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1.
目的 研究异土木香内酯对宫颈癌细胞的迁移、侵袭的影响及其机制。方法 体外培养人宫颈癌HeLa细胞株,随机分为对照组、低剂量实验组、中剂量实验组、高剂量实验组和AG490组。低、中、高剂量实验组分别用10,40和80μmol·L-1异土木香内酯处理细胞,AG490组用25μmol·L-1的AG490处理细胞,对照组加入等体积二甲基亚砜。通过划痕实验检测细胞的迁移能力;用侵袭实验(Transwell)检测细胞的侵袭能力;用蛋白质印迹(Western blot)法检测蛋白表达。结果 对照组和低、中、高剂量实验组细胞的迁移率分别为(47.62±4.81)%,(42.53±4.22)%,(36.88±3.70)%和(12.45±1.25)%;细胞侵袭数目分别为(98.34±9.85),(92.33±9.24),(71.64±7.22)和(36.51±3.62)个;N-cadherin蛋白的相对表达水平分别为1.05±0.11,0.97±0.09,0.77±0.08和0.59±0.06;Vimentin蛋白的相对表达水平分别为1.03±0.10,0.92... 相似文献
2.
3.
目的探讨分选蛋白(SNX)17通过激活表皮生长因子受体(EGFR)影响胰腺癌细胞侵袭、增殖和迁移能力。方法采集3例人胰腺癌组织及癌旁组织样本,自2021年1月至2021年3月收集于贵州医科大学附属医院肝胆外科,用免疫组织化学(IHC)染色检测癌组织与癌旁组织中SNX17的表达量。用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)技术检测胰腺癌细胞系中SNX17的相对表达量;用空siRNA以及两种敲低SNX17的小干扰RNA(siRNA)分别转染上述细胞,分组为NC组、SNX17-si1组和SNX17-si2组。通过细胞计数试剂盒(CCK-8)、平板克隆实验检测胰腺癌细胞的增殖能力,Transwell及划痕实验检测胰腺癌细胞迁移能力。蛋白质印迹法(Western blot)检测在SNX17敲低的癌细胞中EGFR以及细胞外调节激酶(ERK)的相对表达量差异。最后在胰腺癌细胞中共转染siRNA以及EGFR的过表达质粒进行功能回复实验(分组为NC组、SNX17-si1组、EFGR-overexpression+SNX17-si1组),组间比较采用t检验,组内两两比较采用LSD-t检验。结果免疫组织化学检测结果显示癌组织中SNX17相对表达量高于癌旁组织(5.750±1.323,t=4.345,P<0.05),差异有统计学意义。RT-qPCR发现在胰腺癌细胞系中,人胰腺癌细胞-2(MIA PaCa-2,19.240±2.048、t=8.844,P<0.05)和人胰腺癌细胞-1(PANC-1,5.796±1.256,t=3.712,P<0.05)细胞中SNX17相对表达量显著高于其他胰腺癌细胞系,差异有统计学意义。CCK-8实验技术结果显示,SNX17-si1组、SNX17-si2组低于NC组吸光度值(0.707±0.059比0.346±0.075比1.109±0.052比0.602±0.047,t=12.060、4.642、21.440、12.750,P<0.01),差异有统计学意义。平板克隆结果显示转染组细胞集落数减少。划痕实验结果显示敲低SNX17降低细胞的侵袭能力。Transwell迁移实验结果显示,SNX17-si1组、SNX17-si2组单位视野穿过的细胞数低于NC组[(666.300±14.400)个比(574.300±10.800)个比(129.300±4.300)个比(93.700±3.100)个,t=46.260、53.220、29.850、15.450,P<0.01],差异有统计学意义。而侵袭实验结果表示,SNX17-si1组、SNX17-si2组单位视野穿过的细胞数低于NC组[(137.5±20.1)个比(100.8±17.4)个比(324.5±7.9)个比(289.8±10.2)个,t=6.836、5.807、41.020、28.430,P<0.01],差异有统计学意义。Western blot检测结果显示,SNX17-si1组与SNX17-si2组EGFR的相对表达量低于NC组(0.477±0.032比0.278±0.042比0.853±0.053比0.826±0.050,t=14.920、6.640、16.130、16.430,P<0.01),差异有统计学意义。在回复实验中,CCK-8、Transwell实验及划痕实验证明共转染EGFR-overexpression+SNX17-si1逆转敲低SNX17所导致的胰腺癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的降低。最后用Western blot结果表明,共转染组比较单独转染SNX17-si1的组别,EGFR的相对表达量分别增高(0.712±0.010、t=70.220,P<0.05;1.002±0.027、t=37.580,P<0.05),差异均有统计学意义。结论SNX17通过影响EGFR促进胰腺癌细胞MIA PaCa-2和PANC-1的增殖、侵袭、迁移能力。 相似文献
4.
目的观察机械牵张力(SS)是否通过激活PKCδ诱导小鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移,并进一步探究小檗碱(BBR)对其的影响及作用机制。方法体外常规培养小鼠VSMC分为6组:阴性对照组(NC)、小檗碱组(BBR)、PKCδ抑制剂Sotrastaurin组(Sotras)、SS组、SS+BBR组和SS+Sotras组。静息培养的VSMC分别用BBR或Sotrastaurin或ddH2O预处理1 h,继而机械牵张力(10%牵张强度)牵拉不同时间或不牵拉作为对照。收集各组VSMC,Western blot检测PKCδ磷酸化水平;免疫荧光法检测VSMC增殖;细胞划痕实验检测VSMC迁移。结果免疫荧光和细胞划痕实验结果显示,与阴性对照组相比,机械牵张力刺激显著提高VSMC中Ki67阳性水平约469%(P<0.05,n=3),划痕宽度缩小约54.9%(P<0.05,n=3),而BBR和Sotrastaurin能明显抑制机械牵张力引起的上述变化,与SS组相比,Ki67阳性水平分别下降约66.9%和80.2%(P<0.05,n=3),划痕宽度增加约79.4%和120.1%(P<0.05,n=3);Western blot结果显示,与阴性对照组相比,机械牵张力刺激可诱导PKCδ磷酸化水平呈时间依赖性升高,以30 min最显著,提升约97.5%(P<0.05,n=3);而BBR可呈浓度依赖性抑制机械牵张力刺激诱导的PKCδ磷酸化水平升高,以200μmol/L效果最显著,降低约37.6%(P<0.05,n=3)。结论BBR可通过抑制PKCδ磷酸化进而阻断机械牵张力诱导的VSMC增殖和迁移。 相似文献
5.
目的探讨鞘氨醇激酶1(SPHK1)在甲状腺乳头状癌(PTC)中的表达及对IHH4细胞侵袭和迁移的影响。方法采用免疫组化检测110例PTC组织及癌旁组织中SPHK1的表达,分析SPHK1表达与其临床指标的关系。采用小干扰RNA-SPHK1转染PTC细胞系IHH4,Transwell实验和细胞划痕实验分析其对IHH4细胞侵袭及迁移的影响。采用Western blot法检测MMP-2和MMP-9蛋白表达情况。结果 SPHK1在PTC组织中的阳性表达率高于癌旁组织[47.27%(52/110)vs.11.82%(13/110)](P<0.05)。SPHK1表达与包膜侵犯和淋巴结转移密切相关(P<0.01)。干扰SPHK1后,侵袭和迁移细胞数目减少(P<0.05),MMP-2和MMP-9蛋白表达降低(P<0.05)。结论 SPHK1在PTC组织中高表达,与IHH4细胞的侵袭和迁移密切相关,可能是通过MMPs信号通路发挥作用。 相似文献
6.
目的:探究介藜芦碱对胃癌细胞增殖、迁移侵袭及上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)的作用及分子机制。方法:以人胃癌细胞NCI-N87为模型,设置对照组、介藜芦碱低剂量组(10 μg/ml)、介藜芦碱高剂量组(30 μg/ml),Edu实验检测细胞增殖、transwell实验分别检测细胞迁移和侵袭能力;细胞免疫荧光以及蛋白免疫印迹实验检测EMT相关标志物表达水平;利用定量PCR检测介藜芦碱对胃癌细胞miR-132-3p及其靶基因FOXN3表达的影响。结果:Edu增殖实验显示介藜芦碱对胃癌细胞增殖能力影响不明显,而transwell实验显示介藜芦碱能够明显抑制胃癌细胞迁移和侵袭(P<0.05);细胞免疫荧光和蛋白免疫印迹结果显示介藜芦碱升高E-cadherin表达而降低Vimentin、ZO-1的表达(P<0.05);定量PCR结果显示介藜芦碱处理胃癌细胞明显抑制miR-132-3p表达,同时促进其靶基因FOXN3表达增加(P<0.05)。结论:介藜芦碱可能通过调控miR-132-3p/ FOXN3轴,抑制胃癌细胞迁移、侵袭和EMT能力。 相似文献
7.
《沈阳药科大学学报》2022,(1):60-67
目的探究三甲胺(trimethylamine, TMA)与甲萘醌单独用药及联合用药对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMC)的增殖、迁移能力及人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell, HUVEC)内胆固醇含量的影响。方法首先采用MTT法检测不同浓度TMA对VSMC及HUVEC增殖的影响;划痕实验和Transwell检测TMA与甲萘醌单独用药及联合用药对VSMC迁移能力的影响;DCFH-DA荧光探针法检测VSMC内活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平;Western blot法检测VSMC中MMP9、PCNA、SM22α的蛋白水平;ELISA法检测HUVEC内总胆固醇(cholesterol, TC)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol, HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol, LDL-C)的含量。结果不同浓度的TMA对VSMC及HUVEC的生长并无明显的影响。与单独用药相比,TMA与低剂量的甲萘醌联合用药可明显促进VSMC迁移与增殖,提高胞内ROS水平,上调VSMC内MMP9及增殖型标志基因PCNA的蛋白表达,同时下调VSMC内分化型标志基因SM22α的蛋白表达。与TMA和低剂量的甲萘醌联合用药组相比,N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetyl-L-cysteine, NAC)、TMA和甲萘醌联合处理组可明显降低VSMC内ROS水平,下调VSMC内MMP9及PCNA的蛋白表达,上调VSMC内SM22α的蛋白表达。TMA与低剂量的甲萘醌联合用药还可以明显提高HUVEC内TC、HDL-C及LDL-C的含量。结论 TMA自身对于VSMC和HUVEC并无显著影响,加入甲萘醌后,联合用药会诱导VSMC表型转化,提高HUVEC内胆固醇含量。同时NAC可缓解TMA与低剂量甲萘醌联合用药对VSMC造成的影响。提示联合用药可能通过影响ROS水平增加动脉粥样硬化发生的风险。 相似文献
8.
目的 研究miR-154靶向HMGA2基因在人子宫内膜癌中的表达及其对子宫内膜癌细胞恶性生物学行为的影响。方方法 检测各组样本中HMGA2 mRNA、miR-154的表达水平和HMGA2蛋白表达水平。培养人子宫内膜癌细胞株HEC-1-B、HHUA、hEEC和正常子宫内膜细胞株hESC,构建miR-154模拟物,检测各组细胞中HMGA2蛋白、miR-154及HMGA2 mRNA的表达情况,荧光素酶报告实验鉴定HMGA2与miR-154的靶向关系,检测各组细胞的增殖、迁移和侵袭情况。结果 HMGA2 mRNA和蛋白在子宫内膜癌中高表达,miR-154在子宫内膜癌中低表达。miR-154的表达量与子宫内膜疾病的严重程度呈负相关关系,HMGA2的表达量与子宫内膜疾病的严重程度呈正相关关系。HMGA2基因的表达显著提高了子宫内膜癌细胞的增殖、迁移与侵袭能力(P<0.05)。结论 miR-154可通过负调控HMGA2抑制子宫内膜癌细胞的恶性生物学行为。 相似文献
9.
背景与目的:丝氨酸/精氨酸富集剪接因子1(serine/arginine-rich splicing factor 1,SRSF1)与肿瘤的发生、发展密切相关。食管癌是常见的消化系统恶性肿瘤,但SRSF1在食管癌中的作用罕有报道。检测SRSF1在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织中的表达及其对ESCC细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并初步探讨其作用机制。方法:收集2020年1月—2021年12月于河北医科大学第四医院行手术切除的40例ESCC患者的癌及癌旁组织标本,采用免疫组织化学染色法检测ESCC组织中SRSF1的水平。采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测ESCC细胞系中SRSF1 mRNA表达和蛋白水平。筛选SRSF1高表达的Eca9706细胞进行研究。采用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)技术降低SRSF1 mRNA表达。采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)、transwell和Matrigel基质胶实验分别检测Eca9706细胞增殖、迁移和侵袭能力。采用数据库分析ESCC组织中血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)的表达,并分析SRSF1与VEGFA表达的相关性。采用RTFQ-PCR检测Eca9706细胞VEGFA Iso8a和Iso8b亚型的表达水平,以及敲低SRSF1后VEGFA Iso8a和Iso8b亚型的表达变化。结果:SRSF1在ESCC组织中的表达水平高于癌旁组织(P<0.05)。SRSF1 mRNA表达和蛋白水平在ESCC Eca9706细胞系中最高(P<0.01)。转染siRNA-SRSF1组中SRSF1 mRNA表达和蛋白水平显著低于siRNA-NC组(P<0.01)。与siRNA-NC组相比,siRNA-SRSF1组Eca9706细增殖、迁移和侵袭能力显著降低(P<0.05)。ESCC组织中VEGFA表达明显高于食管正常组织(P<0.05),且与SRSF1表达呈正相关(P<0.01)。Eca9706细胞VEGFA Iso8a亚型表达明显高于VEGFA Iso8b亚型(P<0.01),且敲低SRSF1后VEGFA Iso8a亚型表达降低,VEGFA Iso8b亚型表达升高(P<0.01)。结论:SRSF1可通过作用于VEGFA可变剪接促进ESCC Eca9706细胞增殖、侵袭和迁移。 相似文献
10.
目的 探究 DR-NM23在卵巢癌组织中的表达及对细胞增殖和转移的影响。方法 收集卵巢癌肿瘤组织和癌旁组织各 68例,通过免疫组化染色检测 DR-NM23表达水平,分析绝经、肿瘤大小、分化程度、局部浸润、淋巴转移和远端转移与 DR-NM23表达水平的相关性。在 SKOV3细胞系中过表达、沉默 DR-NM23,分别得到 DR-NM23组和 SiDR-NM23组,与对照组( NC组)相比,评估各组增殖、迁移和侵袭能力,以评估 DR-NM23在卵巢癌组织中的作用机制。结果 卵巢癌组织中 DR-NM23平均染色强度为 2.68±0.75,低于癌旁组织 7.05±2.05,差异具有统计学意义( P<0.05)。卵巢癌组织中 DR-NM23表达水平与是否绝经、肿瘤大小以及局部浸润无相关性,差异均无统计学意义( χ2=0.418, 0.864, 相似文献