甲泼尼龙对幼鼠心肌缺血再灌注损伤免疫反应的抑制作用

目的 探讨甲泼尼龙对幼年大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)血清IL-1、8、10水平的影响,探讨其对心肌的保护作用.方法 70只健康清洁级2～4周龄大鼠随机分为3组:对照组10只,模型和药物组各30只.后二组又分为缺血0.5 h,再灌注2、4、8、12、24 h共6个亚组(各5只),对照组只取12 h一个时相点作总体对照.建立MIRI模型,比较各组心肌形态学变化,检测其血清IL-1、8、10的动态表达.采用SPSS 10.0软件进行统计学分析.结果 光镜下,对照组心肌细胞无变化;模型组有炎性细胞浸润及心肌细胞变化坏死,并随再灌注时段的延长而加重;药物组各时段炎性反应及心肌细胞变性坏死程度均明显轻于模型组.模型与药物组比较心肌炎性反应明显减弱,同一时相点IL-1、8的表达显著降低(Pa＜0.05),IL-10表达升高且峰值提前至缺血再灌注8 h.结论 适当应用甲泼尼龙可通过抑制IL-1、8及促进IL-10的分泌而起到保护缺血心肌的作用.     

同型半胱氨酸促氧化作用机制探讨

目的 研究同型半胱氨酸(Hcy)与谷胱甘肽(GSH)和脂质过氧化作用之间的关系,探讨同型半胱氨酸致病作用的机制.方法 在体外实验中,以含有谷胱甘肽合成酶系的家兔红细胞裂解液为反应体系,设置对照组和低、高剂量同型半胱氨酸处理组,用荧光法检测反应体系中生成的GSH浓度.在体内实验中,将24只SD大白鼠随机分为3组:对照组,甲硫氨酸处理组和甲硫氨酸加维生素处理组.后两组在饮水中加入一定剂量的甲硫氨酸.此外,甲硫氨酸加维生素组每日灌胃给予维生素B6,B12和叶酸,其余各组给予等量生理盐水.第6周末处死大鼠,分别用高效液相色谱法和荧光法测血浆和肝组织Hcy、GSH和脂质过氧化物(LPO)含量.结果 在体外实验中,高、低剂量同型半胱氨酸组的GSH浓度均明显低于对照组(P＜0.01),高同型半胱氨酸组比低同型半胱氨酸组降低更明显(P＜0.01).在体内实验中,甲硫氨酸组的血浆Hcy与LP0含量明显高于对照组(P＜0.05,P＜0.01);给予维生素后,可以抑制Hcy与LP0的升高(P＜0.01).甲硫氨酸组肝匀浆的Hcy含量比对照组增加,而GSH则减少,差异有显著性(P＜0.01,P＜0.05);甲硫氨酸加维生素组的Hcy含量较甲硫氨酸组明显减少,GSH则明显增加(P＜0.01,P＜0.05).结论 Hcy可刺激机体的的氧化应激反应,导致体内LP0水平增加,其作用可能与Hcy抑制GSH的合成有关.维生素B6,B12,叶酸的补充,可以抑制Hcy激发的脂质过氧化作用.     

白细胞介素1及白细胞介素8在心肌缺血再灌注损伤中的动态演变及药物干预效果

目的:在心肌缺血再灌注损伤中,炎症细胞因子参与其过程的多个环节。实验拟验证白细胞介素1、白细胞介素8因子在此过程中的动态变化,并分析其与药物干预的关系。方法:实验于2005-10/2006-11在新乡医学院形态学实验室完成。①实验分组:选择健康Wistar成年大鼠70只,按随机数字表法分为3组:对照组(n=10)、模型组(n=30)和药物组(n=30)。后两组又分为缺血0.5h,再灌注2,4,8,12,24h6个时相点,每个时相点5只。对照组只设12h一个时相点作为总体对照。②实验方法:大鼠麻醉后,药物组在右股静脉注入甲泼尼龙(30mg/kg),对照组及模型组注入生理盐水(0.75mg/kg)。采用夹闭左冠状动脉前降支建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。对照组只开胸不夹闭。③实验评估:在各时相点观察各组大鼠缺血再灌注后的心肌细胞改变;血清学检测白细胞介素1、白细胞介素8因子的动态表达。结果:①模型组缺血再灌注12h炎细胞浸润最显著,药物组炎细胞呈散在浸润。②模型组和药物组白细胞介素1、白细胞介素8因子质量浓度明显高于对照组[缺血再灌注8h为例,白细胞介素1分别为(99.21±14.37),(85.77±11.31),(21.87±10.32)ng/L;白细胞介素8分别为(794.85±24.07),(536.95±19.72),(103.94±11.59)ng/L,P<0.05],峰值分别在缺血再灌注4,8h;同时相点药物组白细胞介素1、白细胞介素8因子质量浓度明显低于模型组(P<0.05)。结论:白细胞介素1和白细胞介素8因子在心肌缺血再灌注损伤的炎症反应中发挥着重要作用;甲泼尼龙对缺血再灌注损伤心肌有保护作用。     

甲泼尼龙对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌组织中p53、caspase-3 mRNA表达的影响

目的:研究甲泼尼龙干预对缺血再灌注损伤(IRI)心肌组织中p53、caspase-3 mBNA表达的影响.方法:成年SD大鼠70只,随机分为3组.药物组(n=30)制备心肌IRI模型,然后右股静脉注入甲泼尼龙30 mg·kg-1.IRI组(n=30)和假手术组(n=10)于右股静脉注入灭菌生理盐水0.75 mg·kg-1.IRI组和药物组分别于缺血0.5h、缺血再灌注(IR)2、4、8、12和24 h时各取5只大鼠处死,假手术组于缺血再灌注12 h时处死动物,取出心脏,采用TUNEL法检测凋亡细胞.原位杂交法检测p53、caspase-3 mRNA.结果:IRI组与药物组p53 mRNA和caspase-3mRNA均于心肌缺血0.5 h后即出现表达,p53 mRNA在IR 8 h达高峰,而caspase-3 mRNA的峰值出现在IR 12 h,凋亡细胞计数在IR 12 h达高峰(P<0.05).与IRI组同时相点比较,药物组p53、caspase-3 mRNA表达及凋亡细胞百分比均降低(P<0.05).结论:p53和caspase-3在缺血诱导的心肌细胞凋亡中发挥重要作用;甲泼尼龙可抑制细、胞凋亡,对心肌IRI具有一定的保护作用.     

CHO细胞MAR片段的克隆及其逆转录载体的构建

目的构建重组人促红素（CHO）细胞核基质结合区MAR的逆转录载体。方法以CHO细胞DNA为模板,采用PCR扩增CHO细胞的MAR序列,克隆入逆转录表达载体PLXSN-CAT中,经限制性内切酶酶切及DNA序列分析鉴定目的基因。结果PCR扩增的特异性片段长度为476 bp,以此构建的重组质粒PLXSN-CAT-MAR经BamHⅠ酶切后显示为5.9 kb和476 bp左右的两条片段,测序结果与Gen-bank中的CHO细胞MAR基因（Genbank序列号M62716）序列一致。结论成功构建了CHO细胞MAR片段PLXSN-CAT-MAR重组逆转录表达载体。     

DNA Ladder的制备

背景：目前,制备DNA分子量标准的方法主要有2种,一种是用限制性内切酶消化某种DNA,另一种是利用PCR扩增,2种方法各有优缺点。在前期采用PCR技术在前期扩增100～500bp片段的基础上,实验室又成功扩增出600～1000bp片段,PCR产物经过纯化,混匀,制备的DNA Ladder,结果制备DNA Ladder的条带清晰,易于识别,可完全与公司商品化的DNA Ladder相比,完全可用于分子生物学实验。目的：利用PCR扩增技术制备DNA分子量标准参照物。方法：自行构建了一种特殊适宜扩增的质粒pUC-DNA,根据pUC-DNA的基因序列,利用primer5.0设计能特异扩增100～1000bp的PCR引物。PCR扩增出100～1000bp大小的DNA片段,在2%琼脂糖凝胶中电泳观察结果。用凝胶回收试剂盒回收目的PCR产物,测序结果与pUC-DNA上基因序列进行序列比对,Blast进行同源性分析。将PCR产物用酚/氯仿抽提,乙醇沉淀,按比例混匀,即可使用。结果与结论：利用PCR技术能够成功扩增出100～1000bp条带,片段大小与预期结果相符,片段序列与GenBank序列完全一致,利用回收片段制备的DNA Ladder条带清晰,可与同类产品相比。     

DNA Ladder的制备

背景:目前,制备DNA 分子量标准的方法主要有2 种,一种是用限制性内切酶消化某种DNA,另一种是利用PCR 扩增,2 种方法各有优缺点.在前期采用PCR 技术在前期扩增100～500 bp 片段的基础上,实验室又成功扩增出600～1 000 bp片段,PCR 产物经过纯化,混匀,制备的DNA Ladder,结果制备DNA Ladder 的条带清晰,易于识别,可完全与公司商品化的DNA Ladder 相比,完全可用于分子生物学实验.目的:利用PCR 扩增技术制备DNA 分子量标准参照物.方法:自行构建了一种特殊适宜扩增的质粒pUC-DNA,根据pUC-DNA 的基因序列,利用primer5.0 设计能特异扩增100～1 000 bp 的PCR 引物.PCR 扩增出100～1 000 bp 大小的DNA 片段,在2%琼脂糖凝胶中电泳观察结果.用凝胶回收试剂盒回收目的PCR 产物,测序结果与pUC-DNA 上基因序列进行序列比对,Blast 进行同源性分析.将PCR 产物用酚/氯仿抽提,乙醇沉淀,按比例混匀,即可使用.结果与结论:利用PCR 技术能够成功扩增出100～1 000 bp 条带,片段大小与预期结果相符,片段序列与GenBank 序列完全一致,利用回收片段制备的DNA Ladder 条带清晰,可与同类产品相比.     

三种测序DNA模板制备方法的比较

背景:DNA模板质量对DNA序列测定起着至关重要的作用。目的:为基因组DNA或甲基化DNA测序寻找一种经济,简便的方法。方法:分别采用96管集合板及96孔板提取质粒,并且针对质粒设计一对包含目的片段的引物,扩增后纯化PCR产物,通过以上3种方法制备DNA测序模板进行测序。结果与结论:实验所采用的3种方法对于基因组DNA测序效果无差异(P>0.05)。对于甲基化DNA测序效果,96管集合板法优于其他2种方法(P<0.05)。说明3种方法均适用于基因组DNA的测序,而96管集合板法更适用于甲基化DNA的测序。     

DNA Ladder的制备

背景：目前,制备DNA分子量标准的方法主要有2种,一种是用限制性内切酶消化某种DNA,另一种是利用PCR扩增,2种方法各有优缺点。在前期采用PCR技术在前期扩增100~500 bp片段的基础上,实验室又成功扩增出600~1 000 bp片段,PCR产物经过纯化,混匀,制备的DNA Ladder,结果制备DNA Ladder的条带清晰,易于识别,可完全与公司商品化的DNA Ladder 相比,完全可用于分子生物学实验。 目的：利用PCR扩增技术制备DNA分子量标准参照物。 方法：自行构建了一种特殊适宜扩增的质粒pUC-DNA,根据pUC-DNA的基因序列,利用primer5.0设计能特异扩增100~ 1 000 bp 的PCR引物。PCR扩增出100~1 000 bp大小的DNA片段,在2%琼脂糖凝胶中电泳观察结果。用凝胶回收试剂盒回收目的PCR 产物,测序结果与pUC-DNA上基因序列进行序列比对,Blast进行同源性分析。将PCR产物用酚/氯仿抽提,乙醇沉淀,按比例混匀,即可使用。 结果与结论：利用PCR技术能够成功扩增出100~1 000 bp 条带,片段大小与预期结果相符,片段序列与GenBank序列完全一致,利用回收片段制备的DNA Ladder 条带清晰,可与同类产品相比。     

促红细胞生成素与脑损伤保护作用

促红细胞生成素(EPO)是由肾脏分泌的内源性细胞因子。各种脑细胞均有EPO及EPO受体(EPOR)的表达。EPO可作为神经保护因子,通过抗兴奋性氨基酸毒性、抗细胞凋亡、增加细胞钙内流、抑制一氧化氮(NO)合成等作用实现对脑损伤的保护作用。作者通过综述近年来国内外相关文献,以了解促红细胞生成素及其受体的产生、结构及其在脑损伤中的保护机制。