJF-M和YHTJF-H组术前连续7 d腹腔注射低、中、高浓度的YHTJF溶液。术毕,取左肺测定肺组织湿/干比值(W/D)及总肺含水量(TLW),行肺泡损伤评估(IQA);光、电镜观察肺组织形态学及超微结构改变;原位末端标记法(TUNEL)测组织细胞凋亡指数(AI);RT-PCR和Western blot分别检测caspase-12和葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的mRNA和蛋白表达量。结果:相比control组,I/R组的W/D、TLW、IQA和AI明显升高(P<0.01),肺组织形态学破坏显著,caspase-12和GRP78的mRNA和蛋白表达量增加(P<0.01),而CMC-Na组和sham组各项指标与control组无明显差异;与I/R组比较,YHTJF-L组、YHTJF-M组和YHTJF-H组各项指标(除GRP78外)数值均下降(P<0.01),组织损伤明显减轻。结论:YHTJF可有效减轻小鼠缺血/再灌注性肺损伤,其机制可能与其抑制caspase-12通路所致凋亡有关。     

不同脂肪乳剂对阻塞性黄疸大鼠肝功能和形态学的影响

研究 TPN中不同的脂肪乳剂对阻塞性黄疸肝损大鼠肝形态学和功能的影响 ,为临床此类病人营养支持时选择TPN配方提供依据。取 Sprague- Dawley封闭群大鼠 36只 ,体重为 30 0～ 35 0 g。实验前适应性饲养一周。随机分为 4组 ,每组 9只。其中 A组 :假手术经口饮食对照组 (SHAM-对照组 )、B组 :胆总管结扎经口饮食对照组 (CBDL-对照 )、C组 :胆总管结扎 TPN组 ,以长链脂肪酸为脂肪来源 (CBDL+L CT)、D组 :胆总管结扎 TPN组 ,以中长链脂肪酸为脂肪来源 (CBDL+MCT/ L CT)。分别于 TPN0、72 h和 12 0 h处死。处死前采血 ,检测肝…     

氯离子通道阻滞剂通过抑制MAPK通路减轻低氧高二氧化碳性肺血管收缩

目的：探究氯离子通道阻滞剂尼氟灭酸对低氧高二氧化碳性肺血管收缩（HHPV）的影响及与MAPK信号通路的关系。方法：采用大鼠HHPV模型,将所有二级肺动脉环随机分为：常氧组（N组）、低氧高二氧化碳组（H组）、DMSO组（HD组）、尼氟灭酸组（NFA组）、尼氟灭酸＋SB203580组（NFA＋SB组）、尼氟灭酸＋U0126组（NFA＋U组）,按照低氧高二氧化碳反应性测定的方法测定各组肺动脉环的张力变化。结果：NFA＋SB组、NFA＋U组二级肺动脉环的收缩峰值较HD组均明显下降（P〈0．05和尸〈0．01）,但I期快速收缩和I期快速舒张均无明显差异（均P〉0．05）;NFA＋SB组的收缩峰值较NFA组明显下降（P〈0．05）,但NFA＋U组的收缩峰值较NFA组无明显变化（P〉0．05）。结论：氯离子通道阻滞剂可通过抑制MAPK信号通路,减轻二级肺动脉环Ⅱ期持续性收缩,并逆转为舒张状态,从而发挥拮抗HHPV的作用。     

MAPK通路抑制剂对三七皂苷单体R1减轻大鼠低氧高二氧化碳性肺血管收缩的影响

 目的：探讨三七皂苷单体R1对低氧高二氧化碳性肺血管收缩(HHPV)的影响及其与MAPK信号通路的关系。方法：采用大鼠离体肺动脉环灌流模型,随机将其分为：常氧组（N组）;低氧高二氧化碳组（H组）;低氧高二氧化碳+DMSO组（HD组）;低氧高二氧化碳+R1组,又分为低浓度组（RL组）、中浓度组（RM组）和高浓度组（RH组）;低氧高二氧化碳+SB203580组（S组）;低氧高二氧化碳+U0126组（U组）;低氧高二氧化碳+R1+SB203580组（RS组）;低氧高二氧化碳+R1+U0126组（RU组）。观察二级肺动脉环在常氧及急性低氧高二氧化碳条件下的张力变化。在急性低氧高二氧化碳条件下,观察不同浓度R1孵育及最佳浓度R1分别与SB203580、U0126联合孵育对HHPV三期变化的影响,按照低氧高二氧化碳反应性测定方法测定血管张力变化值。结果：在急性低氧高二氧化碳条件下：（1）二级肺动脉呈现双相性收缩变化,与N组相比显著差异（P＜005或P＜001）;(2)HD组和RL组能明显缓解HHPV的I期快速收缩,逆转II期持续收缩,RM组作用不明显,RH组增强HHPV的I期快速收缩和II期持续收缩。与HD组比较,RL和RH组有显著差异（P＜005或P＜001）;(3)RS组和RU组收缩峰值较HD组均明显下降,II期持续收缩逆转为舒张状态。与RL组相比,RS组和RU组HHPV显著缓解(P＜005或P＜001)。与S组和U组相比,RS组和RU组HHPV显著缓解(P＜005或P＜001)。结论：低浓度（8 mg/L）三七皂苷单体R1可减轻大鼠急性HHPV,其机制可能与MAPK（p38 MAPK和ERK1/2）信号通路的参与有关。     

CPBL教学法在医学本科生教学实践中的建立及应用

目的探讨CPBL(Case-Problem Based Learning)教学法在医学本科生教学实践中的建立及应用。方法针对温州医科大学医学本科生教学活动的现状,建立并应用了CPBL教学法,对病理生理学课程的课堂教学进行一系列的改革,并初步总结了改革方案的实施成果。结果 CPBL教学法进一步激发了医学本科学生学习的兴趣,启发了学生的思维,提高了学生学习的主动性,培养了学生独立思考问题和解决问题的能力,更好地发挥了本课程的基础-临床的桥梁作用。结论在医学本科生教学实践中,建立并应用CPBL教学法是行之有效的,值得进一步推广。     

靶向小干扰RNA对小鼠肺缺血/再灌注损伤时细胞凋亡及CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白的作用

目的 观察靶向小干扰RNA (siRNA)对小鼠肺缺血/再灌注损伤(PIRI)时细胞凋亡及CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的影响.方法 荧光标记法观察靶向siRNA在小鼠体内的分布并评估转染效率.C57BL/6J小鼠50只,随机分为5组(n=10):假手术组(Sham组)、缺血/再灌注组(I/R组)、I/R+载体组(VR+ Vehicle组)、I/R+阴性对照组(I/R+ Control-siRNA组)和I/R+ CHOP-siRNA组(I/R+ CHOP-siRNA组).取左肺,检测肺湿/干重比(W/D)、总肺水含量(TLW)和肺泡损伤定量评估(IQA),光镜和电镜观察肺组织结构改变,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot检测CHOP、葡萄糖调节蛋白78 (GRP78) mRNA和蛋白表达水平,原位末端转移酶标记(TUNEL)法检测细胞凋亡指数(AI).结果 靶向siRNA通过滴鼻法可有效分布于肺脏中.与Sham组比较,I/R组中CHOP、GRP78 mRNA和蛋白表达水平(0.80±0.03、0.80±0.02;0.80±0.04、0.84±0.02)均升高(P ＜0.05),W/D(5.24±0.49)、TLW(4.24 ±0.49)、IQA[(42.80 ±4.21)％]和AI[(34.50±1.51)％]均明显增加(P＜0.01)；肺组织形态结构发生明显损伤；与I/R+ Vehicle组和I/R+ Control-siRNA组比较,I/R+ CHOP-siRNA组中GRP78 mRNA和蛋白表达水平(0.84±0.04、0.85±0.04)无明显变化(P＞0.05),而CHOP mRNA和蛋白表达水平(0.40±0.03、0.44±0.04)均降低(P＜0.05),W/D(2.54±0.24)、TLW(1.54±0.24)、IQA[(16.71±2.33)％]和AI[(11.50±1.58)％]亦均降低(P＜0.01)；肺组织形态结构损伤减轻.结论 靶向siRNA对I/R损伤肺具有良好的保护作用,其机制可能与其对抗过度的未折叠蛋白反应(UPR)中CHOP介导的细胞凋亡有关.     

垃圾填埋渗滤液氨氮的吹脱处理工艺技术研究

研究了吹脱法去除垃圾渗滤液中高浓度氨氮的可行性,对吹脱过程的各个影响因素：pH值、温度、气液比、吹脱时间等进行分析探讨,认为吹脱法去除垃圾渗滤液中高浓度氨氮是可行的。