新型靶向光敏剂Ⅰ对Hep-2细胞的光动力抑瘤活性

 目的　评价新型靶向性光敏剂Ⅰ（PSⅠ）对喉癌Hep-2细胞的靶向性和光动力活性。方法　采用bleaching实验评价PSⅠ的稳定性; 荧光测定法观察Hep-2细胞对PSⅠ的摄取能力; 四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测PSⅠ浓度、光照剂量及光照时间点对Hep-2细胞存活率的影响。结果　在光照50 min后,PSⅠ的吸光度（A）值仅降低了11 %,表明其稳定性可满足光动力治疗的需要;Hep-2细胞对PSⅠ的摄取随PSⅠ浓度的增加而增加,但过量叶酸的存在可明显抑制Hep-2细胞对PSⅠ的摄取（t值分别为5.96,4.89,均P＜0.01）;MTT实验结果表明Hep-2细胞的存活率与PSⅠ浓度和光照剂量呈负相关（r＝-0.763,P＝0.017; r＝-0.946,P＝0.001）。当PSⅠ浓度为14 μmol／L、光照剂量为18 J／cm2时,Hep-2细胞的存活率仅为34 %,而在无光照时即使光敏剂浓度升至110 μmol／L,Hep-2细胞的存活率仍为100 %;给予PSⅠ 24 h后再进行光动力治疗（PDT）可有效地抑制Hep-2细胞的生长,其存活率只有32 %。结论　PSⅠ拥有满意的光稳定性和低的暗毒性,对Hep-2细胞有很好的靶向性和光动力活性。     

新型靶向光敏剂诱导Hep-2细胞光氧化行为的研究

[目的]研究新型光敏剂Ⅰ诱导Hep-2细胞的光氧化行为。[方法]利用MTT法检测光敏剂Ⅰ对Hep-2细胞的细胞毒性;采用活性氧特异性探针H2DCFDA通过激光共聚焦成像观察Hep-2细胞中活性氧的生成;通过测定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)水平及乳酸脱氢酶(LDH)渗漏检测观察Hep-2细胞的氧化应激反应。[结果]无光照时,光敏剂Ⅰ对Hep-2细胞的毒性为零,但光照后可明显抑制该细胞的生长,且其光毒性随光照剂量的增加而加强(r=-0.962,P=0.001)。光动力治疗后,细胞内DCFDA的荧光强度逐渐增强,在4h时达到高峰,随后又逐渐降低;细胞内SOD和GSH水平逐渐降低,3h后分别降低42.5%(P<0.01)和35.0%(P<0.01),而MDA含量却随时间延长逐渐增加,3h后增加54%(P<0.01)。LDH的渗出与光照剂量呈正相关(r=0.966,P=0.007)。[结论]新型光敏剂Ⅰ可有效光诱导Hep-2细胞死亡,而细胞内氧化应激反应可能是其光诱导Hep-2细胞死亡的重要作用机制。     

新型靶向光敏剂光动力诱导HeLa细胞凋亡的实验研究

[目的]研究新型靶向光敏剂Ⅰ光动力诱导HeLa细胞死亡的方式。[方法]用流式细胞仪分析照射剂量和光敏剂浓度对HeLa细胞凋亡的影响,细胞凋亡和坏死的比例;并采用激光共聚焦观察细胞F-actin和核的变化;透射电镜观察细胞超微结构的改变。[结果]光敏剂Ⅰ介导的光动力治疗可诱导HeLa细胞的凋亡和坏死,但凋亡的比例明显大于坏死（P=0.0053）,且细胞凋亡的量分别与光照剂量（r=0.987,P〈0.001）和光敏剂浓度（r=0.995,P〈0.001）呈正相关;光动力诱导后,细胞的F-actin结构破坏,细胞皱缩,透射电镜下可见凋亡小体的形成。[结论]光敏剂Ⅰ介导的光动力治疗主要通过凋亡途径导致HeLa细胞的死亡。     

交联剂对复合生物海绵性能的影响

目的考察交联剂京尼平和戊二醛对复合生物海绵性能的影响。方法采用冷冻干燥法制得复合生物海绵,采用三硝基苯磺酸吸光光度法测交联度;采用MTT法测细胞毒性;采用溶菌酶降解法测体外降解率。结果①复合生物海绵的交联度均随交联时间的延长而增加,用京尼平和戊二醛交联三天后,复合生物海绵的交联度分别为26.43%和54.63%。②京尼平交联的复合生物海绵吸水性优于戊二醛交联的复合生物海绵。⑧用两种交联剂制得的复合生物海绵的浸提液在细胞培养初期均表现出对细胞增殖的抑制作用,这种抑制作用随培育时间的延长而降低,但戊二醛交联的复合生物海绵其细胞毒性明显高于京尼平。④京尼平或戊二醛交联的复合生物海绵在生理盐水中浸泡4周后,降解率分别为32.1%和28.4%;而在含溶菌酶的生理盐水中浸泡40h后,降解率分别为36.7%和31.2%。结论与用戊二醛交联的复合生物海绵相比,京尼平交联的复合生物海绵交联度降低,吸水性增加,体外降解率增加,细胞毒性明显降低。     

新型光敏剂I对头颈部肿瘤细胞的光动力活性

目的在光敏剂卟吩分子中通过PEG链引入靶向基团-叶酸,构建了一个新型的光敏剂Ⅰ,并评价光敏剂Ⅰ对喉癌Hep-2细胞和鼻咽癌CNE细胞的肿瘤靶向性和光动力活性。方法利用West-ern blot实验检测Hep-2细胞和CNE细胞的叶酸受体表达;采用荧光测定法评价两种细胞在有或无过量叶酸存在时对光敏剂Ⅰ的吞噬作用;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)试验检测光敏剂Ⅰ在有或无光照条件下对Hep-2细胞和CNE细胞的细胞毒性,以及光敏剂浓度和光照剂量对细胞存活率的影响。结果 West-ern blot实验结果表明Hep-2细胞有较强的叶酸受体表达,而CNE细胞则为叶酸受体低表达。两种细胞对光敏剂I的摄取均随光敏剂浓度的增加而增强,但Hep-2细胞的摄取能力明显强于CNE细胞(P<0.01),且过量自由叶酸的存在可竞争性地抑制Hep-2细胞对光敏剂I的摄取(P<0.01)。MTT实验结果显示在光照时,光敏剂I对Hep-2细胞和CNE细胞均有显著的光毒性,且其光动力活性与光敏剂浓度和光照剂量呈正相关性。结论光敏剂I对叶酸受体阳性表达的喉癌Hep-2细胞有明显的靶向性和光动力活性。     

几种止血材料对兔实质脏器创伤止血性能的比较

目的评价明胶海绵、可吸收止血纱布、复合生物海绵和速效止血粉对兔肝、脾损伤的止血效果及周围组织反应。方法将正常状态下和肝素抗凝后的兔的肝和脾脏前端约1.0cm长的组织剪去,建立实质脏器活性出血模型,分别用不同的止血材料压敷创面,考察两种状态下创面的出血时间和出血量,取与敷料接触的肝组织进行病理分析。结果在正常状态下,明胶海绵、复合生物海绵、止血纱布和速效止血粉对肝损伤的止血时间分别为（6.28±1.45）min（、6.19±1.04）min（、5.09±1.03）min和（4.07±0.84）min,与普通纱布对照组（9.89±0.75）min相比差异有显著性意义（P〈0.01）;肝素抗凝后,各组的止血时间明显延长,特别是明胶海绵和止血纱布组。病理结果表明速效止血粉对肝创面组织造成热损伤。结论复合海绵和速效止血粉显示出较明胶海绵和止血纱布更好的止血效果,尤其是在肝素抗凝的情况下。但鉴于速效止血粉的热损伤和不易于清除,应限用于威胁生命的急救止血。