趋化因子RANTES、IL-17 以及TGF-β1 在HBV-GN 患者应用激素及免疫抑制剂的趋势研究

目的:探讨乙型肝炎病毒相关性肾炎(HBV-GN)患者经糖皮质激素联合免疫抑制剂治疗后活性调节蛋白(RANTES)、白介素-17(IL-17)、转化生长因子茁1(TGF-β1)水平的变化趋势以及与临床疗效的相关性。方法:选择2012 年1月至2017 年5 月期间在我院肾内科接受小剂量甲泼尼龙片联合环孢素A 治疗的40 例HBV-GN 患者纳入研究。分别在治疗前、治疗后4 周、8 周、12 周、16 周、20 周和24 周采集血液样本和尿液样本,检测患者正常T 细胞表达和分泌的RANTES、IL-17、TGF-β1 水平及血清白蛋白(ALB)、丙氨酸转氨酶(ALT)、三酰甘油(TG)、总胆红素(TBIL)、结合胆红素(DBIL)、血肌酐(Scr)、内生肌酐清除率(CCR)、尿素氮(BUN)水平变化以及临床疗效。结果:治疗24 周后,患者总有效率为72.5%,9 例(22.5%)患者出现HBV-DNA 转阳性,与治疗4 周相比,转阳率明显增加(P<0.05)。患者自治疗8 周起,平均24 h 蛋白尿含量、TGTBIL 较治疗前明显降低(P<0.05),而ALB 较治疗前明显升高(P<0.05),Scr 和CCR 水平基本保证正常(P>0.05)。经治疗后,相同时间点检测HBV-DNA 转阳的患者血清中RANTES、IL-17、TGF-β1 的含量均高于HBV-DNA(-)患者(P<0.05)。但是随着治疗时间的延长,HBV-DNA(-) 患者血清中平均RANTES、IL-17、TGF-β1 的含量均低于治疗前(P <0.05),且RANTES、IL-17、TGF-β1 水平与患者缓解率呈负相关性(P<0.05)。结论:RANTES、IL-17、TGF-β1 可作为预测接受糖皮质激素联合免疫抑制剂治疗的HBV-GN 患者临床疗效的评估指标,为下一步治疗提供实验室参考。     

LINC00462 通过MYC/ABCC3轴影响肾透明细胞癌细胞糖酵解进而调控其对顺铂的敏感性

目的：探讨LINC00462 招募转录因子 MYC 激活 ABCC3 对肾透明细胞癌（ccRCC）顺铂敏感性的影响及其机制。方法：数据库分析ccRCC 组织中ABCC3、MYC和LINC00462 的表达及其相关性,并分析ABCC3 基因的富集通路。常规培养人肾小管上皮细胞（HK-2）和ccRCC 细胞（A-498、786-O 和 Caki-2）,将 si-LINC00462、oe-ABCC3、si-ABCC3、si-MYC、si-LINC00462-NC、oe-ABCC3-NC、si-ABCC3-NC 和 si-MYC-NC 核酸序列分别转染 A-498 或786-O 细胞,分为si-LINC00462组、si-LINC00462-NC 组、oe-ABCC3 组、oe-ABCC3-NC 组、si-ABCC3 组、si-ABCC3-NC 组、si-MYC 组、si-MYC-NC 组;用2-脱氧-D-葡萄糖（2-DG）进行回复实验,构建oe-NC+PBS 组、oe-ABCC3+PBS组、oe-ABCC3+2-DG组;为探究ccRCC细胞LINC00462/MYC/ABCC3 轴对顺铂敏感性的影响,构建si-NC+oe-NC 组、si-LINC00462+oe-NC 组、si-LINC00462+oe-ABCC3 组。qPCR 法检测ABCC3、MYC和LINC00462 在ccRCC细胞中的表达,CCK-8法检测细胞增殖活力,CCK-8法分析梯度浓度顺铂处理ccRCC细胞后IC50值,WB法检测糖酵解代谢途径相关蛋白的表达,Seahorse XP96 法检测各处理组细胞的胞外酸化率（ECAR）和耗氧率（OCR）,试剂盒检测细胞中丙酮酸、乳酸、ATP水平。双荧光素酶报告基因和染色质免疫共沉淀（ChIP）实验验证ABCC3与MYC间的结合关系,RNA结合蛋白免疫沉淀（RIP）实验验证LINC00462 和MYC的结合关系。结果：数据库分析和qPCR实验结果显示,ABCC3在ccRCC组织和细胞中呈高表达,差异基因富集在糖酵解通路上。敲减或过表达ABCC3能够增加A-498细胞或降低786-O细胞对顺铂的敏感性,ABCC3可通过促进有氧糖酵解抑制A-498 细胞对顺铂的敏感性,2-DG处理可以逆转过表达ABCC3对ccRCC 细胞对顺铂敏感性的抑制作用。MYC可直接和ABCC3结合,LINC00462 可招募转录因子MYC;敲低LINC00462 可抑制ABCC3的表达,敲低LINC00462 可抑制ccRCC细胞的有氧糖酵解,并提高其对顺铂敏感性;而进一步过表达ABCC3可逆转敲低LINC00462 对ccRCC 细胞有氧糖酵解的抑制作用和顺铂敏感性的提高。结论：LINC00462 通过招募转录因子MYC 激活ABCC3的表达促进ccRCC细胞的糖酵解,进而促进ccRCC细胞对顺铂敏感性。     

HOTTIP通过竞争性结合miR-506调节Vimentin基因的表达调控肾透明细胞癌细胞迁移

目的:探究HOTTIP通过竞争性结合miR-506来调节Vimentin基因的表达调控肾透明细胞癌细胞迁移的作用机制。方法:通过生信分析TCGA数据库中肾透明细胞癌的差异表达miRNA、mRNA、lncRNA。利用miRcode数据库数据对lncRNA-miRNA的结合进行预测,并对miRNA调控的靶基因进行预测。qRT-PCR检测肾透明细胞癌细胞系中HOTTIP、miR-506、Vimentin的表达,RNA pull-down实验检测miR-506和HOTTIP结合,RIP实验检测miR-506与HOTTIP和Vimentin的结合,Transwell和划痕愈合实验检测786-O细胞迁移能力。结果:HOTTIP在肾透明细胞癌中显著上调,并且与患者预后显著相关,其靶miRNA miR-506在肾透明细胞癌中显著下调。miR-506的下游调控基因Vimentin在肾透明细胞癌中显著上调并且与患者预后显著相关。HOTTIP通过竞争性结合miR-506来调节Vimentin基因的表达。干扰HOTTIP后,肾透明细胞癌细胞的迁移能力显著降低,而干扰HOTTIP的同时沉默miR-506或过表达...     

SNHG17通过与转录因子E2F1结合激活CENPE促进肾透明细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探讨SNHG17通过与转录因子E2F1结合激活CENPE对肾透明细胞癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:生信分析SNHG17、E2F1和CENPE在肾透明细胞癌肿瘤组织中的表达,生信分析三者的调控关系。qRT-PCR检测SNHG17、E2F1和CENPE的mRNA水平。Western blot检测E2F1和CENPE的蛋白表达。CCK-8、Transwell实验分别检测细胞增殖、迁移和侵袭情况。RIP实验验证SNHG17与E2F1的结合关系;ChIP实验检测E2F1与CENPE的结合关系。构建异种瘤模型验证SNHG17对肾透明细胞癌生长的影响。结果:SNHG17和CENPE在肾透明细胞癌组织和细胞系中的表达水平均显著上调。沉默SNHG17转染肾透明细胞后,癌细胞的增殖、迁移和侵袭受到明显抑制。体内实验也验证了沉默SNHG17抑制肾透明细胞癌的生长。此外,RIP实验显示SNHG17能够与转录因子E2F1结合。ChIP实验检测转录因子E2F1与CENPE启动子区的结合,结果表明E2F1能够显著富集在CENPE的启动子区。体外功能实验表明SNHG17通过招募E2F1激活CENPE表达从...     

lncRNA LUCAT1通过调控miR-141-3p/SOX11轴促进肾透明细胞癌细胞的生长和转移的机制研究

目的:探讨lncRNA LUCAT1通过调控miR-141-3p/SOX11轴对肾透明细胞癌细胞(kidney renal clear cell carcinoma, KIRC)的生长和转移的影响。方法:利用生信分析LUCAT1在KIRC中的表达，并预测下游的miRNA/mRNA调控轴；qRT-PCR用于检测LUCAT1、miR-141-3p和SOX11的表达，Western blot用于检测SOX11的表达；细胞生物学功能实验观察KIRC细胞的增殖、迁移和侵袭状况；双荧光素酶实验验证LUCAT1和miR-141-3p以及miR-141-3p和SOX11靶向结合关系；RIP实验验证LUCAT1和miR-141-3p的结合关系；裸鼠实验观察LUCAT1对肿瘤体内生长的影响。结果:通过生信分析和细胞实验发现LUCAT1和SOX11在KIRC中高表达，miR-141-3p在KIRC中低表达；MTT、伤口愈合和细胞侵袭实验结果显示LUCAT1促进KIRC细胞的增殖、迁移和侵袭。随后在双荧光素酶实验中显示LUCAT1可以作为miR-141-3p的分子海绵，同时我们还证实miR-141-3p能回复...