柴胡皂苷D通过诱导自噬抑制人结直肠癌细胞SW480增殖的实验

目的:研究柴胡皂苷D（saikosaponin-D，SSD）对人结直肠癌细胞SW480自噬的影响，并探讨诱导的自噬对细胞增殖的影响。方法:Western-blot检测SSD对自噬相关蛋白LC3A/B和p62表达的影响，LC3翻转实验和GFP-RFP-LC3荧光实验验证自噬流的发生。Western-blot检测3-MA对SSD所诱导自噬的抑制作用，MTT和细胞计数实验研究3-MA抑制自噬后SSD对SW480细胞增殖的影响。结果:SSD能够诱导SW480细胞发生自噬，表现在LC3A/B II及LC3A/B II/I比值的增高、自噬经典底物蛋白p62的减少、LC3翻转试验阳性以及LC3荧光实验中黄色和红色荧光颗粒的增多（P＜0.05）。自噬抑制剂3-MA能够抑制SSD所诱导自噬的发生（P＜0.05），且3-MA抑制自噬后，SSD对SW480的增殖抑制效应减弱（P＜0.05），提示SSD诱导的自噬对细胞的增殖起抑制作用。结论:SSD通过诱导自噬抑制人结直肠癌细胞SW480的增殖。     

中成药逆转人结肠癌细胞株对化疗药物耐药的研究

目的:本研究拟观察鸦胆子油乳注射液、华蟾素注射液和注射用黄芪多糖对结肠癌耐药细胞株的杀伤作用,为临床合理、有效使用中成药提供实验依据。方法:运用药物浓度梯度递增间歇诱导法建立人结肠癌lovo细胞耐5-氟尿嘧啶细胞株,并命名为lovo/5-Fu。MTT法检测lovo/5-Fu的耐药能力及不同浓度中成药对lovo/5-Fu细胞株的耐药逆转作用,并根据相应结果计算耐药逆转倍数(RF)。细胞迁移实验分为4组:空白对照组、黄芪多糖组、鸦胆子组和华蟾素组,检测不同中成药对lovo/5-Fu细胞株迁移能力的影响。结果:5-Fu对lovo细胞株的IC_(50)为14.5 mg/L,对lovo/5-Fu细胞株的IC_(50)为115.1 mg/L,根据上述两株细胞的IC_(50)可算出lovo/5-Fu细胞株对5-Fu的耐药指数为:7.94。浓度为17.3、45.3、83.8、112.5 mg/L鸦胆子油乳注射液的耐药逆转倍数分别为9.5、23.5、54.4、86.5倍;浓度为8.2、21.2、38.6、50.1 mg/L华蟾素注射液的耐药逆转倍数分别为11.2、25.2、56.6、90.5倍;浓度为26.3、70.9、115.2、163.4 mg/L注射用黄芪多糖的耐药逆转倍数分别为1.5、8.2、26.5、74.2倍。与空白对照组比较,黄芪多糖组、鸦胆子组和华蟾素组侵出小室的细胞数目明显减少,迁移能力明显减弱,其中以鸦胆子组和华蟾素组更为明显,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:鸦胆子油乳注射液、华蟾素注射液和注射用黄芪多糖这三种中成药均能不同程度的逆转lovo/5-Fu对5-Fu的耐药性,其中以鸦胆子油乳注射液和华蟾素注射液最为明显。     

pT67M54稳定单克隆细胞株（系）的建立

将一个拟定的目的重组基因构建转染进入一个具有优异品质的包装细胞，建立组合特定目的基因载体的独一无二的稳定单克隆细胞株(系)是一项极为艰苦、富有挑战而又非常重要的工作。根据研究的需要，我们选择和决定将经过一再测试已成功表达的新构建质粒pM54转染进入pT67细胞以建立能生产逆转录病毒(含特异启动子及目的基因)的稳定单克隆细胞株(系)。     

MAGE-1、MAGE-3、BAGE、GAGE基因在人舌鳞癌Tca8113细胞株中的表达

我们采用RT PCR法检测人舌鳞癌Tca8113细胞株的总RNA ,以确定一些基因在人舌鳞癌Tca8113细胞株中的表达状况 ,为进一步在口腔肿瘤组织中检测相关的基因以及开展肿瘤特异性免疫治疗和基因治疗奠定基础。1.材料和方法 :(1)实验对象 :Tca8113细胞株购于上海细胞研究所。另选用 10例正常舌部组织标本对照。(2 )研究方法 :用RT PCR法分别检测MAGE 1、MAGE 3、GAGE1 6、GAGE1 2及BAGE基因mRNA表达水平 ,以GAPDH基因作为检测内对照。①用Trizol(Gibco产品 )提取细胞株和组织标本总RNA ;②用逆转录酶和Oligo dT引物 (Sagontech…     

永生化细胞株的建立

建立永生化细胞株是细胞生物学的新进展。除了自发性永生化,人们通常将外源性永生化基因,包括病毒、原癌基因和p53突变体,通过基因转染技术导入目的细胞内,建立永生化细胞株。永生化的机理基于细胞的M1/M2期模式。目前已建立起十余种口腔医学相关永生化细胞株,但它们具有一定的局限性。     

田基黄对人舌癌细胞株TSCCa细胞毒作用的研究

本实验采用体外细胞毒试验（MTT法）和电镜观察，研究了田基黄对人舌癌细胞株TSCCa的细胞毒作用。结果表明：田基黄对人舌癌细胞株TSCCa的生长有明显的抑制作用，其抑制率随浓度的增加而提高。电镜下见田基黄对癌细胞内线粒体和粗面内质网有损伤作用。结果提示中药田基黄对口腔鳞癌有较好的治疗作用。     

PTTG和bFGF在舌癌细胞株Tca8113中表达相关性研究

目的：探讨垂体肿瘤转化基因（Pituitary Tumor Transforming Gene,PTrG）蛋白在舌癌细胞株Tca8113中的表达及其与碱性成纤维细胞生长因子（basic Fibroblast Growth Factor,bFGF）间的关系.方法：应用免疫细胞化学方法,检测加入bFGF抗体后孵育的癌细胞中PTTG蛋白表达的变化.结果：Tca8113中PTTG蛋白呈阳性表达,并受bFGF影响,加入bFGF抗体的培养液中的癌细胞PTTG蛋白荧光明显减弱,随着时间延长和bFGF抗体滴度增加,减弱趋势明显.结论：舌癌细胞株中PTTG蛋白的表达受bFGF制约,对二者的联合治疗可能是一种治疗舌癌的有效方法.     

染料木黄酮对成骨细胞增殖、分化和凋亡影响的实验研究

目的研究染料木黄酮对成骨细胞增殖、分化和凋亡的影响，以阐明其对骨形成的作用机制。方法酶消化和组织块相结合培养获得原代成骨细胞，并以成骨肉瘤细胞株UMR-106细胞作对照，加入不同浓度的染料木黄酮后，流式细胞仪和噻唑蓝比色法(MTT)检测成骨细胞细胞周期比例的改变以及凋亡情况；生化法检测细胞内碱性磷酸酶含量的改变。结果流式细胞分析和MT观测结果表明：染料木黄酮促进了原代成骨细胞由G0(G1)期向S期、G2期和M期的移行过渡，从而促进了原代成骨细胞的增殖。染料木黄酮对成骨肉瘤细胞株UMR-106细胞周期无影响，但可诱导UMR-106细胞凋亡。碱性磷酸酶检测结果表明：染料木黄酮可促进原代成骨细胞的分化。结论染料木黄酮可在一定程度上促进成骨细胞的增殖和分化，诱导成骨肉瘤细胞凋亡。     

基于唾液酸酶和岩藻糖转移酶的抗体—细胞偶联物构建

目的 通过基于唾液酸酶和岩藻糖转移酶的糖链工程将曲妥珠单抗高密度偶联到人外周血白血病T细胞Jurkat细胞,并评价偶联细胞对HER2+靶细胞的识别活性。方法 首先通过凝集素染色和流式细胞术探究去唾液酸化对细胞上α-1,3FucT催化的岩藻糖编辑效率的影响。然后制备含有叠氮标签的曲妥珠单抗,与GDP-炔基岩藻糖通过生物正交反应构建GDP-岩藻糖-抗体偶联物。再利用α-1,3FucT将GDP-岩藻糖-抗体偶联物转移至唾液酸酶处理过的细胞表面,构建抗体-细胞偶联物,并通过流式细胞术和共聚焦成像验证。最后通过荧光成像观察抗体-细胞偶联物对靶细胞SK-BR-3细胞的识别。结果 细胞表面糖链的末端α-2,6唾液酸切除后能够显著提升α-1,3FucT催化的岩藻糖编辑的效率,成功制备GDP-岩藻糖-抗体偶联物并转移至细胞表面得到曲妥珠单抗-Jurkat偶联物,去唾液酸化显著增加了Jurkat细胞偶联曲妥珠单抗的容量,构建的曲妥珠单抗-Jurkat偶联物具备HER2+细胞靶向性。结论 细胞糖链工程可实现细胞偶联分子容量的调节,应用于抗体对免疫细胞的功能化,也为构建海洋糖类活性化合物偶联细胞提供了新的思路...     

三羟异黄酮抑制黑色素瘤B16细胞增殖作用的机制研究

目的:研究三羟异黄酮抑制黑色素瘤B16细胞增殖作用的分子机制.方法:以4',5,7三羟异黄酮处理黑色素瘤B16细胞1～4天后,以生长曲线反映其增殖活力,以B16细胞形态、黑色素含量及以流式细胞仪检测细胞周期变化等观察三羟异黄酮对黑色素瘤B16细胞的抑制增殖作用.结果:用10、30、90 μmol/L的三羟异黄酮作用肿瘤细胞均有不同程度的抑瘤作用(P<0.05～P<0.01).表现为黑色素生成能力增加,细胞生长缓慢,可使B16细胞阻断在S期.结论:三羟异黄酮不同剂量对体外黑色素瘤B16细胞增殖有明显的抑制作用.