应用LAMP技术对4种疟原虫进行属种鉴定的初步研究

摘要：目的建立对4种感染人的疟原虫虫属及定量的环介导等温扩增法（100p—mediated isothermal amplification,LAMP）基因检测方法。方法根据恶性疟原虫、三日疟原虫、卵形疟原虫、间El疟原虫的18SrRNA基因共有保守序列及LAMP技术原理,设计一套含有6条疟原虫虫属特异性引物的LAMP反应体系,产物经SYBRGreenI进行显色反应及电泳分析,观察其特征条带的情况,利用LAMP技术检测上述4种疟原虫DNA及其它12种相关寄生虫DNA评价反应特异性,利用PCR技术为参照对LAMP技术检测疟原虫虫属试验的敏感性,利用疟原虫重组质粒探索建立疟原虫LAMP定量的可能性。结果4种疟原虫LAMP产物经显色后呈绿色,经电泳后呈特征性梯状条带,阴性对照及其它相关寄生虫DNA无明显扩增,重组质粒浓度在1．42X10^4～1．42X10^9拷贝机l范围内时,反应循环阈值与模板浓度有良好的线性关系（r=0．9995）。与PCR方法相比较,建立的疟原虫虫属LAMP检测方法的敏感性是其10倍,检出限达到1．42X10^1拷N／μl。结论建立的检测疟原虫属种、数量的LAMP方法具有较高的特异性和敏感性,适合疟疾防治检测的需要。     

沙门菌环介导等温扩增快速检测方法的建立

由微生物引起的食源性疾病事件中,沙门菌始终是最常见和最主要的病原因子,检测和控制食品中的沙门菌对有效控制其传播和预防食物中毒非常重要.     

心理干预对脑瘫患儿家长焦虑及抑郁情绪的影响

目的：研究脑瘫患儿家长存在的焦虑、抑郁情绪及心理干预的效果。方法将80例脑瘫患儿家长随机分为干预组与对照组,每组各40例。应用焦虑自评量表（SAS）、抑郁自评量表（SDS）对家长进行评分。干预组实施专业心理护理,对照组未进行任何形式的心理干预。比较两组入院时（干预前）、3个疗程后（干预后）的SAS、SDS评分。结果干预组干预后的SAS、SDS评分均低于干预前,差异有统计学意义（P＜0.01）,对照组干预前后的SAS、SDS评分比较,差异无统计学意义（P＞0.05）;干预前,两组的SAS、SDS评分比较,差异无统计学意义（P＞0.05）,干预后,干预组的SAS、SDS评分均低于对照组。结论对脑瘫患儿治疗时,同时对患儿家长进行心理干预,有利于缓解患儿家长的焦虑、抑郁情绪。     

志贺菌环介导等温扩增检测方法建立

目的 建立志贺菌环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法.方法 针对志贺菌侵袭性质粒抗原H基因(ipaH)特征性保守序列设计1套4条引物,应用LAMP技术对21株志贺菌和非志贺菌进行特异性检测以确定其特异性;使用LAMP和聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)对ipaH基因重组质粒倍比稀释液进行检测以确定其灵敏度;使用重组质粒计算其初始拷贝数与反应时间之间的线性关系以评估定量检测的可能性.结果 荧光定量LAMP扩增曲线图显示,LAMP技术可以在1 h内获得结果;有较好的特异性,与其他17种食源性致病菌无交叉反应;LAMP检测技术的灵敏度高出经典PCR技术10倍以上,检测限达到200拷贝/μL;平均变异系数＜5%;反应时间与模板初始浓度有良好的线性关系(R2=0.985 5).结论 志贺菌环介导等温扩增检测体系是一种快速、灵敏、特异的核酸筛查方法,为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段.     

脑瘫患儿家长心理护理的新进展

脑性瘫痪是自受孕开始至婴儿期非进行性脑损伤或发育缺陷所导致的运动障碍及姿势异常为主要表现的临床综合征。可伴有不同程度的智力、视觉、听觉、感知觉、癫痫、心理行为异常等。它的临床症状可随年龄增长、脑的发育和成熟而变化,但其中枢神经系统的病变难以改变。此类患儿的治疗是一个漫长的过程,需要长期的康复训练。但长时间慢性的应激刺激必然导致家长的心理和身体上的不良反应。     

临床护理路径在缺血性脑卒中康复护理中的应用研究

目的 观察研究临床护理路径在缺血性脑卒中康复护理中的应用价值.方法 随机选取2014年1月—2015年6月在该院住院治疗的缺血性脑卒中的患者40名,随机将这40例患者分成观察组和对照组,每组20人,对照组患者采用该院常规的护理方法,观察组采用该院临床护理路径进行康复护理,再随访3个月,观察对比两组患者护理前后NIHSS神经功能评分和Fugle-Meyer评分,以及患者及患者家属对护理的满意度.结果 护理前两组患者NIHSS神经功能评分和Fugle-Meyer评分无明显差异(P>0.05),护理3个月后,观察组的患者NIHSS神经功能评分和Fugle-Meyer评分明显比对照组患者好(P<0.05);观察组患者及家属对护理的满意度为100.0%(20/20),对照组患者及家属对护理的满意度为75%(15/20),观察组的护理满意度明显较对照组高(P<0.05).结论 临床护理路径在缺血性脑卒中康复护理中的应用价值高,有利于患者的恢复,而且提高了临床护理效果.     

环介导等温扩增技术检测痰标本中结核分枝杆菌的研究

[目的]寻找1种快速的，且敏感度高，特异性强的结核分枝杆菌的检测方法。[方法]环介导等温扩增基因检测（Loop-mediated isothermal amplification LAMP）是一种便捷、灵敏度高而又特异性强的核酸基因扩增检测技术。木课题组根据结核分枝杆菌gyrB特征性序列设计3对特征性引物对痰液中和培养基中的结核分枝杆菌进行检测。其中1对环状引物结合于特征性序列中环状结构部分，可极大地加快LAMP反应速度，且不干扰内引物在LAMP反应中作用。（结果]实验结果表明：使用环状引物的LAMP反应可在0.5h内完成，总共分析时削不超过1h。LAMP检测技术的灵敏度比经典PCR技术高100倍左右，LAMP检测技术具有与实时PCR（Real-time PCR）技术相同的特异度。另外，由于LAMP检测技术是在恒温的情况下进行，不需要特别昂贵的仪器设备，检测方法简单，结果判定直接。（结论]该方法的特点和优势可以使之在基层实验室及现场监测方面广泛使用，在快速检测方面具有一定的开发潜力。     

荧光定量环介导等温扩增技术检测恶性疟原虫方法的研究

目的建立一种简便、快速和高灵敏度的恶性疟原虫的荧光定量环介导等温扩增检测方法。方法针对恶性疟原虫环子孢子蛋白（CSP）种属特异性基因保守区域8个位点设计3对引物,同时使用PCR法扩增恶性疟原虫219bp保守序列,经克隆后转化入工程菌株JM109感受态细胞中并提取重组质粒作为模板。以探索建立恶性疟原虫荧光定量环介导等温扩增检测技术,并对其试验重复性、灵敏度、特异性及适用性子以评估。结果在重组质粒浓度为1．06×10^4∽10^9拷贝／反应的范围内,标准曲线循环阈值与模板浓度有良好线性关系（相关系数0．9995）,CT值变异系数为6．29％,无非特异性扩增,初步临床试验结果表明,试验的灵敏度为90．00％,特异度为93．33％,准确性为91．67％,试验可在30min内完成。结论荧光定量环介导等温扩增技术检测恶性疟原虫简便、快速、敏感,具有广阔的应用前景。