Prev-DAF试剂盒分析线粒体基因1555A-G突变

目的建立应用标准试剂盒方法检测线粒体基因1555A-G(mtDNA1555A-G)突变的程序,进行母系遗传耳聋家系的基因型分析.方法采用Prev-DAF试剂盒分析14个母系遗传耳聋家系,共检测耳聋患者34个,正常个体11个,并以Alw26酶切和测序方法验证试剂盒检测的准确性.结果Prey-DAF试剂盒检测结果证实13个家系中33个耳聋患者携带有mtDNA1555A-G突变,另1个耳聋家系中的一名耳聋患者不携带此突变,11个正常个体中无此突变,试剂盒检测方法与Alw26I酶切法和测序结果完全吻合.结论在中国,mtDNA1555A-G氨基糖甙类抗生素致聋的家系多,分布广,Prev-DAF试剂盒在分析线粒体基因1555A-G突变方面具有简单、低耗、结果直观的特点,适合在中国用于进行此突变的大规模筛查或预防性检查.     

感音神经性耳聋基因治疗的新进展

感音神经性耳聋严重影响了人类健康和生存质量，目前仍无确切有效的治疗方法。随着基因工程技术的发展，基因治疗为攻克这一顽症带来了新希望。基因治疗指将外界正常或治疗基因，通过载体转移到人体的靶细胞，进行基因修饰和表达，从而改善疾病的一种治疗手段。1996年，基因治疗技术首次应用于耳聋的治疗研究，10余年来发展迅速。我们就感音神经性耳聋基因治疗常用的载体、常用的外源基因和载体导入内耳的途径等相关问题综述如下。     

腺病毒介导bcl-2基因转染对顺铂所致大鼠螺旋神经节细胞损伤的拮抗作用

目的 通过腺病毒(adenovirus,Ad)载体介导bcl-2基因转染体外培养的新生大鼠耳蜗螺旋神经节细胞(spiral ganglion cells,SGC),探讨bel-2蛋白过度表达对顺铂所致SGC损伤的拮抗作用.方法 体外培养新生大鼠SGC,携带绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的腺病毒载体Ad-GFP转染SGC,并行神经丝蛋白(NF200)免疫细胞化学染色鉴定,激光共聚焦扫描荧光显微镜下观察.携带bel-2基因的腺病毒载体Ad-bel-2转染SGC,蛋白质印迹法(Western Blot)检测bcl-2蛋白表达.设立Ad-bcl-2转染加顺铂组(A组),Ad-GFP转染加顺铂组(B组),顺铂组(C组)和正常对照组(D组),顺铂作用浓度为2μg,/ml;顺铂作用48 h后,行各组SGC计数,并通过lmageJ软件测量各组SGC轴突长度.结果 成功分离并培养新生大鼠SGC.激光共聚焦扫描荧光显微镜下观察到腺病毒载体可安全高效转染体外培养的SGC.Ad-bcl-2转染3 d后,Western Blot检测有外源性人bcl-2基因的高效表达,而Ad-GFP转染组和顺铂组未检测到表达.顺铂作用后,A、B、C组部分SGC细胞突起变短、萎缩,胞体缩小、变圆,甚至浮起.A组SGC数目明显多于B组和C组(P值均＜0.01),但少于D组(P＜0.05);A组SGC轴突长度明显长于B组和C组,但短于D组(P值均＜0.01).结论 腺病毒能够安全高效地转染体外培养的新生大鼠SGC.bel-2蛋白过表达对顺铂所致SGC损伤有一定的拮抗作用.     

线粒体基因A1555G突变检测试剂盒在药物性耳聋分子诊断中的应用

目的 探讨应用试剂盒方法在大规模耳聋患者群中检测线粒体基因A15556突变的可行性。方法 采用线粒体基因A15556突变检测试剂盒分析324例个体，其中属于25个母系遗传耳聋家系的有56个耳聋患者。散发性耳聋患者257个，正常个体11个，母系遗传耳聋家系中的耳聋患者多有氨基糖甙类抗生素接触史，部分检测结果以Alw26酶切和测序方法验证试剂盒检测的准确性。结果 线粒体基因A15556突变检测试剂盒检测结果证实24个家系中55个耳聋患者携带有A15556突变。另1个耳聋家系中的一名耳聋患者不携带此突变，11个正常个体及257个散发性耳聋患者中无此突变，试剂盒检测方法与Alw261酶切法和测序结果完全吻合。讨论 线粒体基因A15556突变是氨基糖甙类抗生素致聋的主要原因，其患者多分布于母系遗传特点的家系，线粒体基因A15556突变检测试剂盒在分析线粒体基因A15556突变方面具有简单．低耗．结果直观的特点，最短检测周期为3小时30分钟，适合A15556突变的大规模筛查或用药前预防性检查。     

携带Mathl基因的重组腺病毒构建和鉴定及在豚鼠耳蜗中的表达

目的探讨利用重组腺病毒介导的Math1基因转移治疗感音神经性耳聋的可行性。方法利用腺病毒细菌内同源重组方法,构建携带Math1基因的复制缺陷型重组腺病毒Ad-Math1,通过向豚鼠耳蜗底回注射重组腺病毒Ad-Math1后,利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测内耳Math1的mRNA的表达,Western Blot方法检测Math1蛋白表达。结果构建的重组腺病毒Ad-Math1酶切电泳鉴定正确,重组腺病毒Math1通过底回导入豚鼠耳蜗24小时后检测到Math1的mRNA表达;Western Blot方法检测到Math1蛋白的表达。结论本实验成功构建了携带Math1基因的重组腺病毒,由腺病毒介导的Math1基因转移可在豚鼠耳蜗内有效表达。     

手法加小针刀治疗冻结肩27例

自 1 997年以来 ,笔者运用手法加小针刀治疗冻结肩 2 7例 ,获效满意 ,现报告如下。1　一般资料2 7例中 ,男性 1 0例 ,女性 1 7例 ;年龄 41岁～5 9岁 ;病程最短 2周 ,最长 1 .5年 ;病在左肩 1 4例 ,右肩 1 1例 ,双肩 2例 ;因外伤引起者 3例 ,风寒引起者 1 1例 ,原因不明者 1 3例。2　治疗方法2 .1　手法治疗　点穴 :取秉风、肩贞、肩　、肩骨禺、抬肩穴 (肩峰下 1 .5寸 )、举臂穴 (抬肩穴下 2寸 )、肩胛暗脉 (天定穴上 5分 )、讠意讠喜。点穴时将意念集中于手指 ,点按震颤 3min～ 5 min,使患者产生酸胀困感并有热流传导感。拨筋 :用单拇指在…     

关注前庭系统基础研究

眩晕是一种临床常见症状,研究表明前庭系统病变是导致眩晕的重要原因。前庭毛细胞及其神经支配损伤是很多患者罹患眩晕的基础原因,充分的科学研究是解决临床问题的关键所在。虽然哺乳动物的前庭毛细胞在损伤后具有自我再生能力,但是这种能力非常有限,目前尚无有效方法使损伤后的前庭毛细胞充分再生以恢复功能。有关于神经保护和前庭基因治疗的相关研究为促进前庭系统的功能重建提供了科学依据。     

振动声桥在传导性聋和混合性聋患者中的临床效果——欧洲多中心研究结果

1前言1996年振动声桥(vibrant soundbridge,VSB)开始应用于临床,其显著改善了中重度感音神经性聋患者的听力。2006年VSB首次应用于传导性聋和混合性聋患者,同样取得了显著疗效。在这些患者中,VSB传感器--漂浮质量传感器(floating mass transducer,FMT)放置于蜗窗龛,FMT直接振动蜗窗膜而产生听觉。将FMT固定于蜗窗龛的手术方     

搏动性耳鸣研究进展

耳鸣是指在缺乏外界声源刺激下,患者感觉耳内或颅内有声音.耳鸣是一种常见的症状,国外文献报道在人群中发病率约10％,男性多于女性,并且随年龄增长发病率升高,儿童偶发[1].按照耳鸣声音的特点,耳鸣可分为搏动性耳鸣( pulsatile tinnitus)和非搏动性耳鸣.其中,搏动性耳鸣是由头颈部器官、心血管或其他结构所产生异常声音,通过骨结构、血管或血流传送到内耳,而使患者感受到[2],其节律大多与心跳一致.搏动性耳鸣约占耳鸣患者的4％[3].搏动性耳鸣对患者的影响不一,轻者安静时方觉耳鸣,重者严重影响工作和生活.其病因复杂,但是通过仔细检查,很多搏动性耳鸣的病因能明确,并能通过手术或者介入治疗减轻或者治愈.在本文中,我们对搏动性耳鸣的分类、常见病因、诊断、鉴别诊断和治疗等方面的研究进展综述如下.     

腺相关病毒Anc80L65转染成年小鼠椭圆囊的实验研究

目的 探索腺相关病毒载体Anc80L65对正常和不同程度损伤的成年小鼠椭圆囊前庭感觉上皮的转染特性.方法 将6周龄小鼠分为以下三组.1)正常对照组:将携带绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的Anc80L65病毒液(Anc80L65-GFP),经后半规管注射途径导入小鼠内耳;2)中...