虫草素通过ERK1/2、Ezrin和Akt信号通路抑制胆囊癌细胞SNU-308的增殖和迁移

目的:探讨虫草素对胆囊癌细胞SNU-308增殖和迁移的影响及其分子机制。方法:MTT法和平板集落形成实验检测不同浓度虫草素对胆囊癌SNU-308细胞活力和集落形成能力的影响;Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞凋亡和自噬相关蛋白以及Akt、ERK1/2和Ezrin蛋白的磷酸化水平;免疫荧光染色法检测细胞内LC3的表达水平;划痕愈合实验和Transwell实验检测虫草素对胆囊癌细胞迁移能力的影响;划痕实验检测Akt抑制剂和ERK1/2抑制剂及Ezrin基因沉默对细胞迁移能力的影响。结果:虫草素可显著抑制胆囊癌细胞的活力和集落形成能力(P0.05)。流式细胞术结果显示,虫草素可诱导胆囊癌细胞凋亡(P0.05)。Western blot结果显示,虫草素处理后Bcl-2表达降低,Bax、细胞色素C(Cyto C)、Fas、Fas L和cleaved caspase-3蛋白水平升高,自噬标识蛋白LC3-II/I比例和beclin 1表达上调(P0.05)。免疫荧光染色结果显示,虫草素处理后SNU-308细胞胞浆中LC3荧光颗粒的数量明显增多。划痕实验和Transwell实验结果显示虫草素可抑制细胞迁移(P0.05)。虫草素明显抑制Akt、ERK1/2和Ezrin蛋白的磷酸化水平(P0.05)。Ezrin基因沉默及Akti-1/2和GDC-0994均可抑制胆囊癌细胞的迁移作用(P0.05)。结论:虫草素通过诱导凋亡和自噬抑制胆囊癌细胞的增殖和迁移,其机制可能与调控ERK1/2,Ezrin和Akt信号通路有关。     

NVP-BEZ235诱导多囊肾大鼠胆管上皮细胞自噬的机制研究

 目的:探讨PI3K/Akt/mTOR双靶点抑制剂NVP-BEZ235诱导多囊肾(polycystic kidney,PCK)大鼠胆管上皮细胞自噬的作用。方法:免疫组化法检测p-mTOR和p-Akt在PCK大鼠胆管上皮细胞中的水平。WST-1比色法检测NVP-BEZ235对胆管细胞活力的抑制作用以及LC3、Beclin 1基因沉默和自噬特异性抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)对细胞活力的影响。蛋白免疫印迹法检测NVP-BEZ235对PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白及自噬标志蛋白LC3和Beclin 1的变化。结果:p-mTOR和p-Akt在PCK大鼠胆管上皮细胞中显著升高,NVP-BEZ235可明显抑制胆管上皮细胞的活力,且呈浓度和时间依赖性改变(P<0.05);NVP-BEZ235明显抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白的水平;并上调自噬标志蛋白LC3 II/LC3 I比值和Beclin 1蛋白的表达水平。LC3、Beclin 1基因沉默和3-MA均可明显减弱NVP-BEZ235对细胞活力的抑制作用(P<0.01)。结论:NVP-BEZ235可抑制PCK大鼠胆管上皮细胞的活力,其机制与自噬密切相关。     

AZD8055对胆管癌细胞自噬和凋亡的影响

目的:探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)双重抑制剂AZD8055对人胆管癌HuCCT1细胞自噬和凋亡的影响。方法:采用MTT法检测不同浓度的AZD8055对HuCCT1细胞活力的抑制作用;吖啶橙染色检测AZD8055处理胆管癌细胞后,细胞自噬小体形成情况;Western blot法观察细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3以及自噬相关标志蛋白beclin 1、LC3和p62的表达;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡。结果:AZD8055显著抑制胆管癌细胞的活力(P0.05)。吖啶橙染色后,AZD8055用药组橙红色颗粒增多。Western blot实验显示,AZD8055处理后,与对照组相比自噬标志蛋白beclin 1表达上调,LC3-II/LC3-I比例上调,p62表达下调;cleaved caspase-3表达降低,促凋亡蛋白Bax表达降低,抑凋亡蛋白Bcl-2表达升高(P0.05)。流式细胞术显示,AZD8055可抑制细胞凋亡。结论:AZD8055可抑制胆管癌细胞的生长,其机制可能与诱导细胞自噬相关。