重组人纤维蛋白片段对CIK 细胞增殖的影响及其可能机制研究*

目的:探讨重组人纤维蛋白片段（RetroNectin）对CIK 细胞的增殖作用及其可能机制。方法:提取患者外周血单个核细胞,Ⅰ组细胞培养于前一天用RetroNectin 和CD3mAb 包被好的培养瓶中,Ⅱ组培养于普通培养瓶中。第2 天起按照常规CIK 细胞培养方法分别培养,第14天收获。细胞计数法测定CIK 细胞增殖;LDH 法测定细胞杀伤活性;流式细胞术分析细胞表型并检测细胞周期;Annexin V/PI法检测细胞凋亡;封闭CD49d+及CD49e+后细胞计数法测定CIK 细胞增殖;流式细胞术分析细胞表型;Western blot检测Vav1 蛋白表达水平。结果:RetroNectin 对CIK 细胞增殖有明显促进作用（P<0.05）,经RetroNectin 包被后可以增加CIK 细胞中CD25+T 细胞比例（P<0.05）,对于结肠癌细胞系HCT-8 RN-CIK较CIK 显示出了更强的杀伤活性（P<0.05）,而对于白血病细胞系K562 两组细胞杀伤活性无显著性差异（P>0.05）。 RetroNectin 可以将CIK 细胞阻滞于G1 期而促进增殖,同时抵抗高活化细胞的凋亡。RetroNectin 对CIK 细胞中的CD49d+CD49e+T 细胞亚群有明显上调作用（P<0.05）。 拮抗CD49d/CD49e 后RetroNectin对CIK 细胞增殖作用消失（P>0.05）,对CD25+T 细胞的上调作用也消失。Western blot结果显示Vav1 蛋白表达与CD25+T 细胞变化相一致。结论:重组人纤维蛋白片段（RetroNectin）能够通过调控细胞周期,抵抗凋亡而促进CIK 细胞增殖,其机制可能为RetroNectin 与CIK 细胞上VLA-4 及VLA-5 两个位点结合进而通过Vav1 蛋白作为第二信号活化T 细胞。      

HLA半相合外周血活化干细胞治疗晚期实体瘤的疗效

目的：观察HLA半相合外周血活化干细胞（HLA haploidentical peripheral blood stem cells,haploPBSCs）对晚期难治性实体瘤患者的临床抗肿瘤疗效以及不良反应。方法：入组42例全部为2004年10月至2007年10月天津医科大学肿瘤医院生物治疗科收治的晚期难治性恶性肿瘤患者（所有入组患者均知情同意,试验工作经医院伦理委员会批准）,其中卵巢癌12例,肾癌9例,肺癌8例,乳腺癌8例,结肠癌2例,胃癌2例,恶性黑素瘤1例。供者为患者健康直系亲属,进行haploPBSCs的动员、采集和体外rhIL2活化。经HLA半相合外周血干细胞治疗后,分别通过CT/PETCT检查、RESIST标准、KPS评分、临床症状缓解率等指标来评估HLA半相合外周血干细胞的临床疗效及不良反应情况。结果：42例患者接受1个疗程治疗后,全体患者中位无进展生存期（PFS）为6个月,临床获益率（CR+PR+SD）为73.8%;患者生活质量总获益率为76.2%,生活质量评分（KPS）较治疗前平均提高20分（0～30分）。其中,KIR不相合方向为GVH组的临床获益率、无进展生存期、生活质量总获益率均显著优于HVG(或相合)组\[94.1% vs 60.0%,（13.4±1.3）vs（8.0±0.9）个月,89.5% vs 65.2%,均P<005\];供受者关系为母子/女组的治疗有效率、患者生存期和生活质量均显著优于父子/女组（均P<0.05）;肾癌和卵巢癌的临床获益率分别为90.0%和81.8%,相对于其他类肿瘤类型高,在治疗反应性和敏感性上可能占优势。结论：HLA半相合外周血活化干细胞治疗后,机体产生非特异性的抗肿瘤作用,对改善患者症状和提高生活质量有显著效果。