丹参酮生物合成相关SmERF108转录因子的鉴定及其靶基因分析＊

目的 鉴定与丹参酮合成相关转录因子AP2/ERF家族中SmERF108转录因子，并分析转录因子SmERF108的靶基因。方法 利用生物信息学在线分析平台如NCBI、PFAM等分析SmERF108的序列特征；MEGA-X软件用于构建SmERF108与不同功能转录因子的系统进化树；拟南芥原生质体转化法鉴定SmERF108蛋白的亚细胞定位；通过实时荧光定量PCR（Real-time qPCR）对SmERF108基因在丹参不同器官和组织差异表达进行检测；利用酵母体系对SmERF108的转录激活活性进行探究并用酵母单杂技术确定其靶基因。结果 SmERF108具有典型的AP2/ERF保守结构域，属于ERF-B3亚组，系统进化树和保守基序分析显示SmERF108与丹参中SmERF128、青蒿中AaERF2亲缘关系较近且保守基序分布一致；亚细胞定位显示SmERF108蛋白定位于细胞核；SmERF108基因在周皮中表达最高，且呈现周皮（R1）>韧皮部（R2）>木质部（R3）的规律；酵母自激活验证SmERF108具有转录激活活性，同时酵母单杂交确认其能与关键酶基因SmCPS1启动子结合。结论 鉴定到丹参中一个新转录因子SmERF108，生物信息学分析及差异表达分析预测与丹参酮合成相关，分子互作初步证实靶基因为SmCPS1二萜环化酶。     

丹参F3'5'H基因克隆及其序列分析

目的:为了验证丹参类黄酮-3′,5′-羟基化酶(Flavonoid 3′,5′-hydroxylase,F3′5′H)基因与丹参花色表型的相关性,本研究克隆并分析了紫花丹参99-3株系和一些白花丹参中的F3′5′H基因。方法:本研究通过提取紫花丹参和白花丹参中的总RNA,再将其反转录得到cDNA,以此cDNA为模板,利用PCR方法扩增获得F3′5′H基因全长序列。再利用生物信息学分析方法,分析了该基因编码蛋白质的理化性状、结构域、系统进化等特点,并预测了该蛋白质的亚细胞定位、跨膜区等;利用实时定量PCR方法检测了该基因的表达特异性;利用毛状根遗传转化方法获得了该基因的过表达阳性毛状根株系。结果:F3′5′H基因全长1551 bp,编码516个氨基酸,相对分子质量为57.4 kDa。该基因在丹参花中高丰度表达。在42份(紫花25份;白花17份)丹参样品中发现一个单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphisms,SNP)位点在紫花和白花丹参中呈现与花色相关的稳定变化。系统发育分析表明丹参F3′5′H与美女樱的F3′5′H具有较高序列同源性。获得了过表达F3′5′H的毛状根株系。结论:本研究在丹参中克隆到F3′5′H基因,对其序列进行了分析,为进一步研究丹参F3′5′H基因的功能奠定基础。     

利用聚多巴胺制备丹参注射液缓释制剂的研究

目的:利用聚多巴胺(PDA)对丹参注射液中多成分进行负载,构建丹参注射液(SMI)缓释制剂(PDA-SMI)。方法:建立丹参注射液的原儿茶醛、迷迭香酸和丹酚酸B3种成分的分析方法并进行含量测定;制备PDA,在pH值2.5的条件下对SMI进行负载,制备PDA-SMI;对PDA-SMI体外释放行为进行考察。结果:SMI中原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B的浓度分别为0.344、0.214、0.262 mg/mL;PDA-SMI对原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B的载药量分别为8.59%,15.90%和20.57%;PDA-SMI中原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B体外累计释放率分别为84.05%,77.57%和63.12%。结论:PDA可以负载SMI的多种成分,载药量较高,并具有良好的缓释效应。     

丹参干燥前后游离型和结合型酚酸的比较研究

丹参干燥前后,新鲜和干燥丹参中酚酸成分含量有显著性差异,即在干燥过程中随脱水增加,丹参酚酸含量显著增加。为探究丹参干燥前后游离型和结合型酚酸含量的差异及转化,该实验对丹参酚酸水解方法、水解产物、水解规律等进行研究,采用UPLC测定丹参结合型酚酸4种主要水解产物丹参素、咖啡酸二聚体(SMND-309)、咖啡酸、甘西鼠尾草酸甲(原紫草酸)以及丹参中3种主要游离酚酸成分(迷迭香酸、紫草酸和丹酚酸B)的含量。结果显示,丹参酚酸的碱水解效果显著优于酸水解,优选的碱水解条件为用含有1%抗坏血酸的2 mol·L-1氢氧化钠溶液于70℃水解4 h;游离酚酸和结合酚酸的水解产物相同;新鲜丹参中游离酚酸含量较低,结合酚酸含量较高,而干燥丹参却相反。提示丹参生长过程中已积累储存了大量的结合型酚酸,主要以酯键与细胞壁多糖结合形成了不溶性酚酸,常规方法不易检出,在干燥脱水过程中,结合型酚酸或在相关酶的作用下转化生成大量的游离酚酸。     

丹参川芎嗪治疗冠心病心绞痛的临床疗效观察

目的:探讨丹参川芎嗪治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心病)心绞痛的疗效。方法:选择住院治疗的冠心病心绞痛患者120例,随机分为观察组60例及对照组60例。对照组接受临床常规治疗,观察组在常规治疗基础上加入丹参川芎嗪治疗,均治疗2周。治疗2周后评估两组患者的临床症状变化情况,应用彩色多普勒超声诊断仪检测心功能参数,抽取外周静脉血检测一氧化氮(Nitric Oxide,NO)、组织型纤溶酶原激活物抑制剂-1(Plasminogen Activator Inhibitor-1,PAI-1)含量。结果:治疗2周后,两组的临床症状、心功能参数、NO、PAI-1含量均较治疗前优化(P<0.05)。其中观察组的心绞痛发作次数、单次发作持续时间少于对照组,疼痛程度轻于对照组(P<0.05);超声心电图参数左室舒张末期容积(EDV)、收缩末期容积(ESV)水平低于对照组,左室射血分数(LVEF)水平高于对照组(P<0.05);观察组PAI-1水平下降,NO水平升高。结论:丹参川芎嗪注射液治疗冠心病心绞痛的疗效确切,在缓解心绞痛症状、改善心功能、微循环方面具有优势。     

丹参治疗微循环障碍作用机制的“成分-靶点-通路”多层次互作网络模型研究

目的基于网络药理学分析丹参治疗微循环障碍的分子生物学机制。方法借助TCMSP、PubChem Search、Genecards数据库和Swiss target prediction在线工具得到丹参的活性成分治疗微循环障碍的作用靶标,利用Cytoscape 3.3.0软件构建丹参活性成分-微循环障碍作用靶标网络,通过STRING数据库构建靶蛋白相互作用(PPI)网络,通过生物学信息注释数据库(DAVID)进行基因本体(GO)生物学过程和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果从丹参中共筛选出治疗微循环障碍的65个相关活性成分,并发现微循环障碍相关的9个关键靶点。GO和KEGG通路富集分析发现,丹参治疗微循环障碍可能与氧化还原、钙离子稳态等生物过程有关,能够调节血管内皮生长因子信号通路、神经突触信号传导、催产素信号通路、醛固酮-调节钠重吸收等信号通路。结论丹参治疗微循环障碍体现了多成分、多靶点、多途径的作用特点,为进一步开展丹参治疗微循环障碍作用机制研究提供了新的思路和方法。     

基于网络药理学及分子对接分析丹参黄芪配伍治疗冠心病和心绞痛的活性成分及作用机制

目的：从分子水平研究丹参黄芪配伍抗冠心病和心绞痛的分子机制。方法：采用中药系统药理学数据库和分析平台（Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology，TCMSP）获取丹参和黄芪活性成分，基于CTD （Comparative Toxicogenomics Database，比较毒物基因组学数据库）筛选冠心病和心绞痛的关键靶标。借助STRING软件对心绞痛和冠心病的靶标基因进行相互作用分析，基于分子对接（Sybyl2.1）对筛选所得的丹参、黄芪的活性成分与心绞痛及冠心病靶点进行分子对接验证。借助Cytoscape3.5.1构建"活性成分-靶点"网络模型。结果：丹参黄芪共筛选出61个活性成分，其中丹参44个，黄芪17个。筛选出冠心病靶标25个，心绞痛靶标7个，通过靶蛋白PPI网络分析，肿瘤坏死因子、基质金属蛋白酶-9、Toll样受体4、载脂蛋白E、脂肪酸转运蛋白、血管紧张素Ⅰ转化酶、基质金属蛋白酶-3、尿激酶为冠心病和心绞痛疾病的关键靶标蛋白。分子对接发现黄芪单味药、丹参单味药、黄芪丹参配伍用药可能通过调节尿激酶（PLAU）、载脂蛋白E （APOE）、血管紧张素I转化酶（ACE）发挥抗冠心病及心绞痛的作用。结论：从分子层面筛选丹参黄芪配伍治疗冠心病、心绞痛疾病的关键活性成分及靶点，为其配伍后实验研究和临床应用提供合理解释。     

不同氮源对丹参和藏丹参毛状根有效成分积累的影响

目的氮素是中药材有效成分积累的重要影响元素,为探讨不同氮源对丹参Salviamiltiorrhiza和藏丹参Salvia castanea毛状根生长和活性成分积累的影响。方法分别采用硝酸铵、水解乳蛋白、蛋白胨、牛肉浸膏、酪蛋白和酵母提取物6种氮源处理对丹参和藏丹参毛状根的影响,分析毛状根生长及活性成分积累的变化。结果硝酸铵最有利于2种丹参毛状根的生长。水解乳蛋白能够显著促进丹酚酸类成分的积累,与硝酸铵对照相比,丹参迷迭香酸和丹酚酸B含量分别提高了2.94倍和3.27倍,藏丹参二者含量分别提高了13.74倍和2.01倍。酵母提取物对2种丹参毛状根二氢丹参酮Ι和隐丹参酮积累的促进效果最为显著,水解乳蛋白能显著促进丹参根中丹参酮IIA的积累,牛肉浸膏则对藏丹参中丹参酮IIA积累的促进作用最为显著。结论硝酸铵是2种丹参毛状根生长的最佳氮源,水解乳蛋白是丹酚酸积累的最佳氮源,不同氮源对4种丹参酮的影响不一致,丹参和藏丹参对不同氮源的响应也不一致。该研究不仅对丹参毛状根规模化培养及活性成分工业化生产具有一定指导意义,也对藏丹参资源的开发利用提供了借鉴作用。     

Comparative pharmacokinetics and tissue distribution of cryptotanshinone,tanshinone IIA,dihydrotanshinone I,and tanshinone I after oral administration of pure tanshinones and liposoluble extract of Salvia miltiorrhiza to rats

Salvia miltiorrhiza is one of the most commonly used traditional Chinese medicines in the treatment of cardiovascular and cerebrovascular diseases. Cryptotanshinone (CTS), tanshinone IIA (Tan IIA), dihydrotanshinone I (diTan I), and tanshinone I (Tan I) are the main active compounds in the liposoluble extract of Salvia miltiorrhiza. The differences in the pharmacokinetic and tissue distribution behaviors of the four tanshinones after oral administration of the liposoluble extract of Salvia miltiorrhiza and pure compounds are not clear. This study aims to compare the pharmacokinetics and tissue distribution of the four tanshinones after oral administration of pure tanshinone monomers and the liposoluble extract of Salvia miltiorrhiza. An ultra-performance liquid chromatography–tandem mass spectrometry (UPLC–MS/MS) analysis method was developed for the determination of the four tanshinones. The results showed that the AUC and C_max of tanshinones in rats receiving the extract of Salvia miltiorrhiza were significantly increased compared with those receiving the pure tanshinones. In the tissue distribution experiments, the AUC of the four tanshinones in the extract was much greater than the AUC of the monomers in the lung, heart, kidney, liver, and brain, and the coexisting constituents particularly promoted the distribution of tanshinones into tissues that the drug cannot sufficiently penetrate. These findings suggested that the coexisting constituents in the liposoluble extract of Salvia miltiorrhiza play an important role in the alteration of plasma concentration and tissue distribution of the four tanshinones. Understanding these differences could be of significance for the development and application of Salvia miltiorrhiza extract and tanshinone components.     

冠心病心绞痛患者行丹参多酚酸盐治疗的效果

目的分析冠心病心绞痛患者采取丹参多酚酸盐治疗效果及安全影响。方法选取本院2017年7月-2018年6月接收的冠心病心绞痛患者72例为研究对象,随机分为两组,各36例,对照组行丹参注射液治疗方案,研究组则接受丹参多酚酸盐治疗方案,对比两组临床疗效及不良反应发生率。结果在治疗总有效率方面,对照组是72.22%,研究组是94.44%,研究组较对照组更高,差异有统计学意义(P<0.05);在不良反应发生率方面,对照组与研究组分别是8.33%和5.56%,研究组与对照组差异统计学无意义(P>0.05);研究组心绞痛发作次数较对照组更低,差异存在统计学意义(P<0.05);而运动诱发ST段压低1 mm时间、运动诱发心绞痛发作时间及总运动代谢量,对照组与研究组差异统计学无意义(P>0.05)。结论冠心病心绞痛疾病治疗期间,应用丹参多酚酸盐治疗方案,不仅可以减少冠心病心绞痛发作次数,同时有助于改善患者临床症状,促进治疗效果的提高,此外,具有较高的安全性。