HSP90β蛋白低调肿瘤细胞系的建立 *

目的：通过转染ＨＳＰ９０β反义核酸重组子ｐｃＤＮＡ－ＨＳＰ９０于４株人消化系肿瘤细胞系,以建立ＨＳＰ９０β蛋白低调肿瘤细胞系,并研究ＨＳＰ９０β蛋白低调后细胞的生长情况。方法：用Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ介导将ｐｅＤＮＡ－ＨＳＰ９０转染人胃癌细胞系ＳＧＣ７９０１、人胃癌多药耐药细胞系ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ、人肝癌细胞系ＨＣＣ７４０２及人食道癌细胞系Ｅｃ１０９,用Ｇ４１８进行筛选,用ＲＮＡ酶保护分析法鉴定ＨＳＰ９０β反义核酸的表达,用Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ法检测ＨＳＰ９０β蛋白的表达。用细胞生长曲线研究基因转染细胞的生长情况。结果：ｐｃＤＮＡ－ＨＳＰ９０转染细胞ＡＨ－ＳＧＣ７９０１,ＡＨ－ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ,ＡＨ－ＨＣＣ７４０２及ＡＨ－Ｅｃ１０９有ＨＳＰ９０β反义ＲＮＡ表达,这些细胞ＨＳＰ９０β蛋白表达低调。研究还发现这些细胞的生长受到不同程度的抑制,其中ＡＨ－ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ及ＡＨ－Ｅｃ１０９细胞受抑程度更明显。结论：ｐｃＤＮＡ－ＨＳＰ９０转染细胞ＡＨ－ＳＧＣ７９０１,ＡＨ－ＳＧＣ７９０１／ＶＣＲ,ＡＨ－ＨＣＣ７４０２及ＡＨ－Ｅｃ１０９　ＨＳＰ９０β蛋白表达降低,细胞的生长受到不同程度的抑制。     

HSP90β在细胞中的表达水平与化疗敏感性的相关研究

目的:了解胃癌细胞SGC7901及其耐药细胞SGC7901/VCR中HSP90β蛋白的表达,与化疗药物敏感性的关系及降低细胞HSP90β蛋白的表达是否影响化疗药物的敏感性.方法:用免疫组化法检测胃癌细胞SGC7901及其耐药细胞SGC7901/VCR中HSP90β蛋白的表达.MTT法测定SGC7901、SGC7901/VCR细胞及其相应的HSP90β蛋白低表达细胞AH-SGC7901和AH-SGC7901/VCR对化疗药物的敏感性,流式细胞仪测定细胞内药物含量.结果:SGC7901/VCR细胞HSP90β蛋白的表达高于SGC7901细胞.SGC7901/VCR细胞对ADM、VCR、MMC和CTX的IC50分别为0.398、1.25、0.199和3 981.07μg/ml.SGC7901对ADM、VCR、MMC及CTX的IC50分别为1.58×10-6、1.99×10-3、3.1×10-2及630μg/ml.SGC7901/VCR相对于SGC7901细胞对ADM、VCR、MMC和CTX的耐药指数分别为2.52×105、6.28×102、6.42和6.32 AH-SGC7901和AH-SGC7901/VCR对化疗药物的敏感性显著提高.与相应的亲本细胞相比,AH-SGC7901对ADM、VCR和MMC的敏感性分别提高了10、10 000和24.8倍,对CTX无显著变化AH-SGC7901/VCR对ADM、VCR、MMC和CTX的敏感性分别提高了3.98、6.28、3.15和5.01倍.AH-SGC7901和AH-SGC7901/VCR的阿霉素荧光强度较其相应的亲本细胞显著增强(P＜0.05).结论:降低胃癌细胞HSP90β蛋白的表达可提高它们对化疗药物的敏感性.     

HSP90β反义核酸载体转染细胞HSP90β蛋白的表达

目的了解HSP90β 反义核酸转染细胞中HSP90β蛋白的表达。方法通过lipofectamine介导将HSP90β反义核酸重组子pcDNA HSP90转染人胃癌细胞系SGC7901、人胃癌多药耐药细胞系SGC7901/VCR、人肝癌细胞系HCC7402及人食管癌细胞系Ec109。经用G418进行筛选 ,对筛选出的阳性克隆用Westernblot检测HSP90β蛋白的表达。结果pcDNA HSP90转染人胃癌细胞系SGC7901 ,人胃癌耐药细胞系SGC7901/VCR ,人肝癌细胞系HCC7402及人食管癌细胞系Ec109后 ,用G418筛选出的阳性克隆 ,分别被命名为:AH SGC7901 ,AH SGC7901/VCR ,AH HCC7402及AH Ec109。Westernblot检测结果表明 ,AH SGC7901,AH SGC7901/VCR ,AH HCC7402及AH Ec109表达的HSP90β蛋白低于其亲本细胞。结论HSP90β反义核酸可封闭HSP90βmRNA ,使pcDNA HSP90转染的细胞AH SGC7901 ,AH SGC7901/VCR ,AH HCC7402及AH Ec109表达的HSP90β蛋白减少 ,为研究HSP90下调对肿瘤细胞生物学活性的影响提供了实验材料。