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目的 克隆ATM全长cDNA及含特异功能域的cDNA片段,寻找与ATM相互作用的蛋白,分析ATM在DNA损伤名的分子机理。方法 利用长片段PC白话 增法,从人外周血来源的cDNA库中扩增ATMcDNA;利用酵母双杂交系统筛选人外周血来源的cDNA库中与ATM相互作用的蛋白。结果 经重叠PCR扩增到ATM全长cDNA,并筛选到数条与ATMP13K激酶区相互作用的cDNA,并对其序列进行分析。结果 A 相似文献
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目的:探讨活化淋巴细胞中Survivin蛋白诱导表达的信号转导通路、分子级联反应和生物效应,揭示Survivin蛋白表达调控的分子机制.方法:用PHA和rhIL-2刺激培养人外周血单个核细胞,附加JAK抑制剂-AG490的处理,以Western blot检测Survivin和相关蛋白的表达;以流式细胞术(FCM)分析细胞周期和细胞分裂增殖.结果:刺激培养的细胞按照时序先后出现的分子和细胞学反应为:Stat3和Stat5磷酸化→CyclinD3、CyclinE蛋白水平上调→细胞进入S期及Survivin蛋白起始表达→细胞有丝分裂及Survivin蛋白表达水平增加.AG490对于上述反应均呈现明显的抑制作用,但对周期抑制蛋白P21和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平没有影响.结论:Survivin蛋白的表达依赖JAK-Stat信号转导通路的早期活化,通过上调CyclinD3和CyclinE周期蛋白水平,启动细胞周期的运行,诱导Survivin蛋白的周期时相依赖性表达,参与细胞有丝分裂与增殖. 相似文献
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DNA双链断裂感应分子ATM能与PTC1相互作用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:研究DNA双链断裂感应分子ATM与原癌基因ret重排活化蛋白PTC1的相互作用。方法:用Flag抗体Western印迹检测,ATM免疫共沉淀真核细胞内过表达的PTC1;RET抗体检测ATM免疫共沉淀真核细胞内过表达的c-ret;用HA/myc抗体Western印迹检测,HA-ret TK myc-LZPR免疫共沉淀蛋白复合物;荧光蛋白标记的亚细胞定位。结果:PTC1可以与ATM激酶相互作用,此作用不依赖于电离辐射,且不被PI3K家族特异性抑制剂沃氏蓝霉素(wortmannin)所抑制,而野生型RET蛋白则不能同ATM结合;缺失体实验进一步证明两者的结合区段为ATM的LZPR结构域与PTC1的酪氨酸激酶结构域,构建PTC1绿色荧光蛋白表达质粒的亚细胞定位实验显示,PTC1以弥散形式分布于细胞质内。结论:胞浆蛋白PTC1可能借债某种途径使ATM在DNA损伤反应发生后重新定位,介导了细胞的恶性转化机制。 相似文献
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目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDIs)诱导肿瘤细胞产生周期阻滞以及诱导p21^WAF1/CIP1表达的分子机制。方法:以人宫颈癌HeLa细胞为模型,用曲古抑茵素A(TSA)处理HeLa细胞,通过流式细胞术检测细胞周期及凋亡,通过Western印迹及RT-PCR检测周期相关分子的蛋白及mRNA的表达;并构建TSA靶分子启动子区的荧光素酶报告质粒,进一步检测TSA的主要作用位点,寻找相关作用途径。结果与结论:TSA可诱导HeLa细胞发生周期阻滞,并呈现明显的剂量和时间依赖关系,加大用药剂量及延长用药时间可诱导凋亡。TSA可显著诱导p21^WAF1/CIP1的表达,表现为转录水平的调节,其变化可以指示周期阻滞的程度。p21^WAF1/CIP1启动子区3′端是TSA作用的主要位点,同样被TSA诱导表达增加的p53很可能通过与其效应元件的结合而使TSA诱导p21^WAF1/CIP1表达的总效果增强。 相似文献
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53BP1蛋白对P53转录调控活性的影响 总被引:1,自引:1,他引:0
目的:探索含有BRCT结构域的P53分子结合蛋白53BP1调控P53转录活性的机制。方法:通过PCR的方法获得缺失不同结构域的53BP1基因突变体53BP1△1,53BP1△2,53BP1△3与53BP1△4,并采用双荧光素酶报告基因系统分析了它们对P53蛋白转录活性的影响。结果与结论:野生型53BP1蛋白可以明显提高P53的转录活性,其C端的BRCT结构域与核定位信号的存在为必不可少,而N端与P202蛋白相互结合结构域的存在也可以促进P53的转录活性.提示53BP1蛋白不同功能结构域之间的协同作用是保证其行使正常生理功能的前提条件。 相似文献
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目的 :阐明凋亡抑制蛋白存活素 (survivin)的基因表达调控机制。方法 :采用PCR的方法从人HeLaS3细胞基因组DNA中扩增得到survivin基因上、下游侧翼序列 ,将它们分别克隆至报告基因表达载体中 ,依据报告基因的瞬时表达结果确定它们对survivin基因的表达调控作用 ,进而采用定向缺失的方法确定其核心启动子 ,并通过凝胶阻滞实验进行验证。结果与结论 :survivin基因起始密码子上游 2 6 8bp的序列是指导其在肿瘤细胞中周期性表达的最小核心启动子 (mini_promoter)。此外 ,体外培养的正常人外周血淋巴细胞经PHA_P与IL_2的刺激增殖的同时 ,survivin基因也得以表达 ,提示survivin基因的表达与细胞的增殖过程密切相关。 相似文献