金花茶通过AMPK/PPAR-α通路减轻NAFLD引起的脂代谢异常机制研究

[目的]观察金花茶(Camellia chrysantha(Hu) Tuyama)对非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)的防治效果，初步研究其作用机制。[方法]将48只C57BL/6小鼠随机分为6组:对照组、NAFLD模型组、金花茶粉末低剂量组、金花茶粉末高剂量组、金花茶水提物低剂量组、金花茶水提物高剂量组，每组各8只。除对照组采用普通饲料喂养外，其他各组采用高脂膳食喂养8周建立NAFLD模型，喂养结束后检测小鼠的体重、脂肪重量、血清生化指标、肝组织中极低密度脂蛋白受体(very low density lipoprotein receptor，VLDLR)、过氧化物酶体增殖物激活受体-α(peroxisome proliferator activated receptor-α，PPAR-α)与磷酸化腺苷酸激活蛋白激酶(phosphorylated-adenosine monophosphate activated protein kinase，p-AMPK)蛋白的表达水平变化。[结果]低剂量金花茶粉末与水提物均可以显著降低NAFLD小鼠血清中甘油三酯(triglyceride，TG)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase，ALT)和谷草转氨酶(aspartate transaminase，AST)水平(P＜0.05)，其中低剂量金花茶水提物显著降低NAFLD小鼠肝组织中VLDLR表达水平(P＜0.05)，显著提高p-AMPK与PPAR-α蛋白表达水平(P＜0.05)。[结论]金花茶水提物通过下调VLDLR蛋白表达，上调p-AMPK、PPAR-α蛋白表达，减轻NAFLD引起的脂代谢异常，缓解NAFLD小鼠肝脏脂质病变。     

Let-7诱导自噬在酒精性肝病中的作用研究

[目的]探讨lncRNA/let-7在酒精性肝病(alcohol liver disease, ALD)中的作用机制。[方法]通过喂食饲料含酒精的酒精喂养组(alcohol feeding group, AF),建立基于C57BL/6小鼠的ALD动物模型。制备血液和肝脏组织样品。在ALD小鼠模型和H2O2处理的人肝癌细胞(Human hepatocellular carcinoma, HepG2)细胞氧化应激模型中测定6种let-7 miRNA候选物的表达水平。基于Targetscan 6.2和miRanda 3.3a的生物信息学分析用于预测可能与let-7相互作用的下游靶基因和长链非编码RNA (long non-coding RNA, lncRNA)候选物。然后使用qRT-PCR在小鼠肝组织中定量预测的靶miRNA和lncRNA的水平。[结果] 1) AF组肝组织中let-7表达显著低于对照饲料(pair feeding, PF)组(P0.05),特别是let-7c、let-7d和let-7g表达水平显著降低(P0.05)。2)与对照组(untreated, UT)相比,H2O2处理的HepG2细胞中let-7表达也下调(P0.05)。3) AF组中发现自噬相关基因4 (autophagy related gene 4, Atg4)、自噬相关基因1 (autophagy related gene 1, Atg1)、自噬基因Beclin、自噬微管相关蛋白1轻链3B (light chain 3B, LC3B)等多种重要自噬生物标志物的表达水平均下调(P0.05),与慢性酒精摄入可抑制细胞自噬水平的理论相一致。4)预测了3种调控let-7的潜在lncRNA候选物NONMMUT012132、NONMMUT019851和NONMMUT068425。其中,NONMMUT012132的表达在AF组中上调,而其他两个lncRNA被下调。[结论]本研究表明,由酒精消耗过量引起的肝组织氧化损伤可能导致let-7 miRNAs和细胞自噬活性的下调,lncRNA可能参与let-7活性水平的调节。     

五味子乙素通过抑制TLR4-MyD88信号通路减轻脂多糖诱导的小鼠巨噬细胞凋亡

[目的]研究五味子乙素(schisandrin B,Sch B)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠巨噬细胞损伤的保护作用及其潜在分子机制。[方法]以小鼠巨噬细胞(RAW 264.7)为研究对象,建立LPS细胞炎症损伤模型,通过比色法测定细胞乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放量、细胞存活率、细胞内炎症因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)表达,以检测Sch B对LPS诱导的炎症的保护作用;荧光定量PCR检测Toll样受体4(Toll like receptor4,TLR4)、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor88,MyD88)及TNF-α的mRNA表达。[结果]LPS显著诱导RAW 264.7细胞损伤(P＜0.05),而Sch B能减轻LPS诱导的RAW 264.7细胞损伤,且呈剂量依赖关系(P＜0.05)。Sch B能显著下调TNF-α、IL-6的表达(P＜0.05),此外Sch B能显著抑制TLR4、MyD88及TNF-α的mRNA表达(P＜0.05),减轻LPS诱导的细胞炎症反应。[结论]Sch B能够显著改善LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症反应,具有潜在防治非酒精性脂肪肝炎的作用,TLR4-MyD88信号通路参与Sch B对细胞损伤的保护作用。     

天麻水煎剂对慢性束缚应激小鼠行为学和5-羟色胺含量的影响

[目的]观察电针(electroacupuncture,EA)对吗啡耐受(morphine tolerance,MT)模型大鼠机械性痛阈(mechanical paw-withdrawal threshold,MPWT)、脊髓背角NOD样受体蛋白3(Nod-like receptor protein 3,NLRP3)炎症小体及其炎症因子表达的调控。[方法]将18只健康雌性SD大鼠按完全随机法分为3组,包括空白组、模型组和EA组,每组6只。模型组和EA组大鼠于鞘内连续注射吗啡7d,制备MT模型,分别于开始造模后第1、3、5、7天检测大鼠左足MPWT。建模成功后,模型组和EA组继续予鞘内注射吗啡,连续7d,EA组在予鞘内吗啡注射后0.5h,予双侧"足三里""昆仑"穴位EA治疗,1次/d,连续7d,各组分别于建模成功后第1、3、5、7天检测左足MPWT。以Western blot法检测大鼠脊髓背角NLRP3炎症小体、白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)表达。[结果]与空白组比较,模型组大鼠注射吗啡后第1、3、5天MPWT显著升高(均P0.01),但注射吗啡7d后降低至基础水平,与空白组比较差异无统计学意义(P0.05),说明MT模型造模成功。与模型组比较,EA组大鼠第3、5、7天的MPWT升高(P0.01)。与空白组比较,模型组大鼠脊髓背角中NLRP3炎症小体、IL-18和IL-1β表达增高(均P0.01);与模型组比较,EA组大鼠脊髓背角中NLRP3炎症小体、IL-18和IL-1β表达减低(均P0.01)。[结论]EA能缓解吗啡耐受效应,其机制可能与下调脊髓背角NLRP3炎症小体、IL-18和IL-1β的表达有关。