黑色素瘤相关抗原-As在食管鳞状细胞癌和贲门腺癌组织中的表达及其意义

目的:探讨黑色素瘤相关抗原(melanoma antigen,MAGE)-As在食管鳞癌和贲门腺癌组织中的表达,分析其与食管鳞癌和贲门腺癌患者临床病理学特征及其预后的关系.方法:选取河北医科大学第四医院2010年9月至2010年11月住院患者手术切除的食管鳞癌和贲门腺癌组织及距离癌组织边缘5 cm以上且外观正常的相应癌旁组织标本各60例,同时选取5例该院前列腺癌住院患者术后的睾丸组织作为阳性对照,应用免疫组织化学法检测食管鳞癌和贲门腺癌组织及相应癌旁组织中MAGE-As蛋白的表达.结果:食管鳞癌和贲门腺癌组织中MAGE-As蛋白表达率分别为68.33％ (41/60)和58.33％(35/60),而相应的癌旁组织未发现MAGE-As蛋白的表达.MAGE-As蛋白的表达与食管鳞癌患者的性别、年龄、临床分期、组织学分级、肿瘤大小、淋巴转移均无相关性(P＞ 0.05);MAGE-As蛋白表达与贲门腺癌患者的性别、年龄、临床分期、肿瘤大小、淋巴转移均无相关性(P＞0.05),但与组织学分级呈正相关(P＜0.05).Log-Rank检验显示,MAGE-As蛋白表达阳性的食管鳞癌(P=0.036)和贲门腺癌(P=0.045)患者的生存期均显著低于表达阴性的患者.结论:MAGE-As蛋白是食管鳞癌和贲门腺癌的相关抗原,可作为食管鳞癌和贲门腺癌预后不良的指标.     

基因芯片技术筛查并鉴定乳腺癌细胞中MAGE-A11的相关基因

目的：应用高通量基因芯片技术筛查乳腺癌细胞中黑色素瘤相关抗原（melanoma antigen,MAGE）-A11 的相关基因,并从数量和功能两方面加以验证。方法：采用基因芯片技术筛选乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231 和BT-549 中MAGE-A11 下游靶基因的mRNA的差异表达,对有代表性的基因进行了聚类分析,并利用qRT-PCR进行验证。以CCK-8 法、细胞划痕实验和Transwell实验检测MAGE-A11 对乳腺癌细胞中增殖、迁移和侵袭功能的影响。结果：3 种乳腺癌细胞过表达MAGE-A11 导致1 608个下游基因差异表达,主要涉及蛋白泛素化、细胞增殖和凋亡、肿瘤侵袭和转移。基因芯片中典型高表达的ZNF-451、CENPTJ、CDK13、API5 和LMO7 在qRT-PCR 在验证结果中也显著高于对照组（P<0.01）,低表达的SHPRH、PML、MARK2、LIMA1 和ANGPTL4也显著低于对照组（P<0.01）。转染MAGE-A11 组的乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231 和BT-549 72 h 的增殖能力较对照组明显增强（均P<0.01）,培养48 h 后与对照组相比,转染MAGE-A11 的3 种细胞划痕出现明显愈合（P<0.05 或P<0.01）,穿膜数较对照组明显增多（均P<0.01）。结论：在MCF-7、MDA-MB-231 和BT-549 三种乳腺癌细胞中筛查到涉及蛋白泛素化、细胞增殖和凋亡、肿瘤侵袭和迁移等生物功能众多的表达差异基因,对其中10 种典型差异基因从数量和功能两方面进行验证,并得到初步确认。     

miR-124 通过靶向BECN1 基因调控细胞自噬抑制食管癌KYSE170 细胞的侵袭和迁移

目的：探讨miR-124 通过调控细胞自噬对食管癌KYSE170 细胞侵袭和迁移能力的影响。方法：食管癌KYSE170 细胞转染miR-124 mimic,Transwell 实验检测细胞侵袭和迁移能力的变化,双荧光素酶报告基因验证miR-124 对BECN1(Beclin1)基因的靶向调控作用,Western blotting 分析对BECN1、P62 及LC3 蛋白表达水平的影响。向KYSE170 细胞中转染BECN1 siRNA沉默BECN1 的表达,Transwell 法检测细胞侵袭及迁移能力的变化,Western blotting 检测BECN1、P62 及LC3 蛋白的表达。将miR-124 mimic 与BECN1 过表达质粒共转染至KYSE170 细胞,Transwell 实验检测细胞侵袭及迁移能力的变化,Western blotting 检测自噬相关基因表达的变化。结果：转染miR-124 mimic 后,KYSE170 细胞的侵袭和迁移能力下降(P<0.05),BECN1 蛋白及荧光素酶报告基因活性均明显下调(均P<0.01),自噬相关蛋白P62 表达增高,LC3 表达水平明显降低(均P<0.01)。沉默BECN1 表达抑制食管癌细胞侵袭及迁移(P<0.01),而过表达BECN1 使miR-124 mimic 对KYSE170 细胞自噬、侵袭和迁移能力的抑制作用明显减弱(P<0.01),自噬相关蛋白P62 表达降低、LC3 蛋白表达水平明显升高(均P<0.01)。结论：miR-124 能够抑制食管癌细胞侵袭及迁移能力,其机制可能与靶向调控自噬相关基因BECN1 的表达影响细胞自噬有关。     

肺癌组织样本和血液样本EGFR基因检测对比研究

目的：研究肺腺癌患者不同样本EGFR基因检测结果的异同,以更精准地反映患者体内EGFR突变情况。方法：收集2016年7月—2017年12月收治的Ⅲ～Ⅳ期经病理确诊为肺腺癌患者175例,175例均有血浆样本,其中119例同时有活检组织样本,12例同时有胸水沉渣细胞样本。采用突变扩增系统(ARMS)-聚合酶链式反应(PCR)方法对收集到的活检组织样本、胸水沉渣细胞样本和血液样本进行EGFR基因检测,分析不同类型样本间结果的差异,以及与患者临床病理指标的关系。结果：联合检测的EGFR基因突变总阳性率较单纯血液样本阳性率提高了8.6%,较单纯组织样本提高了3.1%。EGFR突变在不同的性别(χ²=3.451,P=0.045)、肿瘤直径(χ²=8.911,P=0.002)、T分期(χ²=17.567,P=0.000)、淋巴结转移(χ²=18.511,P=0.000)、转移站数(χ²=3.341,P=0.047)和远处转移(χ²=10.874,P=0.001)组间的差...     

免疫组织化学染色技术标记CK（AE1/AE3）在乳腺癌前哨淋巴结冰冻剩余组织中表达的意义

［摘要］ 目的探讨免疫组织化学染色CK（AE1/AE3）在乳腺癌患者前哨淋巴结中的表达情况对乳腺癌患者淋巴结转移分析的应用价值。 方法收集乳腺癌患者前哨淋巴结组织1 585枚,前哨淋巴结冰冻剩余组织经过规范化脱水、透明、石蜡包埋组织块、连续切片,做苏木精-伊红(hematoxylin-eosin staining, HE) 染色和免疫组织化学CK（AE1/AE3）标记。 结果1 585枚前哨淋巴结冰冻剩余组织经免疫组织化学染色CK（AE1/AE3）标记显示,有95枚发生淋巴结宏转移,36枚发生淋巴结微转移,有54枚发生孤立性肿瘤细胞（isolated tumour cell,ITC）转移;根据HE染色结果显示,冰冻报告为淋巴结可疑转移5例,经免疫组织化学染色CK（AE1/AE3）标记显示3例未发生转移。 结论在乳腺癌患者前哨淋巴结中进行免疫组织化学染色CK（AE1/AE3）标记,降低HE染色的假阳性率,有助于孤立性肿瘤细胞的检出,提高诊断淋巴结转移的准确率,为临床治疗方案的选取提供依据。     

组蛋白甲基转移酶EZH2基因在三阴性乳腺癌中的研究进展

表观遗传学改变是可遗传的改变，并且不引起DNA序列的变化，它与多种肿瘤的发生、发展及预后密切相关。组蛋白甲基化是重要的表观遗传学修饰之一，组蛋白甲基转移酶EZH2基因介导的组蛋白甲基化与三阴性乳腺癌有着密切的关系。BRCA1突变及甲基化是引起三阴性乳腺癌的主要原因之一。EZH2可以与BRCA1相互作用，影响乳腺癌的进展。因此，检测三阴性乳腺癌中EZH2的表达，对于预测患者预后及指导治疗具有重要意义。笔者就组蛋白甲基转移酶EZH2基因与三阴性乳腺癌的关系进行综述。     

贲门腺癌组织黑色素瘤相关抗原-A9和-A11表达临床意义研究

目的 黑色素瘤相关抗原(melanoma antigen,MAGE)在肿瘤的发生发展中起重要作用,而MAGE-A9和MAGE-A11在贲门腺癌组织中表达与临床病理学特征之间的关系仍不清楚.本研究旨在探讨MAGE-A9和MAGE-A11在贲门腺癌组织中的表达,分析其与贲门腺癌患者临床病理学特征及其预后的关系.方法 选取河北医科大学第四医院2010-09-15-2010-11-15住院手术切除的贲门腺癌组织及距离癌组织边缘＞5 cm且外观正常的相应癌旁组织标本各60例,同时选取5例该院同期前列腺癌住院患者术后的睾丸组织作为阳性对照.应用免疫组织化学法检测贲门腺癌组织及相应癌旁组织中MAGE-A9和MAGE-A11蛋白的表达.结果 贲门腺癌组织中MAGE-A9和MAGE-A11蛋白的阳性表达率分别为40.0％(24/60)和51.7％(31/60),而相应的癌旁组织未发现MAGE-A9和MAGE-A11蛋白的表达.MAGE-A9蛋白表达与贲门腺癌患者的性别(x2=0.062,P=0.803)、年龄(x2=0.179,P=0.673)、临床分期(x2=2.791,P=0.248)、肿瘤大小(x2=0.014,P=0.993)和淋巴转移(x2=0.128,P=0.721)均无相关性,但与组织学分级相关(x2=10.437,P=0.005).MAGE-A11蛋白表达与贲门腺癌患者的性别(x2=0.020,P=0.887)、年龄(x2=2.530,P=0.190)、肿瘤大小(x2=2.550,P=0.279)和淋巴转移(x2=2.550,P=0.110)均无相关性,但与临床分期(x2=15.095,P=0.001)和组织学分级(x2=13.424,P=0.001)呈正相关.Log-Rank检验结果显示,MAGE-A9和MAGE-A11蛋白表达阳性的贲门腺癌患者的生存期均显著低于其表达阴性的患者,x2值分别为5.317和6.082,P值分别为0.021和0.014.Cox多因素分析提示,MAGE-A9蛋白表达(HR=3.304,P=0.015)、MAGE-A11蛋白表达(HR=2.933,P=0.006)、组织学分级(HR=2.018,P=0.034)及临床分期(HR=2.532,P=0.004)可作为整体生存的独立预后因素.结论 MAGE-A9和MAGE-A11蛋白是贲门腺癌的特异性抗原.MAGE-A9和MAGE-A11蛋白可作为贲门腺癌预后不良的预测指标.     

黑色素瘤相关抗原A基因家族在食管癌患者外周血中的表达及其临床意义

目的：探讨黑色素瘤相关抗原A家族（melanoma antigen A,MAGE-As）在食管癌患者外周血中的表达,分析其与食管癌患者临床病理学指标及预后的关系。方法：采用多重巢式PCR（multiplex semi-nested PCR）法检测153 例食管癌患者和30 例健康人外周血中MAGE-As mRNA 表达水平,并利用酶切的方法鉴定该家族成员MAGE-A1、A2、A3、A4和A6 的表达情况。结果：MAGE-As 在食管癌患者外周血中阳性表达率为19.61%（30/153）,MAGE-A1、A2、A3、A4、A6 的阳性表达率分别为10.46%（16/153）、16.34%（25/153）、9.8%（15/153）、11.11%（17/153）和18.30%（28/153）。MAGE-As 阳性表达与临床分期、远处转移、淋巴结转移呈正相关（均P<0.05）,MAGE-As 及其亚型基因的阳性表达均与食管癌患者5 年生存率较差相关（均P<0.05）;MAGE-As 表达、肿瘤大小、淋巴结转移及远处转移可作为食管癌患者生存的独立预后因素（均P<0.01）。结论：MAGE-As在食管癌患者外周血中的表达与食管癌预后相关,有可能作为监测食管癌预后的重要指标。     

非小细胞肺癌组织中黑色素瘤相关抗原A家族部分成员的表达及其意义

目的:探讨黑色素瘤相关抗原(melanoma antigen,MAGE)-As在非小细胞肺癌(Non-small cell carcinoma,NSCLC)组织中的表达,并分析其与临床病理学特征和预后的关系.方法:选取河北医科大学第四医院2015年9月至2016年3月住院手术切除的NSCLC组织及相应癌旁组织标本90例,应用免疫组织化学法检测NSCLC组织及相应癌旁组织中MAGE-As蛋白的表达,分析MAGE-As蛋白表达与NSCLC临床病理指标之间的相关性;利用荧光原位杂交技术检测EGFR基因扩增和舡K基因重排情况,Spearman检验MAGE-A表达与EGFR扩增和ALK重排的关系;应用Kaplan-Meier方法对NSCLC患者是否阳性表达MAGE-As蛋白进行生存分析,利用Cox回归模型针对阳性表达MAGE-As及相关的临床病理资料进行单因素和多因素分析.结果:NSCLC组织中MAGE-As蛋白的阳性表达率明显高于癌旁组织(P＜0.05).MAGE-As蛋白的表达与患者的临床病理学特征、EGFR扩增和ALK重排均无关联(P＞0.05).MAGE-As蛋白表达阳性的NSCLC患者生存期显著低于其表达阴性患者(P＜0.05),而EGFR扩增和ALK重排与患者的整体生存率无关(P＞0.05).多因素分析结果显示,MAGE-As表达、临床分期和淋巴结转移是NSCLC患者较差预后的独立危险因素.结论:MAGE-As蛋白是NSCLC的相关抗原,MAGE-As蛋白可作为NSCLC患者预后不良的预测指标.     

EZH2和H3K27me3的表达对食管癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的:通过转染Zeste同源物增强子2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)过表达或者敲低载体,探讨EZH2和Lys27位点三甲基化组蛋白H3(histone H3 methylated Lys27,H3K27me3)对食管麟状细胞癌(esophageal squamous cell cancer,ESCC)细胞迁移和侵袭能力的影响.方法:应用实时荧光定量PCR、Western blotting法检测ESCC细胞株KYSE30、KYSE170、TE1、Eca109中EZH2 mRNA水平,以及ESCC细胞过表达或者敲低EZH2对H3 K27me3表达水平的影响.用划痕实验及Transwell侵袭实验分析过表达或者敲低EZH2后ESCC细胞的迁移侵袭能力.用实时荧光定量PCR法分析ESCC细胞过表达及敲低EZH2对MMPs mRNA水平的影响.结果:食管癌Eea109及TE1细胞中EZH2和H3K27me3 mRNA和蛋白水平明显高于KYSE30及KYSE170细胞(P＜0.05).过表达EZH2的食管癌KYSE30及KYSE170细胞H3K27me3蛋白的表达水平显著升高(P＜0.05),敲低EZH2后Eca109及TE1细胞H3 K27 me3蛋白的表达水平明显降低(P＜0.05).过表达EZH2后,KYSE30及KYSE170细胞的穿膜数目明显增多[(281.33±4.10)、(241.67 ±4.04) vs(132.00 ±4.00)、(105.33 ±3.51)个,均P＜0.05]、迁移距离明显增大[(63.6±1.2)、(62.5±2.5)vs (23.0±2.3)、(21.2±1.0) μm,P＜0.05].敲低EZH2后Eca109及TE1细胞的穿膜数目显著减少(均P＜0.05),转染shEZH2后Eca109及TE1细胞迁移的距离明显减小(均P＜0.05).结论:EZH2可增加靶基因启动子上组蛋白H3第27位赖氨酸的三甲基化,并增强ESCC细胞的迁移和侵袭能力.