孤儿受体-雌激素受体相关受体(ERRs)在雌激素信号途径中的研究进展

雌激素是一种促进细胞有丝分裂的甾体激素，是女性生殖系统发育和功能维持的重要因素，此外在机体多种生理过程中均有重要作用。雌激素功能失常能够引发乳腺、子宫、心脏等多种疾病，特别是与内分泌相关的癌症。雌激素的多种生理效应通过的两种经典雌激素受体α和β传导（estrogen receptor α and β），核受体命名委员会（nuclear receptors nomenclature committee，NRNC）1999年命名为NR3A1和NR3A2，这两种受体均是核受体超家族（nuclear moeptor superfamily，NRs）的成员。     

实时荧光定量PCR分析雌激素受体相关受体α,β,γ与雌激素受体α,β在卵巢癌中mRNA的表达模式

目的:明确孤儿受体—雌激素受体相关受体(estrogen receptor-related recep-tor,ERRs)各亚型以及雌激素受体亚型在卵巢癌中mRNA的表达模式。方法:采用Light-Cycler-PCR定量检测40例卵巢癌标本以及15例正常卵巢组织中各种ERRs亚型和ERs亚型mRNA的表达丰度。采用ELISA方法分析各样本血清CA-125水平。结果:卵巢癌组织中ERRαmRNA表达的丰度和阳性表达率显著高于正常卵巢组织(P=0.04和P=0.02),ERRβ在卵巢癌组织和正常卵巢组织中的RNA表达的丰度和阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05);ERRγmRNA在正常卵巢以及卵巢癌组织中表达的丰度差异无统计学意义(P>0.05),但卵巢癌组织中ERRγ的阳性表达率显著增高(P=0.045)。ERRs家族和ERs家族在卵巢癌中有很高的共同表达率,ERα/ERRα的比率在卵巢癌组织中明显下降(P=0.0412)。结论:ERRs与ERs在卵巢癌中有共同表达,两个家族间的相互作用可能是卵巢癌复杂的肿瘤内分泌生物学行为的分子基础。     

实时荧光定量PCR检测人宫颈癌细胞赖氨酰氧化酶样-4基因的表达

目的:利用实时荧光定量PCR检测赖氨酰氧化酶样-4(Lysyloxidase-like 4,LOXL4)基因在Hela、ME180、HCC94人宫颈癌细胞中的表达情况.方法:提取3株体外培养宫颈癌细胞株的总RNA,逆转录为cDNA,实时荧光定量PCR扩增,结合内参基因GAPDH及标准曲线比较LOXL4 mRNA在Hela、ME180和HCC94 3株体外培养的人宫颈癌细胞中的表达.结果:LOXL4基因在3株人宫颈癌细胞中均有表达,但表达水平存在统计学差异,以Hela的表达为参照(Ratio=LOXL4/GAPDH=1.00),ME180的表达水平为6.80E-3,HCC94细胞株表达丰度最低为5.62E-4.结论:建立了LOXL4基因在宫颈癌细胞表达的检测平台,为宫颈癌早期诊断及预测预后提供可借鉴的观察指标.     

孤儿核受体-雌激素受体相关受体α-1亚型在卵巢癌中表达的临床意义

目的:明确孤儿核受体-雌激素受体相关受体(Estrogen receptor-related receptors,ERRs)α-1亚型在卵巢癌组织中的表达情况及其临床意义。方法:采用实时荧光定量RT-PCR和免疫组化方法检测人ERRα-1在45例卵巢癌组织标本和15例正常卵巢组织中的mRNA和蛋白表达情况;采用ELISA方法分析各样本的血清CA125水平;随访指标为整体生存时间和无瘤生存时间。结果:免疫组化分析表明ERRα-1在卵巢癌组织中的表达率显著高于正常组织(P<0·05)。定量PCR分析表明卵巢癌组织中ERRα-1的mRNA平均表达丰度显著高于正常卵巢组织(P<0·05)。卵巢癌患者血清CA125水平分析显示ERRα-1阳性组CA125明显升高(P<0·05)。随访结果显示ERRα-1阳性的卵巢癌患者的整体生存时间比ERRα-1阴性患者明显减少(P<0·05),但两组无瘤生存时间并无差异(P>0·05)。结论:ERRα-1可能在卵巢癌的发生发展中起重要作用,ERRα-1表达增加与卵巢癌的预后不良有关。     

人ERRα基因小分子干扰RNA慢病毒载体构建及鉴定

目的构建并鉴定靶向人ERRα基因的小分子干扰RNA的慢病毒载体。方法针对ERRαmRNA设计了4条si RNA,并构建pGCSIL-GFP-siERRα慢病毒质粒,PCR扩增阳性克隆并测序鉴定。用pGCSIL-GFP-siERRα、pHelp-er1.0和pHelper2.0质粒共转染293T细胞包装产生慢病毒,测定病毒滴度。将慢病毒干扰RNA及含有ERRα过表达载体共转染293T细胞,Western-blot检测ERRα表达,观察蛋白表达抑制效果。结果 PCR和测序结果与设计的干扰序列一致,病毒滴度达2×109TU/ml。转染细胞中ERRα蛋白表达显著降低。结论成功构建高表达、高效率的人ERRα基因小分子干扰RNA慢病毒载体,为进一步研究ERRα在细胞核内转导中的作用机制和靶向ERRα治疗奠定基础。     

妇科恶性肿瘤患者细胞免疫功能状态分析

目的探讨妇科恶性肿瘤患者细胞免疫功能状况及其临床意义。方法采用流式细胞术技术检测108例妇科恶性肿瘤患者及17例健康正常人的外周血淋巴细胞亚群,并作比较分析。结果与健康正常人比较,妇科恶性肿瘤患者CD4+T淋巴细胞百分率、NK细胞百分率、CD4+/CD8+比值明显升高(P<0.05),CD3+、CD8+T淋巴细胞百分率明显降低(P<0.05),CD19+(B淋巴细胞)在两组间比较的差异无统计学意义(P>0.05)。结论妇科恶性肿瘤患者存在免疫功能紊乱,外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞检测可作为细胞免疫功能的指标之一。     

光敏剂五聚赖氨酸-β-羰基酞菁锌对宫颈癌Hela细胞的光动力学治疗研究

目的 研究光敏剂五聚赖氨酸-β-羰基酞菁锌”[ZnPc-(Lys)5]光动力诱导宫颈癌Hela细胞死亡的方式.方法 测量Hela细胞对光敏剂ZnPc-(Lys)5的摄取、光毒性和暗毒性,利用流式细胞仪分析光动力疗法对Hela细胞的影响,包括其细胞凋亡和细胞坏死的比例;并通过透射电镜观察细胞超微结构的改变情况.结果 Hela细胞对该光敏剂的摄取随着ZnPc-(Lys)5浓度的升高而增强,相关光动力学实验结果显示:光敏剂ZnPc-(Lys)5对宫颈癌Hela细胞的光动力疗效作用理想,无暗毒性.其介导的光动力治疗是通过诱导细胞凋亡途径而达到消灭肿瘤细胞的作用.ZnPc-(Lys)5对Hela细胞光动力作用后随作用的不同时间,其凋亡的比率有显著性差异:0.5h的早期凋亡率为(50.36±1.02)％,1h为(40.80±0.72)％,2h为(30.87±2.80)％,4h为(26.87±0.81)％,各组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).晚期凋亡率0.5h为(34.23±0.55)％,1h为(33.97±1.40)％,2h为(45.57±1.12)％,4h为(45.57±1.22)％,第0.5h、1h与第2h、4h比较,差异有统计学意义(P＜0.05).Hela细胞在光动力作用下1h超微结构主要表现为早期凋亡,2h后超微结构改变为晚期凋亡和胀亡的特征改变.结论 光敏剂ZnPc-(Lys)5介导的光动力治疗主要通过凋亡途径特异性诱导宫颈癌Hela细胞的死亡.     

循环肿瘤细胞在上皮性卵巢癌中的研究进展

卵巢癌是目前病死率最高的妇科恶性肿瘤。发病隐匿,肿瘤的复发和转移,及对放、化疗敏感性较差是卵巢癌预后差的主要原因,早期诊断是提高卵巢癌预后的关键因素。而目前尚无卵巢癌早期诊断的相关血清标志物,临床上对卵巢癌的治疗效果评价及预后评估的血清标志物大都缺乏特异性。循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)检测具有微创、实时性、高特异性等优点,越来越多的妇科肿瘤学者开始关注并深入研究这项被称为"液体活检"的技术在卵巢癌中的应用。综述CTCs检测在辅助早期诊断,上皮性卵巢癌的预后判断及疗效评估等方面的研究进展和应用。     

HPV基因分型检测在宫颈高级别病变治疗后的应用进展

高危型人乳头瘤病毒(high risk human papillomavirus,HR-HPV)持续性感染是宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)和宫颈癌发生的主要原因。宫颈高级别病变患者在标准治疗后疾病进展风险仍高于正常人群。治疗后HR-HPV阳性、细胞学异常、切缘阳性等是宫颈高级别病变残留/复发的预测因子。HPV基因分型检测能明确治疗后HR-HPV的不同感染状态,有助于检出高风险人群。相较治疗后HR-HPV新发感染和再发感染,同一亚型HR-HPV持续感染与宫颈高级别病变治疗后的疾病残留/复发密切相关。HPV16/18型是宫颈高级别病变患者治疗后最常见的持续感染型别,有更高的疾病残留/复发风险,临床上应加强随访力度。与单纯细胞学、HR-HPV检测相比,随访HR-HPV基因分型能提高预测宫颈高级别病变治疗后疾病残留/复发的敏感度,同时保持相似甚至更高的特异度。