日本沼虾酚氧化酶原基因cDNA的全长克隆及表达分析 

目的 克隆日本沼虾酚氧化酶原（proPO）基因,进行生物信息学及时空表达分析。方法 利用RT-PCR和快速扩增cDNA末端（RACE）技术从血细胞中克隆proPO基因cDNA全长序列,用生物软件对其序列进行生物信息学分析; proPO基因时空表达分析采用RT-PCR和Real-time PCR方法;腹部肌肉注射嗜水气单胞菌（5.0×10SUP>9/SUP>/L）诱导酚氧化酶（PO）,20μl/只,注射后3、6、12、24h取其血淋巴,分别测定血细胞 proPO mRNA水平及血清酚氧化酶（PO）活力。结果 日本沼虾proPO基因cDNA全长2428bp,包含71 bp的 5’UTR、344 bp的 3’UTR 和2013 bp的开放阅读框（ORF）。ORF编码 671 个氨基酸,预测蛋白分子量为76.5kD,理论等电点（pI）约为7.31;含有2个保守的铜离子结合位点和6个组氨酸残基、1个蛋白酶水解位点和硫酯样的基序(GCGWPRHM);含有3个血蓝蛋白结构域;与罗氏沼虾proPO的相似性最高,为93%,与其他甲壳动物proPO相似     

外源精脒和精胺可诱导大鼠早期再生肝抗酶的表达

目的探讨精脒和精胺对大鼠早期再生肝抗酶(AZ)表达的影响,及在肝再生中的作用。方法外源多胺(溶于0.9%NaCl)皮下注射雄性SD大鼠(180～200g),进行部分肝切除(PH)诱导。采用RT-PCR和Western blotting方法进行PH后大鼠再生肝中AZ基因转录量和蛋白表达量的分析。结果对照组完整肝脏(PH后0h)中,AZ基因转录量、蛋白表达量较低,PH后均快速升高,3h达到峰值,5h出现明显下降,7h再次升高并达到峰值,之后缓慢下降。外源多胺处理后,两种剂量精脒(0.03mg/kg和0.15mg/kg)和精胺(0.06mg/kg和6mg/kg)处理组AZ mRNA及蛋白表达水平变化趋势与对照组相似,但低剂量处理组远远低于相应时间点高剂量处理组。精胺的作用效果更明显,作用时间更持久。结论外源多胺对大鼠早期再生肝AZ mRNA及蛋白表达具有剂量依赖性促进作用,而精胺的作用较强,精脒较弱。     

氯氰菊脂顺(反)式异构体对美洲大蠊中枢神经大轴突钠、钾通道的调制作用

氯氰菊酯是除虫菊酯衍生物的一种新型杀虫剂,具有高效低毒的特点。近几年来,在防治家庭卫生害虫中得到广泛应用。为了更加有效地控制传病昆虫,提高人们的健康水平,防止环境污染,延缓传病昆虫抗药性的产生,本文通过氯氰菊酯顺(反)异构体对美洲大蠊中枢神经大轴突钠、钾通道的调     

罗氏海盘车、海燕、金氏真蛇尾皂甙的制备及性质鉴定比较

采用甲醇法分分别对罗氏海盘车、海燕、金氏真蛇尾３种棘皮动物的皂甙进行了提取制备,其产率分别为０．０２３３％、０．０５２２％、０．１１５４％,结果表明金氏真蛇尾的皂甙含量最高,并且对３种皂甙进行理化性质实验、溶血实验、紫外光谱和红外光谱和红外光谱鉴定比较,证明提取物为海星总皂甙,由罗氏海盘车、海燕、金氏真蛇尾提取的皂甙溶点分别为１７５～１７８℃、２４２～２５５℃、２４４～２６０℃。     

皮质酮对大鼠早期再生肝抗酶mRNA及蛋白表达的影响

目的 研究外源皮质酮对部分肝切除(PH)诱导的大鼠早期再生肝抗酶mRNA及蛋白水平的影响.方法 PH前3d对成年雄性SD大鼠进行双侧肾上腺切除术,皮质酮悬浮于芝麻油中皮下注射去肾上腺鼠,抗酶mRNA及其蛋白水平的测定采用RT-PCR和Western blotting法. 结果 与对照组(n=6,以下相同)相比,去肾上腺组及10mg/kg、20mg/kg体重皮质酮处理组抗酶mRNA水平变化不明显,而40mg/kg体重皮质酮处理能显著刺激其转录.在PH后5、7、9h,去肾上腺术鼠抗酶蛋白水平显著低于相应时间点的对照组;皮质酮处理后,蛋白水平在所观察的整个实验过程中均显著上升,且剂量越高,蛋白含量越多,尤其在PH后5h,10、20和40mg/kg体重皮质酮处理组分别比同时间点对照组高43%、79%和93%. 结论 皮质酮对大鼠早期再生肝抗酶蛋白的合成具有剂量依赖性促进作用.     

外源性雌二醇对大鼠再生肝细胞转录活性的调节

目的 探讨雌激素对大鼠再生肝细胞转录活性的影响。方法 放射免疫法测定血清中雌二醇(E2)含量；核仁组成区相关嗜银蛋白(AgNORs)染色法，测定AgNORs颗粒数。结果 去卵巢后大鼠血清中E2含量随去卵巢天数的增加而逐渐降低，至去卵巢后第15d已测不出血清中有E2存在；去卵巢大鼠部分肝切除(PH)后0～24h，外源E2有促进肝细胞转录的作用，且AgNORs颗粒数的增加幅度与外源E2剂量呈正相关；去卵巢大鼠PH后24～36h，外源E2剂量越高，AgNORs颗粒数增加量越小，但均高于对照组。结论 雌激素对再生肝细胞转录活性有调节作用。     

高效液相色谱法测定肝组织鸟氨酸脱羧酶活性

目的　建立肝组织鸟氨酸脱羧酶 (ODC)活性的高效液相色谱测定方法。方法　高效液相色谱法测定 3 0 min内 ODC催化产生的腐胺。结果　腐胺在 1.0 74～ 68.746μm ol· L - 1时线性关系良好。最低检测量为 0 .0 4nmol,测定结果的重现性好 ,变异系数为 6.84%。部分肝切除后6h,余留肝组织 ODC活性明显高于正常对照组 (P<0 .0 1)。结论　建立了可靠的、灵敏度较高的ODC测定方法     

外源多胺对大鼠再生肝细胞鸟氨酸脱羧酶基因转录的调节

目的 研究天然多胺(腐胺、精脒和精胺)对大鼠再生肝细胞鸟氨酸脱羧酶(ODC)基因转录的调节,探讨多胺在肝再生中的作用.方法 大鼠部分肝切除术诱导再生肝,采用原位杂交技术分析ODC mRNA的表达量,外源多胺(溶于0.9%NaCl)的处理用皮下注射法.结果 外源多胺处理后,再生肝ODC mRNA水平的变化趋势与对照组相似,但不同种类、剂量的多胺,结果差异明显.在所观察到的整个肝再生期间,高剂量腐胺(20 mg/kg体重)处理组mRNA水平始终低于对照组,特别在部分肝切除后2、4和10 h与对照组相比具有显著性差异(P＜0.05);低剂量(0.02 mg/kg体重)的腐胺处理组,只在4 h和12 h显著高于对照组.高剂量精脒(0.15 mg/kg体重)处理组的ODC mRNA水平始终低于对照组(在10 h例外);而低剂量(0.03 mg/kg体重)处理组则不同,ODC mRNA水平表现出先抑制(在2 h)后促进(在4 h和6 h)的特点.精胺的作用与精脒相似.结论 不同浓度的多胺(主要是精脒和精胺)对大鼠再生肝细胞ODC基因转录存在着反馈调节作用.     

皮质酮对大鼠肝再生过程中鸟氨酸脱羧酶的抑制

目的 研究大鼠体内主要的糖皮质激素--皮质酮对部分肝切除(PH)诱导的再生肝鸟氨酸脱羧酶(ODC)基因表达及酶活性的影响.方法 乙醚麻醉大鼠,于PH前3d行双侧肾上腺切除术及假手术,皮质酮悬浮于芝麻油中皮下注射玄肾上腺鼠.用RT-PCR、Western blotting及高效液相色谱法(HPLC)分别测定ODC mRNA、ODC蛋白及酶活性.结果 与再生肝相比,完整肝中ODC mRNA、蛋白及其酶活性水平较低.PH后所有组(每组n=6)中ODCmRNA水平均显著升高,5h达到峰值.7h前mRNA含量由高到低依次为去肾上腺组、去肾上腺假手术组(即对照组)、10和40ms/kg体重皮质酮处理组.去肾上腺组(n=13,下同)的ODC蛋白量高于对照组.10mg/kg体重皮质酮处理,在PH后0～24h下降,40mg/kg皮质酬处理组最低.PH后,所有组(每组n=6)ODC活性迅速升高,6h达到峰值;皮质酮处理后活性在6h下降显著,40ms/kg体重皮质酮处理组活性最低.结论 皮质酮处理后,大鼠完整肝及再生肝中ODC mRNA及蛋白水平呈剂量依赖性下降;ODC活性变化的部分原因是由于ODC mRNA及其蛋白量的改变.     

外源多胺对大鼠早期再生肝鸟氨酸脱羧酶蛋白水平的调节

目的 研究多胺(腐胺、精脒和精胺)对大鼠再生肝鸟氨酸脱羧酶(ODC)蛋白水平的调节,分析多胺在肝再生中的作用.方法 外源多胺(溶于0.9%NaCl)皮下注射雄性SD大鼠(180～220 g),部分肝切除(PH)诱导的大鼠再生肝中ODC蛋白水平的分析采用免疫印迹(Western blotting)方法.结果 高剂量的腐胺(20 ms/kg体重)、精脒(0.15 mg/kg体重)和精胺(6 mg/kg体重)处理后,ODC蛋白水平在PH后12 h内均低于对照组,且各组间变化趋势相近;而低剂量腐胺(0.02 mg/kg体重)、精脒(0.03 mg/kg体重)及精胺(0.06 ms/kg体重)处理组在PH后4h ODC水平迅速升高,分别比对照组高15.1%、29.5%和30.3%.结论 一定剂量的多胺对大鼠早期再生肝ODC蛋白水平有反馈调节作用,其中精脒、精胺的作用较强,腐胺较弱.