新生儿化脓性脑膜炎病原菌分布特点及耐药性分析

目的 了解新生儿化脓性脑膜炎病原菌的分布特点及耐药性情况,为临床合理治疗提供依据.方法 对2004年1月至2013年12月温州医科大学附属育英儿童医院新生儿科收治的112例病原菌培养阳性的新生儿化脓性脑膜炎(其中男64例、女48例)的病原菌分布特点、药敏试验、颅脑影像学资料及治疗转归等临床资料进行回顾性分析.计数资料组间比较采用x2检验.结果 112例患儿中2004至2008年(前5年)收治46例,2009至2013年(近5年)66例;早产23例,足月89例;发病日龄:≤3 d(早发型)20例,＞3d(晚发型)92例.112例病原菌中,革兰阳性菌62例(55.4％),革兰阴性菌50例(44.6％);排名前5位依次为:大肠埃希菌32例(28.6％),凝固酶阴性葡萄球菌(CNS) 20例(17.9％),链球菌18例(16.1％,其中无乳链球菌15例),肠球菌13例(11.6％),金黄色葡萄球菌9例(8.0％).前后5年病原菌构成对比:革兰阳性菌均＞50％,大肠埃希菌均占首位;近5年链球菌所占比例仅次于大肠埃希菌,为22.7％(15例),高于前5年[6.5％(3例),x2=5.278,P＜0.05].肺炎克雷伯杆菌在早产儿中较为常见,所占比例13.0％(3例)高于足月儿组[1.1％(1例),x2=7.540,P＜0.05].早发型中最常见病原菌为链球菌(主要为无乳链球菌),占35.0％(7/20),且高于晚发型[12.0％ (11/92),x2=4.872,P＜0.05].药敏方面:革兰阳性菌中,未发现对利奈唑胺耐药.葡萄球菌对青霉素完全耐药,对红霉素、苯唑西林、头孢唑啉耐药率均达70％以上,其中MRS阳性CNS达77.8％.链球菌、粪肠球菌对青霉素未发现耐药,肠球菌对万古霉素未发现耐药.在革兰阴性菌中,大肠埃希菌对头孢呋辛、头孢噻肟、头孢他定耐药率均达40％以上,对阿米卡星、头孢哌酮舒巴坦、亚胺培南未发现耐药.肺炎克雷伯菌对氨苄西林、头孢呋辛、头孢噻肟、头孢他定均耐药,对哌拉西林他唑巴坦、亚胺培能未发现耐药.转归:治愈69例,好转自动出院23例,未愈自动出院9例,死亡11例.头颅影像学异常、合并严重并发症及死亡共计47例,占42.0％,在18例链球菌感染的患儿中,例数达到13例.结论 育英儿童医院近10年新生儿化脓性脑膜炎病原菌以大肠埃希菌、CNS、链球菌为常见.链球菌发病有增高趋势,在早发型中最为常见,预后较差,应引起临床高度重视.利奈唑胺可作为难治革兰阳性菌所致新生儿化脓性脑膜炎新的选择.     

免疫复合物AtgG刺激小鼠肾小球系膜细胞增殖过程中Hint2基因的表达和作用研究

目的观察免疫复合物AIgG刺激小鼠肾小球系膜细胞（GMCs）后不同增殖状态下Hint2-mRNA的表达量变化情况及Hint2蛋白过表达对免疫复合物AIgG刺激的小鼠GMCs不同增殖状态下的影响。方法（1）采用CCK-8法检测免疫复合物AIgG刺激体外培养小鼠GMCs增殖的量-效和时-效关系。（2）采用SYBRGreenReal—timePCR技术检测不同浓度的AIgG（0、1000、2000tJg／m1）刺激小鼠GMCs增殖后的Hint2-mRNA表达量的变化情况。（3）依次构建Hint2-Pmdl9克隆载体及Hint2-MigRl表达载体,采用磷酸钙共沉淀法将MigRl和Hint2-MigRl质粒分别成功转染小鼠GMCs。（4）将MigRl和Hint2-MigRl质粒分别转染小鼠GMCs后,并用流式细胞术将两者转染效率调整至一致,分别予不同浓度的AIgG（0、1000、2000μg／ml）刺激小鼠GMCs36h后,再用流式细胞术检测两者转染细胞绿色荧光蛋白（GFP）表达的阳性率。结果（1）AIgG对体外培养小鼠GMCs具有明显的促增殖作用,以2000μg／ml组作用最强。（2）Hint2-mRNA的表达量与小鼠GMCs的增殖状态呈负相关。（3）MigRl和Hint2-MigRl质粒通过磷酸钙共沉淀法均能成功转染小鼠GMCs,于荧光倒置显微镜下可见GFP阳性的细胞,FCM检测两者转染效率分别为38．22％和20．44％。（4）FCM检测不同浓度的AIgG刺激转染小鼠GMCs中GFP的阳性率：Hint2蛋白过表达组和对照组水平的差异均无统计学意义。结论Hint2-mRNA的表达量与小鼠GMCs的增殖状态呈负相关;单独Hint2蛋白过表达对小鼠GMCs的增殖状态未见明显影响。     

NF-κBp65对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎性因子表达的影响

目的 探讨核因子-κB p65(nuclear factor-κB p65, NF-κB p65)对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎性因子的表达影响。 方法 将肺泡上皮细胞分为4组,依次为对照组、感染组、干扰组、阴性对照组(NC组),其中感染组、干扰组和NC组用肺炎链球菌处理细胞,干扰组和NC组分别为转染NF-κB p65小干扰RNA(siRNA NF-κB p65)和阴性对照序列(siRNA control)后的细胞,对照组不做处理。ELISA法检测细胞培养液上清中的白细胞介素-10(IL-10)和白细胞介素-6(IL-6)含量,流式细胞术检测细胞凋亡,RT-PCR检测细胞中NF-κB p65水平,Western blot检测细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)水平。 结果 感染组和NC组NF-κB p65水平、IL-6含量、细胞凋亡率及Cleaved Caspase-3、Bax水平均明显高于对照组,而IL-10水平明显低于对照组(P<0.01)。干扰组细胞中NF-κB p65水平、IL-6含量、细胞凋亡率及Cleaved Caspase-3、Bax水平均明显低于感染组(P<0.01),而IL-10水平明显高于感染组(P<0.01)。 结论 NF-κB p65能够抑制肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎性因子的表达,作用机制可能与Cleaved Caspase-3、Bax水平有关。     

沉默Bax基因对TNF-α诱导肺泡上皮细胞凋亡的影响

目的探讨沉默Bcl-2相关X蛋白(Bax)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导肺泡上皮细胞凋亡的影响。方法用0 ng/ml、10 ng/ml的TNF-α作用于人A549细胞,RT-PCR和Western blot检测细胞中Bax表达水平。A549细胞转染Bax小干扰RNA(Bax siRNA)、小干扰RNA阴性对照(siRNA control),RT-PCR和Western blot检测细胞中Bax表达水平。细胞分为空白对照组(未转染细胞)、TNF-α组(未转染细胞,培养液中含有10 ng/ml的TNF-α)、阴性对照组(转染siRNA control后的细胞,培养液中含有10 ng/ml的TNF-α)、干扰组(转染Bax siRNA后的细胞,培养液中含有10 ng/ml的TNF-α)。流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Western blot检测细胞中p38、磷酸化的p38(p-p38)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)的表达。结果 10 ng/ml的TNF-α作用后的细胞中Bax mRNA和蛋白表达水平升高。转染Bax siRNA后细胞中Bax mRNA和蛋白水平均降低。空白对照组、TNF-α组、阴性对照组、干扰组细胞凋亡率依次为:(0.92±0.01)%、(7.94±0.19)%、(7.93±0.17)%、(4.62±0.13)%。TNF-α组、阴性对照组、干扰组细胞中p-p38、Cleaved Caspase-3表达水平均明显高于空白对照组(P0.01)。干扰组细胞中p-p38、Cleaved Caspase-3表达水平均明显低于TNF-α组(P0.01)。结论 TNF-α能够诱导肺泡上皮细胞凋亡,而沉默Bax能够部分逆转TNF-α促凋亡作用,作用机制可能与p38信号通路有关。     

新生儿重症监护病房鲍曼不动杆菌感染的临床调查与耐药现状

目的了解我院新生儿重症监护病房鲍曼不动杆菌感染的临床情况及其对常见抗生素耐药率的变迁。方法回顾性分析2005—2011年温州医学院附属育英儿童医院新生儿重症监护病房收治的鲍曼不动杆菌感染患儿的临床资料及鲍曼不动杆菌的药敏试验结果。结果 7年间共有98例患儿发生鲍曼不动杆菌感染,检出部位包括肺部82例(83.7%),血液11例(11.2%),其他部位5例(5.1%)。新生儿鲍曼不动杆菌感染病死率16.3%。分离出的173株鲍曼不动杆菌对12种常见抗生素的耐药率呈递增趋势,2011年对碳青霉烯类抗生素耐药率达52.4%,对三代头孢抗生素耐药率达61.9%,均较2005—2007年显著增高,差异有统计学意义(P<0.001);2011年对头孢哌酮/舒巴坦耐药率为2.6%,与2005—2007年比较差异无统计学意义(P>0.05)。肺部感染鲍曼不动杆菌患儿中,与对碳青霉烯类抗生素敏感者比较,耐药者特点为低体重[1055g(901～1562)g比1572g(1201～2800)g,P=0.001],低胎龄[28.3周(27.0～31.7)周比32.4周(28.7～38.7)周,P=0.002],住院时间长[70天(46～98)天比46天(20～73)天,P=0.006],手术史比例高[6/19比3/63,P=0.001],感染前使用过碳青霉烯类抗生素的比例高[10/19比17/63,P=0.037],机械通气时间长[20天(8～42)天比8天(5～17)天,P=0.014]。Logistic回归分析显示,感染耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌的独立危险因素是低胎龄(OR=7.24,95%CI1.83～28.57,P=0.005)和手术史(OR=10.72,95%CI1.77～65.04,P=0.01)。结论新生儿鲍曼不动杆菌耐药率呈递增趋势,多重耐药甚至泛耐药鲍曼不动杆菌逐渐增多;新生儿发生鲍曼不动杆菌感染时病死率较高,低胎龄和有手术史的患儿需警惕耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌的感染。