抗纤软肝颗粒对肝星状细胞细胞外信号调节激酶1mRNA、蛋白表达的影响

目的：探讨抗纤软肝颗粒对肝星状细胞细胞外信号调节激酶1（ERK1）mRNA、蛋白表达的影响。方法：运用细胞培养技术,以hsc-t6细胞系为研究对象,分为（1）空白包被＋10%生理盐水组、（2）纤维连接蛋白（FN）＋10%生理盐水组、（3）FN＋5%抗纤软肝颗粒含药血清（kxr）组、（4）FN＋10%kxr组、（5）FN＋20%kxr组。按以上分组进行药物干预,干预后继续培养48h。应用免疫细胞组织化学方法检测ERK1蛋白的表达,采用RT-PCR法测定ERK1mRNA的表达。结果：与FN组相比,kxr组肝星状细胞的ERK1mRNA、蛋白表达均显著下调,分别减少了54.36%（35.98%）、66.08%（49.59%）、72.82%（59.15%）,均有显著性差异。结论：kxr能够在转录及翻译水平抑制ERK1mRNA、蛋白的表达,从而阻抑了整合素激活的MAPK途径的信号转导。     

抗纤软肝颗粒含药血清对肝星状细胞黏着斑激酶mRNA、蛋白表达的影响

目的:探讨抗纤软肝颗粒含药血清对肝星状细胞黏着斑激酶(FAK)mRNA、蛋白表达的影响。方法:运用细胞培养技术,以hsc-t6细胞系为研究对象,分为(1)空白包被+10%生理盐水血清组;(2)纤维连接蛋白(FN)+10%生理盐水血清组;(3)FN+5%抗纤软肝颗粒含药血清(kxr)组;(4)FN+10%kxr组;(5)FN+20%kxr组。按以上分组进行药物干预,干预后继续培养48h。应用免疫细胞组织化学方法检测FAK蛋白的表达,采用RT-PCR法测定FAKmRNA的表达。结果:kxr组肝星状细胞的FAKmRNA、蛋白表达均显著下调,分别减少了72.78%和27.88%,78.82%和44.85%,85.51%和57.58%,与对照组及FN组相比,5%kxr组(P<0.05),10%kxr组、20%kxr组(P<0.01)。结论:kxr能在转录及翻译水平抑制FAKmRNA、蛋白的表达,从而阻抑了整合素激活的FAK途径的信号转导。     

抗纤软肝颗粒对血小板源生长因子诱导的肝星状细胞增殖的影响

目的:研究抗纤软肝颗粒(KXR)对血小板源生长因子(PDGF)诱导的肝星状细胞(HSC)增殖的影响.方法:采用无血清培养,不同浓度的KXR温育HSC 24 h后,PDGF-BB(10 ng/ml)刺激24 h,再加入上述浓度的KXR 3 h后,又加入PDGF-BB(10 ng/ml)作用5 min,然后收集细胞.采用细胞计数法及流式细胞仪测定细胞增殖及细胞周期.结果:无血清培养显示该方对于PDGF诱导的细胞增殖具有抑制作用,并呈剂量依赖性(P<0.01).流式细胞术分析提示KXR能抑制PDGF诱导的HSC DNA合成期及合成后期和分裂期DNA百分含量,阻断细胞由静止期/DNA合成前期向DNA合成期转化,呈剂量依赖性(5 mg/ml组作用最显著,P<0.01).结论:KXR能抑制PDGF诱导的HSC增殖.     

抗纤软肝颗粒对肝星状细胞增殖的影响

目的 :研究抗纤软肝颗粒对肝星状细胞增殖的影响。方法 :传代培养的大鼠肝星状细胞系 (HSC- T6 )与中药复方抗纤软肝颗粒 (终浓度为 5 m g/ ml、2 .5 mg/ m l、1.2 5 mg/ ml)及药物血清 (5 %、10 %、2 0 %)共同培养 48h后 ,应用 MTT法及流式细胞仪测定细胞增殖。结果 :抗纤软肝颗粒无论是药物还是含药血清 ,均能显著抑制 HSC-T6增殖 ,并使细胞周期阻滞于 G1 期 ,在安全浓度范围内 ,5 m g/ ml组和 10 %药物血清组作用最强 (P <0 .0 1,<0 .0 5 )。结论 :抗纤软肝颗粒抗肝纤维化的作用机制可能在于阻滞细胞周期的进行 ,从而抑制 HSC增殖。     

抗纤软肝颗粒药物血清对肝星状细胞整合素信号及凋亡的影响

目的:探讨抗纤软肝颗粒药物血清对肝星状细胞增殖、凋亡的影响及整合素信号通路的下游信号分子FAK在其中的作用。方法:将传代培养的大鼠肝星状细胞系(HSC-T6)与中药复方抗纤软肝颗粒药物血清(5%、10%、20%)共同培养48h后,应用MTT法测定细胞增殖;应用流式细胞仪测定细胞凋亡;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测FAK mRNA的表达。结果:抗纤软肝颗粒药物血清,均能显著抑制HSC-T6增殖,20%药物血清组作用最强(P<0.05);流式细胞仪测定结果显示抗纤软肝颗粒药物血清均可诱导HSC凋亡(P<0.05);抗纤软肝颗粒药物血清能够使HSC的FAK mRNA的表达下调。结论:抗纤软肝颗粒能够抑制HSC增殖及诱导凋亡HSC。其作用可能与其抑制整合素信号通路下游信号分子FAK mRNA的表达有关。     

软坚消痰活血化瘀法抗肝纤维化的作用机制概述

目的:对软坚消痰、活血化瘀法抗肝纤维化的作用机制进行了概述.方法:本文从三个方面进行了论述:①软坚消痰、活血化瘀法的立法及抗纤软肝颗粒的组方意义;②抗纤软肝颗粒影响肝星状细胞增殖的作用机制;③软坚消痰、活血化瘀法抗胀纤维化的作用机制.结果:肝纤维化的基本病机是血瘀痰结,治疗应软坚消痰、活血化瘀为大法.该法抗肝纤维的主要机制有:①保护肝细胞;②抑制肝星状细胞增殖,促进肝星状细胞凋亡;③干扰肝星状细胞激活的细胞内信号传导.结论:软坚消痰,活血化瘀法具有较好的抗肝纤维化作用     

抗纤软肝颗粒对肝纤维化大鼠肝组织核因子-κB基因表达的影响

目的观察中药抗纤软肝颗粒对四氯化碳加乙醇诱导肝纤维化大鼠的肝组织核因子-κB（NF-κB）p65 mRNA表达的影响。方法 SD雄性大鼠40只,随机分为模型对照组（M）15只,抗纤软肝颗粒组（K）15只,正常对照组（N）10只。M组、K组分别以40%四氯化碳橄榄油液腹腔注射,每周2次,并以5%乙醇为唯一饮水。造模同时,K组即予抗纤软肝颗粒20 g.kg-1.d-1（中等剂量）灌胃,每天一次。7周末,各组取肝右叶分别作肝组织病理观察及检测肝组织NF-κB p65 mRNA表达。结果抗纤软肝颗粒组肝细胞变性坏死及肝纤维化水平较模型对照组明显减轻（P〈0.05）,肝组织NF-κB p65 mRNA表达较模型对照组明显减弱（P〈0.05）。结论抗纤软肝颗粒能下调肝纤维化大鼠肝组织NF-κB p65 mRNA表达,抑制肝纤维化的形成和发展,其机制可能是通过调控NF-κB p65 mRNA转录过程实现的。     

Kangxian ruangan keli inhibits hepatic stellate cell proliferation mediated by PDGF

AIM: To investigate the effect of Kangxian ruangan keli (KXR)on hepatic stellate cell (HSC) proliferation mediated by platelet-derived growth factor (PDGF) and the underlying mechanism.METHODS: In a serum-free culture system, HSCs were treated with a KXR preparation for 24 hours, followed by stimulation with PDGF-BB for 24 hours. Then the cells were incubated again in the medium containing KXR for 3 hours stimulated with PDGF-BB for 5 minutes, and collected. The proliferation of HSC was examined using an MTT assay and flow cytometry. Tyrosine phosphorylation was detected with Western blotting and visualized by the enhenced chemiluminescent (ECL) method.RESULTS: The OD values for the HSCs growing in the media without and with addition of PDGF were 0.17±0.06 and 0.82±0.05, respectively. The PDGF-induced increase was hindered remarkably by KXR preparation in a dosedependent manner. The reaction values for the systems with 5 mg/mL, 2.5 rng/mL and 1.25 mg/mL of KXR were 0.28±0.03,0.37±0.02 and 0.43±0.04, respectively. Mloreover, the percentages of S-phase cells in these KXR-containing culture systems were 10.95±1.35, 32.76±1.07 and 43.19±1.09,respectively, all of which were significantly lower than that in the culture free of KXR (68.24±2.72). In addition, the values for tyrosine-phosphorylated protein in HSCs treated with 5 mg/mL and 1.25 mg/mL of KXR were 0.1349±0.0072and 0.1658±0.0025, respectively, which were smaller than that in the cells treated only with PDGF-BB (0.1813±0.0117).CONCLUSION: Within the dose range used in the present study, KXR preparation shows an inhibitory effect on HSC proliferation induced by PDGF. The mechanism of this process may involve interference with tyrosine phosphorylation mediated by PDGF.     

抗纤软肝颗粒对肝纤维化大鼠肝脏MMP-1mRNA及TIMP-1mRNA表达的影响

目的观察抗纤软肝颗粒对实验性肝纤维化大鼠肝脏基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的影响,探讨其防治肝纤维化的作用.方法采用250mL/L四氯化碳给大鼠皮下注射制备肝纤维化模型,并同时给与秋水仙碱及抗纤软肝颗粒小、大剂量治疗,免疫组织化学法检测肝组织Ⅰ、ⅢⅡ型胶原,原位杂交的方法检测MMP-lmRNA、TIMP-1mRNA.结果抗纤软肝颗粒能促进MMP-1的表达(P＜0.05),抑制TIMP-1的表达(P＜0.01),促进Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解(P＜0.01).结论抗纤软肝颗粒能促进MMP-1的表达,抑制TIMP-1的表达,促进胶原的降解,产生抗肝纤维化的作用.