NGF对哮喘豚鼠下呼吸道及内脏感觉传入部位TNF-αmRNA表达的上调作用

目的　探讨神经生长因子 (NGF)在哮喘发病中的作用及其神经免疫调节机制。　方法　应用原位杂交方法结合显微图像分析 ,研究实验性哮喘豚鼠下呼吸道和内脏感觉传入部位肿瘤坏死因子 αmRNA(TNF αmRNA)表达的变化以及NGF抗体对其的影响。　结果　生理盐水组与单纯致敏组TNF αmRNA的表达没有显著差异 (P >0 0 5 ) ;与这两个对照组相比 ,哮喘豚鼠TNF αmRNA的表达在气道上皮、肺内炎性细胞、C7～T5段脊神经节及脊髓后角内均明显上调 (P <0 0 1) ;在哮喘 +NGF抗体组 ,上述部位内TNF αmRNA的表达明显低于哮喘组 (P <0 0 1)。　结论　NGF诱发TNF α的表达可能是NGF参与哮喘发病的机制之一 ,NGF抗体抑制哮喘时下呼吸道和内脏感觉传入部位TNF αmRNA的表达可能是治疗哮喘的新途径。     

TrkA对哮喘小鼠下呼吸道气道阻力及IL-1β表达的上调作用

目的研究NGF的特异性高亲合力受体TrkA对哮喘小鼠下呼吸道气道阻力及IL-1β的表达的调节作用,探讨TrkA介导的信号通路在哮喘发病机制中的作用。方法BALB/c小鼠30只,按随机数字表法均分为正常对照组、哮喘组、TrkA抗体阻断组。利用An iRes2005肺功能仪测小鼠气道阻力,利用免疫组织化学方法测定IL-1β表达,M etamoph图象分析系统对结果进行分析。结果哮喘小鼠吸气阻力和呼气阻力明显高于正常组小鼠(P<0.01),TrkA组吸气阻力和呼气阻力明显低于哮喘组。免疫组织化学结果显示TrkA抗体阻断组肺(0.324±0.013)、C7-T5节段脊神经节(0.301±0.065)及对应的脊髓后角(0.216±0.019)IL-1β免疫阳性产物平均光密度值明显低于哮喘组小鼠(0.796±0.025、0.745±0.016、0.528±0.011,P<0.01)。结论NGF介导的TrkA通路的激活可上调IL-1β的表达,介导哮喘气道高反应和炎症反应。     

哮喘小鼠肺内及内脏感觉传入系统SH2-Bβ的表达

目的研究SH2-Bβ在哮喘小鼠肺及内脏感觉传入系统(C7~T5脊神经节及对应的脊髓后角)的表达,探讨SH2-Bβ在哮喘发病中的作用。方法BALB/c小鼠30只,按随机数字表法分为正常对照组、哮喘组,每组15只。利用免疫组织化学方法测定两组小鼠肺、C7~T5脊神经节及对应的脊髓后角SH2-Bβ的免疫反应变化;用免疫印迹法(Western blotting)检测肺及C7~T5节段脊髓SH2-Bβ及神经生长因子(NGF)的免疫反应变化;Metamoph图像分析系统对结果进行分析。结果免疫组织化学结果显示哮喘小鼠肺、C7~T5节段脊神经节及对应的脊髓后角SH2-Bβ免疫阳性产物平均光密度值分别为0.806±0.023、0.766±0.018、0.547±0.014,明显高于对照组(0.243±0.018、0.131±0.011、0.215±0.029)(P<0.01)。Western blotting显示SH2-Bβ及NGF在哮喘小鼠的C7~T5节段脊髓及肺内表达明显强于对照组;正常对照组脊髓及肺内的平均相对光密度值分别为0.346±0.017和0.512±0.018,哮喘组为0.738±0.021和1.526±0.022。NGF在正常对照组脊髓及肺内的平均相对光密度值分别为0.357±0.021和0.734±0.013,哮喘组为1.445±0.015和1.265±0.018;且SH2-Bβ与NGF光密度值呈正相关(r=0.651,P<0.01)。结论结果提示,SH2-Bβ在哮喘小鼠肺、C7~T5节段脊神经节及对应的脊髓后角过表达,可能是NGF参与哮喘发病的重要信号分子。     

哮喘豚鼠初级传入神经元ERK的表达及NGF的调节作用

目的　探讨细胞外信号调节蛋白激酶 (ERK)在哮喘豚鼠初级传入神经元 (C7 T5脊神经节 )的表达及神经生长因子 (NGF)对ERK的调节作用。方法　利用免疫组织化学结合显微图像分析 ,研究哮喘豚鼠C7 T5脊神经节活化的ERK免疫反应变化。结果　与对照组相比 ,哮喘组豚鼠活化ERK免疫反应在C7 T5脊神经节神经元核内明显上调 (P <0 .0 1) ,其阳性细胞比率明显高于对照组。Anti NGF组豚鼠活化ERK免疫反应在C7 T5脊神经节神经元的核中明显低于哮喘组 (P <0 .0 1)。结论　C7 T5脊神经节神经元活化的ERK可能参与哮喘的发病过程 ,NGF可上调哮喘豚鼠C7 T5脊神经节神经元活化的ERK表达     

NGF和Svate—3对多发性脑梗塞大鼠纹旁区神经元作用 …

目的：探讨多发性脑梗塞（ＭＣＩ）大鼠纹旁区一氧化氮合酶（ＮＯＳ）的变化及神经生长因子（ＮＧＦ）和精制蝮蛇抗栓酶３号（Ｓｖａｔｅ－３）联合应用对ＭＣＩ大鼠纹旁区的作用。方法：选用Ｗｉｓｔａｒ大鼠,应用微栓子栓塞阻断法建立多发性脑梗塞性缺血模型,用ＮＡＤＰＨ－ｄ组化方法,透射电镜技术并结合显微图像分析技术。结果：实验组ＮＯＳ阳性反应物平均类度值与实验对照组比较明显降低（Ｐ〈０．０１）。结论：ＮＧＦ和Ｓ     

BDNF对哮喘小鼠C7T5节段脊髓后角Kinesin-1表达的上调作用

目的探讨在哮喘发病中,脑源性神经营养因子(BDNF)对哮喘小鼠C7~T5节段脊髓后角内驱动蛋白-1(Kinesin-1)表达的调节作用。方法 BALB/c小鼠30只,按随机数字表法均分为正常对照组、哮喘组、Anti-BDNF抗体组,利用AniRes2005肺功能仪测小鼠气道阻力、免疫荧光方法和western blot方法检测各组小鼠C7~T5节段脊髓后角内Kinesin-1的表达。结果哮喘组小鼠吸气阻力和呼气阻力明显高于正常组(P<0.01),与哮喘组相比,Anti-BDNF抗体组吸气阻力和呼气阻力则明显降低;免疫荧光结果显示哮喘组C7~T5节段脊髓后角内Kinesin-1阳性产物的平均光密度值(MOD)显著高于正常对照组(P<0.01);而anti-BDNF抗体组与哮喘组相比,Kinesin-1阳性反应产物的MOD值则明显降低(P<0.01)。western blot方法也得到了相同的结论。结论 BDNF被阻断后,哮喘小鼠C7~T5节段脊髓后角内Kinesin-1的表达降低。     

哮喘豚鼠初级传入神经元细胞外信号调节激酶的表达

目的:探讨细胞外信号调节激酶(extracellularsignal-regulatedkinase,ERK)信号转导途径在哮喘豚鼠初级传入神经元(C7～T5脊神经节)的作用及地塞米松的抑制作用。方法:健康白色豚鼠40只,随机分为4组:生理盐水组8只,单纯致敏组8只,哮喘组12只,地塞米松组12只,利用免疫组织化学结合显微图像分析,研究哮喘豚鼠C7～T5脊神经节活化的ERK免疫反应变化。结果:与生理盐水组(175.37±8.12)和单纯致敏组(173.57±5.67)相比,哮喘组豚鼠(148.53±8.56)活化ERK免疫反应在C7～T5脊神经节神经元的核中明显上调(t=20.532,t=20.201,P<0.01),其阳性细胞比率(84.50±4.02)%明显高于生理盐水组(19.43±3.88)%和单纯致敏组(21.20±2.05)%,地塞米松组豚鼠活化ERK免疫反应(168.18±8.17)在C7～T5脊神经节神经元的核中明显低于哮喘组(t=11.605,P<0.01)。结论:C7～T5脊神经节神经元中ERK的活化提示可能参与哮喘的发病过程,地塞米松抑制哮喘豚鼠C7～T5脊神经节神经元中ERK活化的表达为预防治疗哮喘及早期康复提供了新的可能途径。     

神经生长因子对实验性哮喘豚鼠降钙素基因相关肽的调节作用

目的探讨实验性哮喘时神经生长因子(nervegrowthfactor,NGF)对降钙素基因相关肽(calcitoningenerelatedpeptide,CGRP)的调节机制。方法应用放射免疫分析方法检测卵蛋白致敏致喘豚鼠下呼吸道和内脏感觉传入部位CGRP含量的变化。结果哮喘组豚鼠气管、支气管、肺、C7～T5段脊神经节和相应节段脊髓后角、结状神经节及孤束核区CGRP含量(pg/g)分别为71.72±17.82,75.56±19.23,82.85±23.33,83.83±21.29,74.47±22.25,77.65±20.21和69.95±12.27,显著高于生理盐水对照组(48.06±12.32,53.36±15.22,62.39±20.25,67.76±20.29,60.63±14.45,65.54±17.27,59.33±21.22),差异有显著性意义(P<0.01)。在哮喘+NGF抗体组,上述部位内CGRP含量(pg/g)分别为35.25±8.76,42.26±10.96,58.89±18.83,62.67±22.24,56.55±16.69,60.34±17.97和54.46±16.62,明显低于哮喘组,差异有显著性意义(P<0.01)。结论实验性哮喘时NGF可上调下呼吸道和感觉神经节等内脏感觉传入部位的CGRP水平,两者可能参与支气管哮喘的发病过程。     

Akt/PKB对哮喘小鼠Fas表达的调节作用

目的探讨在哮喘发病中,Akt/PKB(protein kinase B)对哮喘小鼠C7-T5节段脊神经及相应节段脊髓后角内Fas表达的调节作用。方法BALB/c小鼠30只,按随机数字表法均分为正常对照组、哮喘组、Akt/PKB阻断组,利用肺功能仪测小鼠气道阻力、免疫荧光方法检测各组小鼠C7-T5节段脊神经及相应节段脊髓后角内Fas的表达、Western blot检测各组小鼠C7-T5节段脊神经内Fas的表达。结果哮喘组小鼠吸气阻力和呼气阻力明显高于正常组(P<0.01);免疫荧光结果显示哮喘组C7-T5节段脊神经及相应节段脊髓后角内Fas阳性产物的平均光密度值(mean optical density,MOD)高于正常对照组(P<0.01);而Akt/PKB阻断组与哮喘组相比,上述部位Fas阳性反应产物的MOD值明显升高(P<0.01)。Western blot结果显示:与正常对照组比较,哮喘组小鼠C7-T5节段脊神经内Fas的相对灰度值(integrated density value,IDV)与内参照IDV的比值明显降低(P<0.05),而Akt/PKB阻断组Fas目标带的IDV与内参照IDV的比值则明显高于哮喘组(P<0.05)。结论在NGF介导的哮喘发病机制中,Akt/PKB能下调哮喘小鼠C7-T5节段脊神经及相应节段脊髓后角内Fas的表达。     

地塞米松对哮喘豚鼠肺内、脊神经节及脊髓背角内蛋白激酶C表达的抑制作用

目的探讨地塞米松对哮喘豚鼠肺内、C7～T5脊神经节及对应节段脊髓背角内蛋白激酶C（PKC）表达的抑制作用。方法利用免疫组织化学和Western blotting方法。研究哮喘豚鼠肺内、C7～T5脊神经节及对应节段脊髓背角内PKC的免疫反应变化。结果哮喘组豚鼠肺内、C—L脊神经节及对应节段脊髓背角内PKC平均光密度值明显高于对照组（P〈0．01），而地塞米松组则明显低于哮喘组（P〈0．01）。结论PKC可能参与哮喘的发病过程，地塞米松抑制哮喘豚鼠PKC的表达可能是其治疗哮喘的作用机制之一。