PTEN-Long通过PI3K-AKT途径对HepG2肝癌细胞的影响

摘 要：［目的］ 探讨PTEN-Long对肝细胞癌HepG2细胞的影响及其脂质磷酸酶活性与PI3K-AKT信号通路之间的关系。［方法］ 细胞转染法转染PTEN-Long、PTEN-LongG302R和Vector于HepG2细胞。转染48h后,检测各组细胞增殖数,Western blot法检测各组细胞PTEN-Long、pAkt、pS6K表达变化,流式细胞法检测各组细胞细胞凋亡水平变化,细胞划痕法检测各组细胞迁移情况。［结果］ 细胞转染后,PTEN-Long组、PTEN-LongG320R组表达PTEN-Long蛋白量无显著性差异;与Vector、PTEN-LongG320R组相比,PTEN-Long组pAkt (Ser473)、pS6K (Thr389)表达量明显下降。从转染后48h开始,PTEN-Long组细胞增殖数较Vector 组、PTEN-LongG320R组明显减少,差异有统计学意义（P<0.05）;PTEN-Long组较Vector 组、PPTEN-LongG320R组凋亡明显增强（P<0.05）;划痕14h后,PTEN-Long组、PTEN-LongG320R组较Vector组的迁移细胞数明显减少（P<0.05）。［结论］ PTEN-long依赖于其脂质磷酸酶活性,通过PI3K-AKT通路调控肝癌HepG2细胞的增殖与凋亡。     

miR205-3p靶向MDM2调控乳腺癌血管内皮细胞增殖的研究

目的分析miR205-3p通过靶向鼠双微体2基因（MDM2）调控乳腺癌血管内皮细胞增殖的作用机制，探讨乳腺癌临床治疗可行的分子靶点。方法采用乳腺癌细胞（MDA-MB-231）皮下移植瘤组织为试验样本，通过免疫荧光实验检测移植瘤组织中是否有人源性肿瘤血管内皮细胞的存在，利用血管内皮细胞纯化技术得到移植瘤中的血管内皮细胞（即乳腺癌血管内皮细胞）。采用显微镜下观察细胞形态、内皮细胞成管实验及吞噬实验，验证血管内皮细胞的形态及生物学特性。检测乳腺癌血管内皮细胞和人脐静脉内皮细胞的miR205-3p的表达是否有差异，采用生物信息学分析方法得到miR205-3p的靶基因。通过改变miR205-3p的表达，研究靶基因的蛋白表达水平的改变。采用体外增殖实验及体内成瘤实验观察miR205-3p对乳腺癌血管内皮细胞及乳腺癌移植瘤增殖能力的影响。结果乳腺癌血管内皮细胞具有内皮细胞功能。相比较人脐静脉内皮细胞，miR205-3p在乳腺癌血管内皮细胞中表达降低（P＜0.05）。利用生物信息学分析得到miR205-3p的靶基因为MDM2，提高miR205-3p的表达水平后可降低MDM2蛋白的表达（P＜0.05），并在体内及体外水平都可影响乳腺癌血管内皮细胞的增殖能力。结论miR205-3p的表达水平升高可有效降低MDM2的表达，抑制肿瘤血管内皮细胞的增殖，这为抗肿瘤血管生成作用的研究及靶向药物开发提供了新的思路。     

PTEN-Long对肝癌细胞的抑制作用研究

目的探讨第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白（PTEN）基因编码PTEN的一种变形体PTEN-Long对肝癌细胞的抑制作用。方法细胞质粒转染法转染PTEN-Long于人肾上皮293T细胞，其溶解产物通过疏水作用和离子交换作用分离纯化PTEN-Long蛋白；采用Westernblot法检测分离纯化的PTEN-Long蛋白；以不同浓度PTEN-Long蛋白干预肝癌HepG2、HUH6、FOCUS细胞，并采用MTS法检测细胞存活情况。将40只129S1/SvImJ小鼠按随机数字表法分为PTEN-Long组（腹腔注射0.2mlPTEN-Long，剂量4mg/kg体重，1次/d）和对照组（腹腔注射0.2ml0.9%氯化钠注射液，1次/d），每组20只。小鼠大腿根部接种肝癌HepG2（两组分别各10只）或HUH6（两组分别各10只）细胞混合液，游标卡尺测量计算肿瘤体积。结果分离纯化后PTEN-Long蛋白纯度较高，约80%。与空白对照组比较，5nmol/L浓度以上的PTEN-Long对肝癌HepG2、HUH6细胞有明显的抑制作用，差异均有统计学意义（均P＜0.05），而PTEN-Long对肝癌FOCUS细胞无明显抑制作用，差异均无统计学意义（均P＞0.05）。异种移植试验显示，与对照组相比，PTEN-Long组小鼠肿瘤体积明显较小（P＜0.05）。结论分离纯化提取的PTEN-Long对肝癌细胞起抑制作用，这或为肝癌分子靶向治疗提供新思路。     

BDNF基因rs1519480多态性与男性酒精依赖患者攻击性的关联

目的:探讨酒精依赖患者与正常群体在攻击性行为上的差异，及脑源性神经营养因子(BDNF)基因rs1519480多态性的调节作用。方法:选取421例符合精神障碍诊断及统计手册第4版(DSM-IV)酒精依赖诊断标准的成年男性与212例正常成年男性，采用Buss-Perry攻击问卷(BPAQ)中文版评估攻击行为，用TaqMan q-PCR(聚合酶链式反应)测定BDNF rs15194800基因多态性，采用倾向评分匹配(PSM)技术对混杂变量进行控制。结果:酒精依赖患者BPAQ得分高于对照组(P<0.01);酒精依赖与rs1519480多态性具有交互作用(两因素方差分析P<0.01)。酒精依赖患者BDNFrs1519480 TT等位基因携带个体BPAQ得分高于C等位基因携带个体(P<0.05);BDNF rs1519480 TT等位基因携带者中，酒精依赖个体BPAQ得分高于非酒精依赖个体(P<0.001)。结论:酒精依赖与BDNFrs 1519480基因可能共同调控攻击性行为，BDNFrs 1519480 TT等位基因高表达可能是酒依赖患者攻击性的危险因素。     

改良乳腺癌干细胞向血管内皮细胞方向转化的研究

尽管多年来在乳腺癌的诊断和治疗中取得突破性进展, 但仍有部分患者出现复发和转移, 导致乳腺癌传统治疗的失败[1]。本研究通过改良内皮细胞培养基诱导培养, 获得具有内皮细胞功能的CD133+乳腺癌干细胞亚群, 为研究体外抗血管生成作用机制的模型建立奠定基础。