异黏蛋白调控鼻咽癌细胞增殖及紫杉醇耐药的研究

 目的 探讨异黏蛋白（Metadherin, MTDH）对鼻咽癌细胞增殖及紫杉醇耐药的影响。方法 采用慢病毒介导的MTDH cDNA和MTDH-shRNA转染鼻咽癌细胞，分别上调和抑制MTDH的表达。CCK-8法、流式细胞实验分别检测细胞增殖能力、细胞周期及凋亡改变。CCK-8法确定紫杉醇对鼻咽癌细胞的IC₃₀、IC₅₀、IIC₇₀，并检测IC₃₀、IC₅₀、IC₇₀浓度下MTDH过表达组与沉默组细胞生存率改变。结果 MTDH上调后5-8F、HNE-1细胞的增殖能力均增强，而沉默MTDH后细胞的增殖能力均降低。MTDH沉默组的G1期细胞比例明显增加。MTDH过表达组细胞凋亡率降低，MTDH沉默组细胞凋亡率增加。MTDH表达上调之后，鼻咽癌细胞对紫杉醇的敏感度降低，在IC₇₀、IC₅₀浓度下，MTDH过表达组细胞的生存率高于对照组细胞。沉默MTDH之后，鼻咽癌细胞对紫杉醇的敏感度升高，在IC₅₀、IC₃₀浓度下，MTDH沉默组细胞的生存率低于对照组细胞。结论 MTDH在促进鼻咽癌细胞增殖中起重要作用，其高表达可促进鼻咽癌细胞紫杉醇耐药性的产生。     

Metadherin参与酸性微环境诱导的鼻咽癌紫杉醇耐药

摘 要：［目的］ 分析异黏蛋白（metadherin,MTDH）在酸性微环境诱导的鼻咽癌紫杉醇耐药中的作用并探讨其相关机制。［方法］ 不同浓度紫杉醇作用于鼻咽癌细胞CNE-2,48h后CCK-8法检测细胞生长抑制率,确定紫杉醇对CNE-2细胞的IC30。分别用pH 7.4、pH 6.8的细胞培养基培养CNE-2细胞,CCK-8法检测IC30浓度紫杉醇下CNE-2细胞生存率;相差显微镜下观察细胞形态改变;RT-qPCR、Western blot检测MTDH及上皮-间质转化（EMT）标志物表达情况;酸性环境下用siRNA沉默MTDH表达后,检测CNE-2细胞对紫杉醇敏感性及EMT标志物表达变化。［结果］ 紫杉醇对CNE-2细胞的IC30为6.167 nmol/L。IC30浓度下,pH 6.8组细胞的生存率为48.46%±4.39%,明显高于pH 7.4组的31.30%± 5.21%（P=0.013）。酸性环境下沉默MTDH表达后,CNE-2对紫杉醇的敏感性增强,IC30浓度下对照组和沉默组的细胞生存率分别为48.70%±2.35% 和32.87%±2.97%（P=0.020）。沉默MTDH表达可逆转酸性引起的E-cadherin下降、Vimentin表达增强。［结论］ 沉默MTDH可逆转酸性微环境诱导的鼻咽癌CNE-2细胞紫杉醇耐药,这一现象与EMT进程逆转密切相关。     

星形胶质细胞上调基因-1蛋白在鼻咽癌中的表达及临床意义

目的探讨星形胶质细胞上调基因-1(astrocyte elevated gene-1,AEG-1)蛋白在鼻咽癌中的表达及其临床意义。方法采用Western blotting技术检测AEG-1蛋白在4株鼻咽癌细胞株、47例鼻咽癌组织及21例鼻咽部黏膜中的表达。结果 AEG-1蛋白在鼻咽癌细胞和组织中的表达较鼻咽部黏膜均显著上调,其表达水平与患者血清EB病毒滴度的高低(P=0.046)、T分级(P=0.001)、临床分期(P=0.001)、颈部淋巴结转移(P=0.010)呈显著正相关。结论 AEG-1蛋白可能在鼻咽癌的发生发展中起重要作用。     

EphA2与VEGF蛋白在喉鳞癌组织中的表达及相关性研究

目的探讨沉默促红细胞生成素产生肝细胞受体(erythropoietin-producing hepatocellular re-ceptor,EphA2)与促血管生成因子(VEGF)蛋白在喉鳞状细胞癌(喉鳞癌)组织中的表达及相关性。方法采用免疫组织化学技术检测EphA2、VEGF蛋白在69例喉鳞癌组织及15例癌旁黏膜组织中的表达,分析二者表达水平与临床病理特征的关系。结果 EphA2和VEGF蛋白在喉鳞癌组织中的阳性率均高于癌旁黏膜组织(P均<0.05),EphA2蛋白表达尚与肿瘤原发部位相关(P<0.05),且EphA2和VEGF蛋白表达均与喉鳞癌患者的临床分期(P均<0.05)及转移(P均<0.05)密切相关,而二者表达与患者年龄、性别、组织学分级均无明显相关(P均>0.05)。喉鳞癌组织中EphA2及VEGF蛋白表达存在正相关性(P<0.05)。生存分析结果显示EphA2及VEGF蛋白表达水平与患者5年总生存率密切相关(P<0.05)。多因素Cox比例风险回归模型进一步显示,淋巴结有无转移及EphA2蛋白表达水平为喉鳞癌患者预后的独立影响因素。结论 EphA2与VEGF蛋白在喉鳞癌组织中表达均上调,提示二者可能存在相互作用,共同在喉鳞癌的发生、发展中起作用。     

TBL1XR1介导上皮-间质转化和干细胞特性调控头颈部鳞状细胞癌细胞迁移和侵袭

摘 要：［目的］ 阐明转导素β1X连锁受体蛋白1（transducin β-like 1 X-linked receptor 1,TBL1XR1）可介导上皮-间质转化和干细胞特性,从而调控头颈鳞癌细胞的迁移、侵袭。［方法］ 利用UALCAN数据库网站搜索TBL1XR1在头颈鳞癌组织及癌旁组织中的表达情况,应用Cbioprotal 在线分析平台分析癌症基因组图集（The Cancer Genome Atlas,TCGA）数据库中523例头颈鳞癌RNA-SEQ 数据。将慢病毒介导的TBL1XR1过表达载体、沉默载体和对应空白载体分别转染头颈鳞癌细胞Tu686。划痕愈合实验、Transwell迁移和侵袭实验评价Tu686细胞的迁移、侵袭能力;Western blot、qRT-PCR检测上皮-间质转化标志物表达;肿瘤球形成实验、qRT-PCR检测干细胞特性;抑制Wnt/β-catenin信号通路后检测TBL1XR1过表达引起的细胞迁移、侵袭、上皮-间质转化和干细胞特性。［结果］ TBL1XR1 mRNA 在头颈鳞癌组织中的表达明显高于相应癌旁组织（P<0.001）。过表达TBL1XR1的Tu686细胞划痕愈合能力（90%±4% vs 53%±6%）、Transwell迁移（0.68±0.04 vs 0.32±0.03）、侵袭能力（0.59±0.04 vs 0.26±0.04）较对照组显著性增强（P 均<0.05）。TBL1XR1表达被抑制时,细胞划痕愈合能力（70%±4% vs 96%±5%）、Transwell迁移（0.32±0.06 vs 0.63±0.08）、侵袭能力（0.24±0.04 vs 0.52±0.05）较对照组显著性降低（P均<0.05）。TBL1XR1过表达后,Tu686细胞的间质细胞标志物Vimentin、N-cadherin表达升高,上皮细胞标志物E-cadherin表达降低;肿瘤球形成数较对照组明显增多（41±9 vs 13±4,P<0.05）,肿瘤干细胞标志物ALDH1、CD44、CD133表达上调。抑制Wnt/β-catenin信号通路可部分逆转TBL1XR1过表达引起的迁移、侵袭、上皮-间质转化及干细胞特性改变。［结论］ TBL1XR1可在体外介导上皮-间质转化和干细胞特性,进而促进头颈鳞癌细胞迁移、侵袭,其调控机制可能与Wnt/β-catenin信号通路相关。     

AEG-1介导上皮-间质转化调控头颈部鳞状细胞癌的侵袭转移

目的分析星形胶质细胞上调基因-1(astrocyte elevated gene-1,AEG-1)可介导上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)调控头颈鳞癌侵袭转移的分子机制。方法采用慢病毒介导AEG-1的上调载体上调AEG-1在头颈鳞癌Tu686细胞中的表达,划痕愈合实验、Transwell侵袭小室实验检测其体外迁移侵袭能力的改变,同时Western blot检测EMT分子标志物E-cadherin及Vimentin的表达情况。结果 Tu686细胞中AEG-1表达上调后,细胞划痕愈合率增加,穿过Transwell聚碳酸酯膜的细胞明显增多,且Tu686细胞上皮细胞标志物E-cadherin的表达量显著下调,间质细胞标志物Vimen-tin表达显著上调。结论 AEG-1表达上调可显著提高头颈部鳞癌细胞的体外侵袭能力,且该侵袭能力的增强可能与AEG-1介导的EMT改变密切相关。     

基于数据挖掘分析NETO2基因在头颈鳞癌中的表达及临床意义

目的:通过对相关数据库数据分析,探究头颈鳞癌组织中NETO2基因的表达情况和临床意义。方法:应用cbioprotal在线分析平台分析TCGA 数据库中528例头颈鳞癌RNA-SEQ 数据,并结合患者的完整生存期信息,采用Kaplan-Meier 法分析NETO2变异与头颈鳞癌患者生存之间的关系。利用UALCAN数据库网站搜索NETO2在头颈鳞癌组织及癌旁组织中的表达情况,以及NETO2的相关蛋白。结果:528例头颈鳞癌样本中有32例发生NETO2 基因变异,变异率为6%,其中扩增5例（0.9%）,错义突变2例（0.4%）,节段突变1例（0.2%）,缺失1例（0.2%）,mRNA上调23例（4.4%）。NETO2变异组总生存时间短于无变异组（P=0.009 21）。NETO2变异组无病生存时间与无变异组差异无统计学意义。NETO2 mRNA 在头颈鳞癌组织中的表达明显高于相应癌旁组织,差异有统计学意义（P＜0.001）。S100A8、S100A9表达与NETO2表达呈负相关。结论:通过分析表明,NETO2基因在头颈鳞癌组织中表达上调,与头颈鳞癌患者预后相关,提示该基因在头颈鳞癌的发生发展中起到了一定作用,将为后续的肿瘤研究提供重要理论依据。