2-甲氧基雌二醇对恶性黑素瘤B16细胞株增殖与凋亡的影响北大核心CSCD

目的 探讨2-甲氧基雌二醇（2-ME）对小鼠恶性黑素瘤B16细胞增殖与凋亡的影响,并初步探讨其机制.方法 选用小鼠B16细胞进行体外培养,实验分为阴性对照组和药物处理组,药物处理组加入2-ME,使其终浓度分别为5、10、20、40 μmol/L,阴性对照组不加2-ME.作用不同时间后,倒置相差显微镜下观察细胞形态变化;根据磺酰罗丹明B方法测得的各组A490值绘制生长曲线;采用磺酰罗丹明B法检测黑素瘤细胞活性;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡;逆转录PCR和实时PCR法分析凋亡诱导基因（gadd45b）及原癌基因（c-myc）的表达情况.结果 重复测量的方差分析显示,5、10、20、40 μmol/L的2-ME作用于黑素瘤细胞不同时间后对其增殖的抑制作用差异有统计学意义（F=1170.94,P＜ 0.01）;上述浓度的2-ME作用24、48、72 h对黑素瘤细胞增殖的抑制作用差异亦有统计学意义（F=1843.04,P＜ 0.01）;药物浓度和培养时间存在交互作用（F=272.79,P＜ 0.01）.10、20、40μmol/L 2-ME作用48 h后,B16细胞的凋亡率分别上升至（4.13±1.12）％、（11.25±2.38）％、（19.46±2.9）％,与阴性对照组[（0.23±0.5）％]相比,差异均有统计学意义（P＜0.01）;细胞出现G0/G1期阻滞,对照组细胞、10、20、40 μmol/L 2-ME处理组细胞G0/G1期比例分别为（44.1±3.4）％、（59.5±5.6）％、（63.4±8.2）％、（70.8±4.4）％,且随着浓度的增加,G0/G1期细胞明显增加,各处理组及对照组间比较,G0/G1期细胞比例差异有统计学意义（F=13.56,P＜ 0.05）.与阴性对照组相比,20 μmol/L和40 μmol/L 2-ME作用24 h可升高gadd45b的表达（均P＜ 0.01）,10、20、40μmol/L 2-ME均可降低c-myc基因的表达,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.结论 2-ME在体外能够抑制小鼠恶性黑素瘤B16细胞的增殖,能够使c-myc基因的表达降低,使gadd45b基因的表达升高.     

基因可变剪接在癌症发生和治疗中的研究进展

［摘要］ 可变剪接指从单个基因产生多种mRNA同种型，是转录后调控的重要方式之一。可变剪接不仅影响人体正常生长发育过程，而且在包括癌症在内的多种疾病发生发展中扮演重要角色。癌组织的剪接变化通常是全局的而不是基因特异性的，异常的剪接模式控制癌症的主要特征。遗传、表观遗传、剪接因子网络差异表达及选择性转录起始或终止等多种途径巩固了特定促癌或抑癌同种型的优势表达，进而影响癌症进程。此外，近年来研究，证明呈组织或阶段特异性表达的剪接同种型有作为癌症生物标志物及治疗靶标的潜能。本文通过全局剪接变化影响肿瘤进展、可变剪接影响癌症进展的途径及可变剪接提示癌症监控和治疗新策略3 个方面进行综述。     

胃癌组织TGF-β对miR-200c/141表达影响的研究

目的 TGF-β能够诱导肿瘤细胞发生上皮间质转化,促进肿瘤发生侵袭转移.miR-200c/141能够抑制上皮间质转化的发生.但TGF-β在胃癌中的表达情况及其对miR-200c/141表达影响尚不清楚.本研究旨在探讨胃癌组织中TGF-β表达水平与胃癌患者临床病理特征的关系,及对miR-200c和miR-141表达影响.方法 收集河北医科大学第四医院普外科2012-05-01-2013-01-01胃癌根治性手术切除标本64例,采用qRT-PCR技术检测TGF-β、miR-200c及miR-141在胃癌组织和配对癌旁非癌组织中的表达.分析TGF-β表达水平与胃癌患者临床病理特征的关系及与miR-200c和miR-141水平的相关性.TGF-β处理胃癌细胞株SGC-7901,观察其对miR-200c和miR-141表达的影响.结果 TGF-β在胃癌组织中的表达上调率为66.67%,其在胃癌组织中的表达显著高于癌旁非癌组织[Median,Interquartile Range(2.50,2.43:0.84,0.42);P=0.005].miR-200a、miR-200b、miR-429、miR-200c和miR-141在胃癌组织中的表达下调率分别为53.13%、48.44%、50.00%、78.13%和76.19.miR-200c和miR-141在胃癌组织中的表达显著低于癌旁非癌组织,均P<0.001.miR-200c和miR-141的表达存在正相关关系,r=0.840,P<0.001.TGF-β表达水平与miR-200c和miR-141的表达水平呈显著负相关关系,均P<0.001.TGF-β能够诱导胃癌细胞株SGC-7901中miR-200c和miR-141表达显著降低.TGF-β的表达水平与淋巴结转移情况及脉管瘤栓情况存在显著相关性,与患者性别、年龄、组织学分级、TNM分期、肿瘤侵袭深度和肿瘤远处转移情况无相关性,均P>0.05.     

含Hp特异性抗体羊奶2种检测方法的比较及初步临床效果

［摘要］ 目的比较含抗Hp特异性抗体羊奶的2种检测方法,并初步观察抗体羊奶的临床效果。 方法用国际标准菌株ATCC26695及ATCC26695、SS1混合菌液制备2种含抗Hp特异性抗体的羊奶,分别用双相免疫扩散试验及酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA) 法检测羊奶中抗Hp特异性抗体含量,并比较二者检测效果;30名受试者按照随机抽样法分为试验组和对照组,试验组每天饮用抗体羊奶,对照组饮用普通羊奶,连续饮用30 d,用14C尿素呼气试验(14C urea breath test,14C-UBT) 评估效果。 结果2种方法检测结果均证实了抗体羊奶中抗Hp特异性抗体的存在,ELISA结果显示,2种抗体羊奶中抗Hp特异性抗体含量高于对照孔,差异有统计学意义(P＜0.05),且随着稀释倍数增大,抗体含量逐渐降低;2种抗体羊奶间抗体含量差异无统计学意义(P＞0.05)。初步临床试验证明试验组经服用抗体羊奶后有效率为66.6%,与服用前比较差异有统计学意义(P＜0.05)。 结论2种检测方法均可较好地反映抗体羊奶中抗Hp特异性抗体存在,ELISA法简便、快速,能够更为精确地定量检测抗体含量,所获得的结果更为可靠。临床试验表明抗体羊奶能够有效降低患者14C-UBT数值,具有良好的临床应用前景。     

miR-25-3p在40例子宫内膜腺癌组织中的表达及对KLE细胞生物学功能的影响

目的 探讨miR-25-3p在子宫内膜腺癌组织中的表达及其对KLE细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响。 方法 选取2018年1月至12月在河北医科大学第四医院妇科行手术治疗的子宫内膜腺癌患者40例,采用Real-time PCR方法检测癌和癌旁正常组织中miR-25-3p的表达水平;应用细胞转染技术将miR-25-3p模拟物转染至子宫内膜腺癌细胞KLE中,转染后分为过表达组和对照组;采用Real-time PCR方法检测转染后两组KLE细胞中miR-25-3p的表达水平;分别应用流式细胞术、Transwell试验、基质胶试验及流式细胞Annexin v-PI 双染实验检测两组细胞的增殖、迁移、侵袭及凋亡能力。 结果 miR-25-3p在40例子宫内膜腺癌和癌旁组织中的相对表达量分别为0.38±0.91、0.17±0.51,癌组织表达高于癌旁组织,差异有统计学意义(t=12.28,P=0.003);增殖实验检测结果显示,两组增殖指数分别为(59.41±0.78)%、(40.69±0.78)%,过表达组高于对照组,差异有统计学意义(各期两组间均值差异均有统计学意义: G0G1 期t=12.504, P<0.001; S 期t=6.902, P=0.020; G2M期t=4.203, P=0.014;PI期t=12.475,P<0.001);迁移实验检测结果显示,两组迁移细胞个数分别为(28.54±1.73)个、(19.21±1.62)个,过表达组高于对照组,差异有统计学意义(t=8.404, P=0.001);侵袭实验检测结果显示,两组的侵袭细胞个数分别为(36.66±1.53)个、(17.66±1.53)个,过表达组高于对照组,差异有统计学意义(t=15.234, P<0.001);凋亡检测结果显示,两组的细胞凋亡率分别为(2.75±0.58)%、(4.81±0.31)%, 过表达组低于对照组,差异有统计学意义(t=5.443, P=0.006)。 结论 miR-25-3p在子宫内膜腺癌组织中呈高表达。过表达miR-25-3p可能促进子宫内膜腺癌细胞KLE的增殖、迁移和侵袭,抑制细胞的凋亡。     

裙带菜多糖对人外周血单个核细胞的免疫活性作用

目的 观察裙带菜多糖对人外周血单个核细胞(PBMC)增殖、淋巴细胞亚群的影响,探讨其免疫调节机制.方法 采用逐步分离法对裙带菜多糖进行分离与纯化.Ficoll密度梯度离心法分离PBMC,随机分为观察组和对照组,观察组分别加入0.5、5、20、100、500 μg/mL裙带菜多糖,对照组仅加入PBS.采用MTT法分析裙带菜多糖对人PBMC体外增殖作用的影响;用流式细胞术检测淋巴细胞亚群的变化.结果 观察组各浓度PBMC增殖活性明显高于对照组(P均＜0.01),且随着浓度的增加增殖反应明显增强.观察组CD8+及CD16+ CD56+细胞比例较对照组明显增加,并呈浓度依赖性(P均＜0.01).结论 裙带菜多糖可通过刺激人PBMC增殖促进CD8+、NK细胞增殖,从而发挥细胞免疫调节作用.     

木鳖子醇提物对黑素瘤B16细胞增殖的抑制及其可能机制

目的：观察木鳖子醇提物(ethanol extract from cochinchina momordica seed, CMSEE)对黑素瘤B16细胞增殖的影响，初步探讨其作用机制。方法：MTT法和克隆集落形成实验检测CMSEE对小鼠黑素瘤B16细胞生长的影响，倒置相差显微镜和瑞氏吉姆萨染色观察细胞形态学变化，流式细胞技术（FCM）检测B16细胞周期分布和凋亡率的变化，比色法检测CMSEE对B16细胞黑素生成和酪氨酸酶活性的影响，RTPCR法检测CMSEE对B16细胞中Cmyc、〖STBX〗P38和Tyr〖STBZ〗基因表达的影响。结果：CMSEE（10～100 mg/L）明显抑制B16细胞的增殖(P<0.05, P<0.01)，呈质量浓度和时间依赖性。10～40 mg/L CMSEE处理后，B16细胞呈现典型的细胞分化形态，细胞周期阻滞于G0/G1期，黑素产生和酪氨酸酶活性增加(P<0.01)，Cmyc基因表达下调，〖STBX〗P38和Tyr〖STBZ〗基因表达上调；100 mg/L CMSEE处理后的B16细胞呈现凋亡形态变化\[凋亡率达(37.2±329)%\]，黑素生成减少(P<0.05)，酪氨酸酶活性降低(P<0.01)。结论：CMSEE体外对B16细胞增殖有明显的抑制作用，其机制与其低剂量诱导分化和高剂量诱导凋亡有关。     

脾酪氨酸激酶与食管鳞状细胞癌的关系

目的：探讨脾酪氨酸激酶（spleen tyrosine kinase,Syk）在食管鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义。方法：采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测30例食管鳞癌组织、27例食管鳞癌癌旁组织及30例相对正常食管黏膜组织中Syk mRNA的表达;应用免疫组化技术检测39例食管鳞癌组织、27例食管鳞癌癌旁组织及38例相对正常食管黏膜组织中Syk蛋白的表达并分析其与临床病理学指标间的关系。结果：食管鳞癌组织中Syk mRNA表达高于癌旁组织和正常食管黏膜组织,但差异无统计学意义（P〉0.05）。Syk蛋白在食管鳞癌组织中的阳性率（34/39,87.2%）明显高于食管鳞癌癌旁组织（18/27,66.7%）和正常食管黏膜组织（26/38,68.4%）（P〈0.05）。Syk蛋白表达与食管鳞癌患者年龄、性别、肿瘤大小、临床分期均无明显相关关系（P均〉0.05）。结论：Syk mRNA和蛋白在食管鳞癌组织中表达增高,但Syk蛋白表达与临床病理学指标无相关关系。     

木鳖子提取物体外抗肿瘤活性的初步研究

目的：观察木鳖子（cochinchina momordica seed，CMS）水提物（water extract of CMS，CMSWE）和醇提物（ethanol extractof CMS，CMSEE）对肿瘤细胞生长的影响，探讨CMSEE的抗肿瘤机制。方法：制备CMSWE和CMSEE。MTT法检测CMSWE和CMSEE对人黑色素瘤B16、肺癌细胞A549、乳腺癌细胞MDA-MB-231、食管癌细胞TE-13，以及正常人外周血淋巴细胞（PBMC）生长的影响，计算细胞生长抑制率；光镜下观察细胞形态变化；瑞氏-吉姆萨染色观察B16细胞凋亡形态学变化。流式细胞技术（FCM）检测B16细胞凋亡率和细胞周期分布。结果：CMSEE（25—300mg／L）对B16、A549、MDA-MB231和TE-13细胞增殖均有明显的抑制作用（P〈0．01），对PBMC的增殖没有明显影响。CMSWE（25～300mg／L）对A549、TE-13、MDA-MB231、PBMC的生长没有明显影响，仅对B16细胞的增殖有较弱的抑制作用，且各浓度组抑制率均小于相同浓度的CMSEE（P〈0．01）。经CMSEE处理后，B16细胞显示典型的凋亡形态变化，凋亡率明显增高（P〈0．01），G0／G1期细胞明显增加，S期、G／M期细胞减少（P〈0．01）。结论：CMSEE体外对人肿瘤细胞增殖有明显的抑制作用，其抗肿瘤机制可能与阻滞肿瘤细胞周期和诱导凋亡有关。     

非小细胞肺癌组织中高表达的miR-1269 对肺癌细胞A549 生物学行为的影响

目的:探讨miR-1269 在非小细胞肺癌（non-small-cell lung cancer, NSCLC）组织中的表达和对人NSCLC A549 细胞生物学特性的影响及其作用机制。方法：选取2017 年1 月至2018 年1 月在河北医科大学第四医院胸外科进行首次手术切除的34例新鲜NSCLC 癌组织及相应的癌旁组织,应用qRT-PCR 检测NSCLC 癌组织及相应的癌旁组织中miR-1269 的表达水平。将miR-1269 mimics 和mimics NC转染至A549 细胞后,应用MTS实验、细胞划痕实验和Transwell 实验检测A549 细胞增殖、迁移和侵袭能力,流式细胞术检测其细胞周期的变化。生物信息学软件预测miR-1269 的靶基因,并通过Western blotting 和双荧光素酶报告基因实验验证miR-1269 对靶基因的调控作用。采用Western blotting 检测已转染的A549 细胞的细胞周期依赖性激酶抑制剂p21、细胞周期蛋白D2 以及上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关蛋白ZEB2 和E-cadherin 的表达情况。结果：NSCLC癌组织中miR-1269 的表达水平显著高于对应的癌旁组织（2.81±2.27 vs 1.61±1.36,P<0.05）。miR-1269 mimics 转染组A549 细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著高于空白对照组和mimics NC转染组（均P<0.01）。转染miR-1269-mimics 的A549 细胞S期细胞比例明显高于mimics NC转染组[ （46.54±1.57）% vs（23.32±3.15）%,P<0.01]。miR-1269 可与FOXO1 基因3’端非翻译区的结合位点相结合,且过表达miR-1269 后,A549 细胞中FOXO1 的表达水平及荧光素酶报告基因的活性均明显降低（均P<0.01）。miR-1269 mimics 转染组A549 细胞中p21、E-cadherin 蛋白表达水平降低（均P<0.05）,而CyclinD2、ZEB2 蛋白表达水平升高（均P<0.05）。结论：miR-1269 在NSCLC组织中表达上调,并且能够促进A549 细胞的增殖、迁移、侵袭能力和影响细胞周期进程;其作用机制可能与靶向调控抑癌基因FOXO1 的表达有关。