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1.
目的:探讨携带凋亡素基因(apopptin)的溶瘤腺病毒ATV感染对人宫颈癌HeLa 细胞自噬和凋亡的影响。方法: 分别用携带凋亡素基因的溶瘤腺病毒ATV与对照病毒Ad-MOCK(均为前期工作构建)感染HeLa 细胞后,应用WST-1 法检测ATV感染对HeLa 细胞增殖的影响,流式细胞术检测ATV感染对HeLa 细胞凋亡和细胞周期的影响,Western blotting 法检测ATV感染对HeLa 细胞自噬相关蛋白LC3、P62 与mTOR表达的影响,MDC染色法检测ATV 感染对HeLa 细胞自噬水平的影响。结果:ATV感染后抑制HeLa细胞增殖,并具有一定的时间效应关系;以ATV 100 MOI感染72 h 后抑制率达到59.26%,其抑制能力明显强于同时间段对照组(P<0.01)。ATV 感染48 h,ATV 组HeLa 细胞凋亡率显著高于对照组[(38.995±4.009)% vs (14.680±1.174)%,P<0.01]。感染后的HeLa 细胞,随着ATV 作用时间的延长,S 期出现阻滞,48 h 阻滞最强,显著高于对照组[ 58.490±2.447)% vs (43.235±4.419)%,P<0.05]。与对照组相比,ATV 感染HeLa 后,LC3 表达量6、12 h 逐渐增高,12 h 达到最大值(P<0.01),24 h 表达量最低(P<0.01);P62 蛋白在24 h 出现最高表达水平(P<0.01);而mTOR随着作用时间延长逐渐降低(48 h 时,P<0.01)。荧光显微镜下可见HeLa细胞核周区域MDC阳性染色,随着ATV作用时间延长,自噬小体明显增多;与对照组相比,6、12h 自噬小体数量显著增多(28.000±2.828) vs (8.500±2.121), (37.000±4.243) vs (14.000±1.414);均P<0.01],24 h 相对减少[(12.000±2.828) vs (17.000±1.414),P<0.01]。结论: 携带凋亡素基因的ATV溶瘤腺病毒可促进人宫颈癌HeLa 细胞的凋亡和自噬水平,进而特异性杀伤肿瘤细胞。  相似文献   
2.
目的从长白山特殊生境土壤中分离筛选出具有抗Staphylococcus aureaus与Escherichia coli两种临床常见指示菌效果明显的菌株。方法通过对菌株的初步分离,纯培养,革兰染色,抑菌实验,摇瓶发酵,形态特征等进行综合实验分析,优选具有较好抑菌作用的菌株。结果通过筛选,最终从16株形态典型的菌株中成功分离出2株具有明显抑菌效果的菌株,命名为D-x和D-f;菌株D-x与D-f发酵液上清及浸膏对两种靶标菌均具有明显的抑菌活性; D-x上清液对S.aureaus及E.coli的平均抑菌圈直径分别为13.8 mm和9.8 mm,浸膏对S.aureaus及E.coli的平均抑菌圈直径分别为10.5mm,7.2mm; D-f上清液对S.aureaus及E.coli平均抑菌圈直径分别达到12.5mm,10.8mm,浸膏对S.aureaus及E.coli平均抑菌圈直径分别达到9.6 mm,9.5 mm。结论通过筛选,菌株D-x与菌株D-f均具有较好抑菌活性,是两株值得开发的抗菌菌株。  相似文献   
3.
4.
目的:探讨重组溶瘤腺病毒Ad-Apoptin-hTERTp-E1A(ATV)对荧光素酶标记人肺癌细胞(A549-luc)和人肺癌细胞(A549)的体外抑制作用差异。方法:利用ATV分别感染A549 细胞和A549-luc 细胞,通过WST-1 和结晶紫染色法确定ATV的抑制作用的差异性,通过Hoechst 和Annexin V-FITC/PI 染色验证ATV的抑制方式。结果:ATV对A549 和A549-luc 细胞均具有明显抑制作用(P<0.05)。ATV在24、48、72 h 对两种细胞均有明显抑制作用(P<0.05 或P<0.01),且72 h 抑制率最强;剂量分别为1、10 和100 MOI的ATV对两种细胞均有抑制作用,且100 MOI抑制率最高。A549 细胞和A549-luc 细胞感染ATV后,均呈现核碎裂典型浓染和边集的凋亡现象,且凋亡率随时间的增加而增大,具有显著的时间效应(P<0.05 或P<0.01),且凋亡率均在72 h 达到峰值。结论:荧光素酶的插入没有明显改变ATV对A549-luc 细胞的抑制作用和抑制方式,ATV是通过诱导A549-luc 细胞和A549细胞凋亡从而达到对其显著性体外抑制作用.  相似文献   
5.
目的:探讨多柔比星和双特异性溶瘤腺病毒(Ad-VT、Ad-T、Ad-VP3、Ad-Mock)对乳腺癌细胞和正常乳腺细胞增殖抑制作用的差异。方法:通过WST-1 实验比较多柔比星和Ad-VT、Ad-T、Ad-VP3、Ad-Mock对乳腺癌细胞增殖的抑制率,并比较两种药物对正常乳腺上皮细胞的存活率的影响。通过Annexin V流式术、Hoechst 法、JC-1 法检测研究溶瘤腺病毒和多柔比星对乳腺癌细胞和正常乳腺上皮细胞杀伤作用的影响,并比较其凋亡率差异。结果:4 种双特异性溶瘤腺病毒均能有效地抑制乳腺癌细胞的增殖(P<0.05 或P<0.01),且抑制效果为Ad-VT>Ad-T>Ad-VP3>Ad-MOCK,抑制作用与时间成正相关。多柔比星也能有效地抑制乳腺癌细胞的增殖(P<0.05 或P<0.01),且随着浓度和时间的增加,抑制效果明显增强;但多柔比星对正常的乳腺上皮细胞也有较强的抑制作用,在72 h、5 μg/ml 条件下抑制率达到80%,而溶瘤腺病毒Ad-VT在72 h 对MCF-10A的抑制率为20%。双特异性溶瘤腺病毒诱导乳腺癌凋亡能力随时间的增加逐渐增强(P<0.05 或P<0.01),且致凋亡效率为Ad-VT>Ad-T>Ad-VP3>Ad-MOCK,而诱导正常乳腺细胞凋亡能力较弱。多柔比星诱导乳腺癌细胞和正常乳腺上皮细胞凋亡的能力基本相同(P<0.05 或P<0.01),且都为0.05<0.5<5 μg/ml。结论:双特异性溶瘤腺病毒能有效地抑制乳腺癌细胞的增殖,但对正常的乳腺细胞抑制作用较小,双特异性溶瘤腺病毒具有更好的安全性,为肿瘤的生物治疗提供了新的药物。  相似文献   
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