真菌植物提取物体内抗小鼠S180作用及与环磷酰胺联合作用

目的研究真菌植物提取物AMH-D的体内抗肿瘤作用,与环磷酰胺是否具有联合作用以及联合作用的形式和强度,为抗癌药物的开发提供科研基础.方法昆明种小鼠右腋皮下接种S-180肿瘤细胞,随机分组后,第2天开始腹腔注射给药,隔天给药1次,第11天处死小鼠,剥离并称重肿瘤,以肿瘤重量作为分析评价指标.结果提取物AMH-D能显著抑制S-180的生长,在剂量为150 mg/kg时抑瘤率达50.45%,其肿瘤抑制作用呈现剂量-效应关系.AMH-D对小鼠体重增长没有明显的影响.AMH-D与环磷酰胺具有体内协同抗肿瘤作用.结论真菌植物提取物AMH-D具有体内抑制S-180肿瘤作用,并与临床抗癌药物环磷酰胺具有体内联合抗癌作用.     

转录因子sox4在宣威女性肺腺癌XWLC-05细胞生长和转移中的作用

目的:研究RNA干扰抑制宣威女性肺癌细胞XWLC-05中转录因子sox4的表达对细胞生长、侵袭和迁移能力的影响.方法:从不同类型肺癌细胞株中,通过实时荧光定量PCR法筛选出高表达sox4的宣威女性肺癌细胞XWLC-05作为研究细胞.将sox4-siRNA转染入XWLC-05细胞后,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测sox4表达水平的变化.分别采用MTS法、细胞划痕实验和Transwell细胞侵袭实验分析抑制sox4表达对XWLC-05细胞体外增殖、迁移和侵袭能力的影响.FCM评估抑制sox4表达对细胞凋亡和细胞周期的影响.结果:转染sox4-siRNA的实验组细胞在转染后24 h时与空白对照组和阴性对照组相比,sox4 mRNA及蛋白表达水平差异均无统计学意义(P＞0.05);转染后48 h和72 h时与空白对照组和阴性对照组相比,sox4 mRNA及蛋白表达水平明显降低(P＜0.05).转染sox4-siRNA的XWLC-05细胞的增殖活性与空白对照组和阴性对照组相比,差异均无统计学意义(P值分别为0.059和0.113),而其迁移能力和侵袭能力却明显低于空白对照组(P值均为0.000)和阴性对照组组(P值分别为0.023和0.000).转染sox4-siRNA的XWLC-05细胞的凋亡率明显高于空白对照组和阴性对照组(P值均为0.000),但sox4-siRNA转染组的细胞增殖指数与空白对照组和阴性对照组相比,差异均无统计学意义(P值分别为0.168和0.225).结论:转录因子sox4可能通过抑制凋亡并促进肿瘤细胞的迁移和侵袭能力,在宣威女性肺癌的生长和转移中发挥作用.     

赤星衣酸甲酯的抗癌作用及机制研究

目的探讨松萝Usnea diffracta中功效化合物赤星衣酸甲酯的体外抗癌活性及其作用机制。方法采用MTT法检测不同质量浓度的赤星衣酸甲酯对宣威肺癌XWLC-05细胞、肝癌HepG2细胞、乳腺癌MCF-7细胞的体外抗癌活性;以流式细胞技术分析赤星衣酸甲酯对HepG2细胞周期的调节作用;通过基因芯片技术分析赤星衣酸甲酯对MCF-7细胞基因表达的影响。结果赤星衣酸甲酯能够显著抑制XWLC-05、HepG2、MCF-7细胞的增殖,其体外抗癌作用具有明显的量效关系,对3株癌细胞的半数抑制浓度(IC_(50))分别为8.818、11.905、13.328μg/mL。赤星衣酸甲酯主要阻滞HepG2细胞于G_0/G_1期。基因芯片分析得到MCF-7细胞差异倍数大于1.5的mRNA有2 394个,其中1 605个下调,789个上调。结论赤星衣酸甲酯为首次从松萝中分离得到,且具有较强的抗癌活性,其作用机制可能与调节细胞周期和蛋白激酶信号通路有关。     

人舌鳞癌TCA8113细胞在不同温度下nm23-H_1基因的表达及其意义

目的:通过测定肿瘤细胞内nm23-H,基因的表达情况,探讨高温治癌与转移抑制基因nm23-H_1之间的关系,以期阐明高温抑制肿瘤侵袭及转移的机理。方法:将人舌鳞癌细胞株Tca-8113细胞分为37℃对照组和43℃实验组,43℃组又分为10、20、30和40min共4个时间亚组。经相应的温度和时间处理后,通过MTT法、免疫组织化学技术及RT-PCR等方法对细胞进行观察、分析,以研究加热后舌癌细胞的生物学行为及nm23-H_1表达量的改变。结果:加温能抑制Tca-8113细胞的增殖活性,在43℃随着加热时间的延长,细胞中nm23-H_1表达量增加,并且在加热30min时达到最高.而在加热40min时有所下降.此变化不随加热后培养时间的延长而改变。结论:高温治疗可能是通过增加细胞中转移抑制基因nm23-H_1表达量来抑制肿瘤细胞的侵袭、转移能力;43℃加热30min可能是临床治疗的理想位点。     

白花蛇舌草提取物对结肠癌细胞抑制作用的实验研究

目的探讨白花蛇舌草乙醇提取物对BALB/c小鼠CT-26结肠癌细胞株增殖的抑制作用.方法采用甲基噻唑蓝(MTT)法测定不同浓度白花蛇舌草乙醇提取物对CT-26细胞株的生长抑制作用,计算半数抑制浓度(IC50).结果在同一浓度下,白花蛇舌草乙醇提取物对CT-26细胞的抑制作用随着作用时间的延长而增强,0.08 mg/mL的白花蛇舌草乙醇提取物作用CT-26细胞24 h、48 h、72 h,细胞抑制率分别为(16.67±9.35)%,(34.66±9.23)%,(40.07±9.16)%.白花蛇舌草乙醇提取物作用24 h、48 h、72 h的IC50值分别为0.315,0.155,0.115.在同一作用时间内,白花蛇舌草乙醇提取物对CT-26细胞的抑制率随着药物浓度的增加而增加,在72 h内不同浓度药物(0.06 mg/mL,0.08 mg/mL,0.10 mg/mL,0.12 mg/mL,0.14 mg/mL,0.16 mg/mL,0.18 mg/mL,0.20 mg/mL)作用下,细胞抑制率分别为(35.46±3.59)%,(40.07±9.16)%,(40.77±6.92)%,(52.81±1.87)%,(54.22±2.35)%,(68.72±3.71)%,(70.04±8.03)%,(71.84±3.12)%.结论白花蛇舌草乙醇提取物可以抑制BALB/c小鼠CT-26结肠癌细胞株的增殖,其对CT-26细胞增殖的抑制作用呈现时效和量效的关系.     

白花蛇舌草提取物抗小鼠结直肠癌血管生成的实验研究

目的探讨白花蛇舌草乙醇提取物对小鼠结直肠癌血管生成的抑制作用.方法构建32只BALB/c小鼠皮下CT26结肠癌动物模型,随机分为4组,每组8只小鼠,分别为Ⅰ组:对照组生理盐水0.1 mL/(10 g.d),Ⅱ组:白花蛇舌草乙醇提取物90 mg/(kg.d),Ⅲ组:白花蛇舌草乙醇提取物180 mg/(kg.d),Ⅳ组:白花蛇舌草乙醇提取物360 mg/(kg.d).各组小鼠在接种CT-26结肠癌细胞后的第10天开始测量肿瘤的长径(mm)和短径(mm);接种后第12天开始采用灌胃给药法给药,连续给药10 d后停止给药,继续喂养观察至第32 d后处死小鼠,取肿瘤组织用免疫组化法检测微血管密度.结果Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组小鼠的肿瘤体积明显小于Ⅰ组,差异有统计学意义(P<0.05);Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组的肿瘤组织微血管密度分别为(7.83±2.87)、(5.32±1.27)、(1.77±0.70)、(1.87±0.68);Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组肿瘤组织血管数量明显少于Ⅰ组,差异有统计学意义(P<0.05).结论在一定剂量范围内,白花蛇舌草乙醇提取物对小鼠CT-26结肠癌有明显的抑瘤作用,其机理可能是通过抑制小鼠结肠癌血管生成而起到抗肿瘤的作用.     

Sox4表达抑制对宣威地区女性肺癌细胞凋亡影响及其机制的探讨

目的:研究靶向抑制sox4基因的表达对宣威地区女性肺癌细胞凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法:构建靶向抑制转录因子sox4的shRNA重组载体pGFP-V-RS-sox4shRNA并转染宣威地区女性肺癌细胞XWLC-05,以转染pGFP-V-RS-scramshRNA的XWLC-05细胞及亲本XWLC-05细胞作为对照,研究sox4表达抑制对Caspase-3表达、细胞形态、细胞周期和凋亡率等凋亡指标的影响.使用Caspase-3抑制剂z-VAD-FMK处理转染细胞,检测上述细胞凋亡指标.结果:成功构建了能高效抑制sox4基因表达的pGFP-V-RS-A-sox4shRNA重组载体；转染后48及72 h,实验组细胞sox4 mRNA表达水平分别为0.09±0.018及0.44±0.06,比转染后24 h降低了88％和40％,与同一时段中的阴性对照及空白对照组相比表达水平明显降低(P＜0.05),其中以转染后48 h的抑制最为明显,而Caspase-3 mRNA表达与阴性对照及空白对照组相比均明显升高(P＜0.05),以48 h升高最明显；空白对照组与阴性对照组间比较,转染48及72 h后sox4 mRNA(P=0.071；P=0.063)和Caspase-3 mRNA(P=0.103;P=0.229)的表达水平差异无统计学意义；抑制sox4基因的表达后细胞出现典型的凋亡形态学改变；流式细胞术(FCM)检测显示,转染干扰质粒后48 h,细胞出现明显的亚二倍体峰,实验组细胞的凋亡率平均为(34.8±3.37)％,显著高于阴性对照组(0.45±0.05)％及空白对照组(0.44±0.06)％,P均为0.000.经z-VAD-FMK阻断Caspase-3酶活性后,实验组细胞中活化的Caspase-3 (13.6±1.76)％显著低于阴性对照组(50.5±6.15)％,差异有统计学意义,P=0.000；实验组细胞的凋亡率(10.8±1.05)％也明显低于阴性对照组细胞(38.3±3.16)％,P=0.000.结论:抑制sox4的表达可促进宣威地区女性肺癌细胞凋亡；转录因子sox4可能通过抑制Caspase-3依赖的凋亡途径而促进宣威地区女性肺癌的发生发展.     

地衣活性化合物C11H12O5体外抗肿瘤作用

目的 研究地衣活性化合物C11H12O5对人乳腺癌细胞株MCF-7、人肝癌细胞株HepG2及人肺腺癌细胞株A-549的体外抗癌作用, 观察其体外抗癌的剂量-效应关系和时间-效应关系.方法 采用体外细胞培养方式, 以MTT法检测OD值, 计算不同处理浓度和处理时间下肿瘤细胞的增殖抑制率.结果 化合物C11H12O5在剂量2、4、8、16和32μg/m L时, 对人乳腺癌细胞株MCF-7的抑制率分别为14.19%、13.84%、28.90%、59.50%、80.29%, IC50为12.43μg/m L;对人肝癌细胞株HepG2的抑制率分别为3.89%、11.09%、21.66%、46.27%、66.69%, IC50为18.88μg/m L;人肺腺癌细胞株A-549的抑制率分别为14.13%、11.09%、45.98%、86.19%、99.02%, IC50为6.21μg/m L.结论 地衣活性化合物C11H12O5对人乳腺癌细胞株MCF-7、人肝癌细胞株HepG2、人肺腺癌细胞株A-549均有显著体外抗肿瘤作用, 存在明显的剂量-效应关系, 其中A-549对该化合物最敏感.对A-549体外抑制作用时间-效应关系不明显.