粪便SEPT-9和miRNA-34b/c基因甲基化检测在大肠肿瘤筛查中的临床应用

目的 评估检测大肠肿瘤患者粪便中SEPT-9和微RNA（miRNA）-34b/c基因甲基化对大肠肿瘤筛查的临床性能。方法 采用病例对照研究方法,使用甲基化敏感性高分辨率熔解曲线法检测大肠肿瘤患者（大肠癌组35例、大肠腺瘤组47例）和正常对照人群（正常对照组52名）粪便中SEPT-9和miRNA-34b/c基因是否存在甲基化,来评估其筛查大肠肿瘤的性能。结果 大肠癌组SEPT-9和miRNA-34b/c基因的甲基化阳性率分别为68.6%、71.4%,大肠腺瘤组分别为57.4%、63.8%,正常对照组分别为9.6%、11.5%。3组的SEPT-9、miRNA-34b/c基因甲基化阳性率比较差异均有统计学意义（²_SEPT-9 = 37.185,²_miRNA-34b/c = 40.040,P均< 0.001）,利用Bonferroni法进行两两比较,大肠癌组和大肠腺瘤组的甲基化阳性率比较差异无统计学意义,两者与正常对照组比较差异均有统计学意义（P均< 0.001）。3组联合检测SEPT-9和miRNA-34b/c基因的甲基化阳性率为88.6%、76.6%、13.5%,大肠癌组和大肠腺瘤组联合检测的甲基化阳性率均高于SEPT-9单基因检测和miRNA-34b/c单基因检测（P均< 0.05）。结论 检测粪便中SEPT-9和miRNA-34b/c基因甲基化具有效好的大肠肿瘤筛查性能,或许可作为大规模人群筛查大肠肿瘤新的生物标志物组合;多基因甲基化联合检测筛查的性能优于单基因。     

miRNA-325-3p通过下调细胞角蛋白13 的表达降低鼻咽癌细胞CNE1 的放疗敏感性

目的：探究miRNA-325-3p 及其靶基因细胞角蛋白13（cytokeratin 13，CK13）对鼻咽癌细胞CNE1 的放疗敏感性的影响。方法：通过miRBase、Targetscan 及Microcosm 三大数据库预测miRNA-325-3p 的潜在靶基因，并通过双荧光素酶活性检测实验进行验证，qPCR检测不同放射剂量下鼻咽癌细胞CNE1 中miRNA-325-3p 及其靶基因的表达水平变化，通过克隆形成实验观察不同放射剂量下过表达miRNA-325-3p 及敲低靶基因后CNE1 细胞克隆形成率的变化，流式细胞术验证过表达miRNA-325-3p及敲低靶基因后CNE1 在不同放射剂量下凋亡水平的变化，MTT法检测miRNA-325-3p 过表达和CK13 敲低组鼻咽癌细胞CNE1在不同放射剂量下的细胞存活率以验证其放疗敏感性的变化。结果：CK13 确认为miRNA-325-3p 的潜在靶基因，鼻咽癌细胞CNE1 经放射处理后，miRNA-325-3p 的表达水平显著升高、CK13 的表达水平显著降低（均P<0.05）。miRNA-325-3p 表达量上调和CK13 基因沉默均显著提高CNE1 细胞的存活率[miRNA上调时：（60.14±3.55）% vs（19.23±3.42）%，t=14.37、P<0.01；CK13 沉默时：（76.15±5.13）% vs（28.53±3.68）%，t=13.06、P<0.01]和克隆形成率，降低了凋亡率[miRNA 上调时：（27.95±2.67）% vs（51.68±3.47）%，t=9.39、P<0.01；CK13 沉默时：（20.31±2.62）% vs（38.14±3.83）%，t=6.66、P<0.01]。结论：miRNA-325-3p 能够通过下调靶基因CK13的表达降低鼻咽癌细胞CNE1 对放疗的敏感性。     

进展型脑梗死患者miRNA的表达水平及临床意义

目的探讨进展型脑梗死患者微小RNA(miRNA)的表达水平及临床意义。方法回顾性分析2016年7月至2018年7月期间我院收治的138例脑梗死患者病例资料。根据斯堪的那维亚卒中量表(SSS)将其分为对照组(稳定型脑梗死,82例)和观察组(进展型脑梗死,56例)。观察组患者按照高级中枢损伤严重程度评定标准(MESSS)评分为轻度进展(30例)、中度进展(17例)、重度进展(9例)三个亚组。对观察组出院两个月后进行预后随访,并将其分为预后不良组及预后良好组。分析进展型脑梗死患者miRNA的表达水平及临床意义。结果进展型脑梗死患者的miRNA-21、miRNA-223水平均显著高于稳定型脑梗死患者(P 0. 05); miRNA-21、miRNA-223的高表达均是进展型脑梗死的危险因素(P 0. 05),且进展型脑梗死的严重程度与血清miRNA-21、miRNA-223的表达水平均呈正相关(r=0. 834,P=0. 008;r=0. 896,P=0. 001)。预后不良组患者血清miRNA-21、miRNA-223表达水平显著高于预后良好组(P 0. 05);血清miRNA-21、miRNA-223表达水平预测进展型脑梗死预后的AUC面积分别为0. 805、0. 834,并分别得出截断值4. 45 (敏感度77. 14%,特异性82. 28%)、7. 06(敏感度82. 86%,特异性73. 42%)。结论进展型脑梗死患者miRNA-21、miRNA-223呈高表达,且其表达水平与脑梗死严重程度呈正相关,同时对预测进展型脑梗死预后均具有较高的敏感度和特异度,有可能成为一种早期诊断和预测进展型脑梗死生物标志物。     

急性缺血性卒中患者血清miRNA-148a表达水平检测及其临床价值预探索

目的 探讨急性缺血性卒中（acute i schemi c stroke，AI S）患者血清mi RNA-148a的表达水平及其临床 价值。 方法 收集42例AIS患者和42例健康者的外周血血清样本，采用实时定量聚合酶链反应技术测定 miRNA-148a的表达水平。绘制miRNA-148a对AIS诊断的受试者工作特征（receiver operating characteristic， ROC）曲线，并分析mi RNA-148a与临床资料的相关性。从基因表达综合数据库下载GSE55937数据集对 AIS患者的miRNA-148a水平进行进一步验证，并采用生物信息学方法预测其靶基因及生物功能。 结果 AIS患者发病12 h内的miRNA-148a相对表达量低于健康对照组（0.76±0.23 vs 1.02±0.21， P <0.001）。mi RNA-148a诊断AI S的ROC曲线下面积为0.79（95%CI 0.70～0.89，P <0.001）。Spearman相 关性检验表明，mi RNA-148a水平与AIS患者的脑梗死面积（r =-0.34，P =0.03）和hs-CRP水平（r =- 0.43，P =0.005）负相关。在GSE55937数据集中，mi RNA-148a相对表达量在AIS组也明显低于对照组 （1.93±0.46 vs 2.52±1.00，P =0.011），其对AIS诊断的ROC曲线下面积为0.69（95%CI 0.54～0.84， P =0.022)。生物信息学方法共预测到58个miRNA-148a的靶基因，包括WNT10B、DNMT1等。这些靶基因 主要涉及的分子机制包括调控细胞凋亡、FoxO信号通路、PI3K-Akt通路等。 结论 AIS患者发病早期的血清miRNA-148a水平降低，可能涉及细胞凋亡和FoxO、PI3K-Akt等信号通 路，提示mi RNA-148a可能在AIS的诊断及病情评估方面具有一定参考价值。     

miRNA-9和miRNA-218在髓母细胞瘤中的表达及意义

目的miRNA-9和miRNA-218在髓母细胞瘤的表达及其诊断意义。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)技术分别检测11例MB患者癌组织(实验组)和癌旁组织(对照组)的miRNA-9和miRNA-218表达水平并进行统计分析。结果MB患者组织中miRNA-9相对表达量(0.44±0.40)低于癌旁组织,miRNA-218相对表达量(0.55±0.32)低于癌旁组织,两者差异均有统计学意义(P<0.05);miRNA-9和miRNA-218的表达与肿瘤大小、分期、是否转移无关(P>0.05)。结论MB患者组织中miRNA-218和miRNA-9均表达下降,提示其参与了MB的发病机制并在其中发挥重要作用,且两者可成为MB有效治疗靶点。     

microRNA-125b及其相关因子Bcl-2、 MMP-2在扁平苔藓中的表达

 目的:检测microRNA-125b（miRNA-125b）及其下游靶蛋白B细胞淋巴瘤-2 (Bcl-2) 蛋白、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）在扁平苔藓(LP）中的表达，探讨其在发病中的意义。方法：采用RT-PCR法检测miRNA-125b在LP组织及正常皮肤组织的表达水平，ELISA法检测Bcl-2、MMP-2在LP组织及正常皮肤组织的表达水平，并进行比较。使用Spearman秩相关检验评估miRNA-125b与Bcl-2表达水平之间的相关性。结果：与正常组相比，LP患者组织中Bcl-2表达明显升高(0.52±0.05比0.49±0.04，t=2.84,P=0.018)，MMP-2表达明显升高(7.48±2.88比5.78±3.82，t=2.19,P=0.032)，而miRNA-125b表达明显下调(0.54±0.62比0.93±0.93，t=2.18,P=0.033)。Spearman秩相关分析显示miRNA-125b表达与Bcl-2呈负相关(r=-0.26，P=0.027),但与MMP-2无明显相关（r=-0.22,P=0.056）。结论：miRNA-125b可能是LP治疗的潜在治疗靶点，在LP发病机制中发挥关键作用。     

皮肤黑素瘤中miRNA-34c的表达对促血管新生因子VEGF-A、VEGFR-1的影响

目的探讨皮肤黑素瘤中miRNA-34c的表达以及其对促血管新生因子VEGF-A和VEGFR-1的影响。方法 Northern blotting检测原代人黑素瘤细胞、黑素瘤细胞株A375和原代人表皮黑素细胞miRNA-34c表达。构建miRNA-34c基因过表达与基因敲低的黑素瘤细胞株A375细胞系即高表达miRNA-34c组和低表达miRNA-34c组,以空载体转染黑素瘤细胞株A375作为空载体对照组。CCK-8法检测各组细胞增殖活性。qRT-PCR和Western blotting分别检测各组VEGF-A、VEGFR-1 mRNA和蛋白表达。结果与原代人表皮黑素细胞相比,黑素瘤细胞株A375和原代人黑素瘤细胞中miRNA-34c的表达降低(P<0.05)。高表达miRNA-34c组、低表达miRNA-34c组和空载体对照组细胞增殖活性无明显差异(P>0.05)。高表达miRNA-34c组VEGF-A、VEGFR-1的mRNA和蛋白表达较空载体对照组降低(P<0.05)。低表达miRNA-34c组VEGF-A、VEGFR-1的mRNA和蛋白表达较空载体组升高(P<0.05)。结论 miRNA-34c在皮肤黑素瘤中呈现特异性下调,miRNA-34c可能通过对促血管新生因子VEGF-A、VEGFR-1的下调参与皮肤黑素瘤的发生与发展。     

高危型HPV阳性宫颈癌患者miRNA-34a-5p的表达及临床意义

目的　探讨高危型人乳头状瘤病毒（high risk-human papilloma virus, HR-HPV）阳性宫颈癌患者组织及血清中微小RNA（microRNA, miRNA）-34a-5p的表达及其对宫颈癌的诊断价值。方法　将100例HR-HPV阳性宫颈癌患者（宫颈癌组）、70例宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia, CIN）患者（CIN组）、70例HR-HPV阳性子宫良性病变或者HPV单纯阳性的健康体检者（对照组）作为研究对象。采集上述研究对象的血清标本及70例行手术治疗的宫颈癌组患者癌组织及癌旁组织。使用实时荧光定量PCR技术测定组织及血清中miRNA-34a-5p水平，并分析miRNA-34a-5p与宫颈癌临床、病理指标的关联及血清miRNA-34a-5p对宫颈癌的诊断价值。结果　①对照组血清中miRNA-34a-5p的相对表达量高于CIN组和宫颈癌组：（0.933±0.097）vs.（0.554±0.099）vs.（0.369±0.099），差异有统计学意义（F=741.401，P=0.000）；宫颈癌组患者术前血清中miRNA-34a-5p相对表达量低于术后1周，差异有统计学意义（t=8.305，P=0.000）。有无淋巴结转移和有无远处转移的宫颈癌患者血清中miRNA-34a-5p相对表达量的差异有统计学意义（P均＜0.05）。②宫颈癌组患者癌旁组织中miRNA-34a-5p的相对表达量高于癌组织，差异具有统计学意义（t=40.313，P=0.000）。③宫颈癌组患者癌组织中的miRNA-34a-5p表达水平与血清中的表达水平呈正相关（r=0.908，P=0.000）。④以0.508为miRNA-34a-5p相对表达量的最佳临界值诊断宫颈癌，其灵敏度为83.6%，特异度为79.4%，AUC为0.860，95%置信区间为0.803～0.917。结论　HR-HPV阳性宫颈癌患者癌组织和血清中miRNA-34a-5p表达下调，对宫颈癌诊断及预后监测具有一定的参考价值。