PARP1对黑素瘤细胞克隆形成的影响及其作用机制

目的:探究聚二磷酸腺苷核糖多聚酶1［poly (ADP-ribose) polymerase 1,PARP1］对黑素瘤细胞克隆形成的影响及可能的作用机制。方法:在黑素瘤A2058细胞系中利用小干扰RNA干涉PARP1表达水平，利用平板克隆形成实验观察干涉PARP1对黑素瘤细胞克隆形成的影响。提取PARP1干涉片段及对照片段转染细胞的总RNA进行全基因组表达谱芯片检测。Realtime RT-PCR对部分差异性基因进行验证。应用DAVID数据库对差异性基因进行GO及KEGG通路富集分析。Realtime RT-PCR对富集分析结果中可疑靶基因进行验证。结果:干涉PARP1表达可显著抑制黑素瘤细胞克隆形成。全基因组芯片结果显示干涉PARP1表达可引起128个基因表达上调，77个基因表达下调。通过Realtime RT-PCR对部分差异表达基因进行验证，结果表明与芯片筛选结果一致。GO和KEGG富集分析结果显示PARP1调控的差异性表达基因在生物学功能及参与的信号通路中存在部分交集，即MAPK信号通路及其正向调控机制。双特异性磷酸酶5（DUSP5）作为MAPK通路中的抑制分子，Realtime RT-PCR证实干涉PARP1可促进其表达水平升高。结论:干涉PARP1可能通过促进DUSP5表达从而抑制MAPK信号通路活性，进而发挥抑制黑素瘤细胞克隆形成的作用。     

MiR-886-5p对宫颈鳞状上皮细胞克隆形成和宫颈癌细胞化学药物治疗的影响

目的探讨microRNA-886-5p(MiR-886-5p)对宫颈鳞状上皮细胞克隆形成及宫颈癌细胞化学药物治疗(以下简称化疗)的影响。方法应用基因芯片技术检测宫颈癌及其癌周组织microRNA的表达,筛选出MiR-886-5p在宫颈癌组织中高表达。生物信息系技术分析发现miRNA-886-5p靶向P53通路中多个基因的表达。用MiR-886-5p mimics和带有GFP标签的MiR-886-5p过表达载体稳定转染高危型人乳头瘤病毒(human papilomavirus,HPV16)阳性的永生化人宫颈鳞状上皮细胞H8细胞,应用Western blotting方法检测P53和P14的蛋白表达情况;应用平板克隆形成技术,观察对细胞克隆形成的影响。在宫颈癌Si Ha细胞中,加入化疗药物紫杉醇和VP16后,应用real time RT-PCR技术,检测MiR-886-5p的表达情况。结果过表达MiR-886-5p后,H8细胞的克隆形成率明显高于阴性对照组,并且降调P53通路中P14和P53蛋白的表达。加入化疗药紫杉醇和VP16后,Si Ha细胞中MiR-886-5p表达明显升高。结论 MiR-886-5p与宫颈鳞状细胞增生相关,它降调P14和P53两种蛋白的表达,且与宫颈癌细胞化疗抵抗相关。     

小剂量黛力新联合佐匹克隆治疗失眠症的观察

目的：：观察黛力新联合佐匹克隆治疗失眠症的疗效及不良反应。方法：选择80例失眠症患者随机分为2组,小剂量黛力新联合佐匹克隆组(A 组)和单用佐匹克隆组(B 组),每组各40例,治疗4周。用匹兹堡睡眠质量指数量表给予睡眠质量评估,评价睡眠状态及治疗满意度。观察药物的不良反应。结果：A组有效率为95.0%,B组有效率为90.0%,2组比较无显著性差异。但小剂量黛力新联合佐匹克隆组停药后复发率明显减少,药物不良反应无明显差异。结论：采用小剂量黛力新联合佐匹克隆治疗失眠症,耐受性好、安全性高、效果更显著,值得临床推广应用。     

乳腺癌侵袭进展过程中肿瘤异质性和克隆演变证据

目的通过原发性乳腺癌与转移复发基因组学进行比较,寻找乳腺癌侵袭进展过程中肿瘤异质性和克隆演变证据,为临床个体化治疗提供参考依据。方法通过全基因组测序,在17例患者,3种临床情况中探索了基因组进化的模式。结果基于突变特征的推断(和治疗决定)延展到将到达未知的传播细胞。结论原发性乳腺癌病变的基因组测序可用来预测全身治疗方案。侵袭性细胞具有独立的肿瘤异质性和克隆的突变。     

清肝安神汤联合右佐匹克隆治疗失眠(肝郁化火)随机平行对照研究

[目的]观察清肝安神汤联合右佐匹克隆治疗失眠(肝郁化火)疗效。[方法]使用随机平行对照方法,将86例门诊患者按就诊顺序号方法随机分为两组。对照组43例右佐匹克隆,3mg/次,1次/d,睡前口服。治疗组43例清肝安神汤(柴胡、龙胆草、栀子、夜交藤各30g,泽泻、木通、酸枣仁、柏子仁各20g,远志、茯苓各15g,生地黄、玄参各20g,生牡蛎、生龙骨各25g),水煎400mL;右佐匹克隆治疗同对照组。连续治疗1个月为1疗程。观测临床表现、匹兹堡睡眠质量指数、失眠严重程度指数、不良反应。治疗1疗程(1个月),判定疗效。[结果]治疗组痊愈24例,显效9例,有效7例,无效3例,总有效率93.02%;对照组痊愈18例,显效7例,有效8例,无效10例,总有效率76.74%;治疗组疗效优于对照组(P0.05)。PSQI、ISI两组均有改善(P0.01),治疗组改善优于对照组(P0.01)。[结论]清肝安神汤联合右佐匹克隆治疗失眠(肝郁化火),疗效满意,无严重不良反应,值得推广。     

克隆性造血对肿瘤体细胞突变检测的影响

克隆性造血（clonal hematopoiesis，CH）突变是造血干细胞（hematopoietic stem cell，HSC）携带的突变，是年龄和外在环境（吸烟、放化疗等）共同作用的结果。随着肿瘤基因研究的进展，基因检测已成为实体瘤患者全病程管理中一个重要的环节。目前CH在实体瘤中的价值越来越受到关注。将围绕CH的检出，详细阐述实体瘤患者组织样本及循环肿瘤DNA （circulating tumor DNA，ctDNA）样本中CH的检测方法，探讨CH对肿瘤体细胞突变检测的影响和挑战。     

CLDN18.2在消化系统恶性肿瘤中作用的研究进展

紧密连接蛋白claudin 18.2（CLDN18.2）是一种细胞旁紧密连接结构中的膜蛋白，具有维持屏障、细胞旁运输和信号转 导等作用，在正常组织中特异性的表达于胃黏膜上皮细胞，在胃癌的发生与发展中并未丢失，在食管癌和胰腺癌等消化系统恶性 肿瘤中常异位激活并高表达，这使得CLDN18.2成为消化系统恶性肿瘤治疗的一个潜在靶点。目前，针对CLDN18.2的特异性抗 体zolbetuximab在临床试验中取得了显著的成功，有望成为CLDN18.2阳性的消化系统恶性肿瘤的一线治疗方案。此外，靶向 CLDN18.2的个体化免疫治疗还包括单克隆抗体、CAR-T细胞、双克隆抗体和抗体药物偶联物等，但大多数的研究还在临床研究 初始阶段，因此，靶向CLDN18.2的个体化免疫治疗或将是下一个消化系统恶性肿瘤研究的热点。     

PDX-1基因克隆载体的体外构建

目的体外构建胰-十二指肠同源框-1（PDX-1）基因的克隆载体。方法采用TRIzol方法从大鼠胰岛细胞瘤细胞株中提取RNA,通过RT-PCR方法在体外扩增大鼠PDX-1 c DNA,琼脂糖凝胶电泳鉴定,割胶纯化后回收目的基因,与p MD-18T克隆载体连接构建,经限制性内切酶双酶切及DNA序列分析鉴定p MD-18T-PDX-1的正确构建。结果正确构建了含有PDX-1 c DNA的克隆载体p MD-18T-PDX-1,其中PDX-1 c DNA全长为908 bp。将经双酶切鉴定正确的p MD-18T-PDX-1细菌克隆进行测序,测定结果与Gen Bank中大鼠PDX-1基因序列（NM₀22852.3）一致。结论成功构建了PDX-1基因克隆载体。该载体可为PDX-1基因分子生物学研究及PDX-1基因在诱导非β细胞向胰岛素分泌细胞分化中作用机制的研究提供基础。