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1.
目的 研究中药恒古骨伤愈合剂(简称中药合剂)对兔坏死股骨头内核心结合因子α1(cbfα1)基因表达的影响。方法 用大肠杆菌内毒素(LPS,10μg/kg体重)间隔24h两次静脉注射加甲基泼尼松3次肌肉注射制作的兔股骨头坏死模型,用中药合剂治疗后取股骨头行免疫组化,并提取总RNA行实时荧光定量多聚酶链反应(PCR),观察兔股骨头内cbfα1基因表达的动态变化特点。结果 给药第4周时,中药组与模型组股骨头内cbfα1基因表达均为阴性,至第8、12周时,中药组免疫组化结果为弱阳性,模型组为阴性;至第12周时中药组股骨头内cbfα1mRNA的表达量是模型组的2.87倍。正常给药组与空白组比较差异无显著性。结论 中药恒古骨伤愈合剂可促进坏死α股骨头内源性cbfα1基因的表达,以用药时间长者效果明显。  相似文献
2.
目的:探讨以四君子汤等健脾中药为基础的复方胃肠安(WCA)对胃癌细胞的体内作用分子机制。方法:采用人胃癌细胞SGC-7901裸小鼠皮下移植瘤模型系统评价WCA对胃癌细胞的体内抑瘤作用;链霉素抗生物素-过氧化酶法(SP法)检测增殖细胞核抗原PCNA表达,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL法)检测凋亡指数以及SP法检测caspase-3的活化表达;cDNA array筛选出WCA组N.S.对照组差异表达2倍以上基因,Real-time Quantitative PCR验证与增殖、凋亡、分化及信号转导密切相关的19条基因的表达;SP法检测部分有差异表达的基因在细胞内的蛋白表达。结果:与对照组比较,WCA组对皮下移植瘤生长的平均抑制率为(44.32+5.67)%,3次实验WCA组的平均瘤重分别为(0.99±0.76),(1.02±0.16),(0.88±0.47) g,分别低于对照组的(1.93±0.58),(1.65±0.46),(1.63±0.52) g(P<0.05);WCA组移植瘤PCNA阳性表达率(35.73±6.01)%、强阳性表达率(3.39±1.48)%和总阳性率(39.03±7.37)%均分别低于对照组的(53.48±9.34)%,(8.78±5.43)%,(62.26±13.80)%(P<0.05);凋亡指数为(9.72±4.51)%高于对照组的(2.45%±1.37)%(TUNEL法);WCA组活化caspase-3表达阳性率为(5.20±2.26)%,较对照组的(2.82±1.84)%高(P=0.0367);与对照组比较,全基因表达谱芯片筛选出WCA组共45个2倍以上差异表达基因,其中上调表达24个,下调表达21个。35个已克隆基因,10个表达序列标签(expression sequence tag,EST);2-ΔΔCT法对19条目标基因的表达量进行评估,与对照组比较,表达量显著差异4倍以上的有Stat3(2-ΔΔCT=0.16),RIPX(2-ΔΔCT=0.18),ROD1(2-ΔΔCT=0.23),bcl-2(2-ΔΔCT=0.10),均为下调表达作用;WCA组P-Stat3阳性表达率(35.93±12.67)%、强阳性表达率(3.64%±1.72)%和总阳性率(39.57±13.31)%均分别低于对照组的(56.49±9.34)%,(13.16±7.06)%,(69.65±10.80)%,差异有显著性;bcl-2蛋白阳性表达率(1.62±0.82)%低于对照组的(7.53±3.73)%(P<0.05)。结论:健脾中药复方WCA在体内可抑制胃癌细胞增殖,诱导凋亡;WCA对胃癌细胞SGC-7901在核酸层次上有影响作用的已知基因主要为Stat3,RIPX,ROD1,bcl-2,均为下调表达作用;在蛋白表达水平的作用机制与抑制磷酸化的Stat3,bcl-2蛋白在细胞内的表达,上调活化caspase-3的表达有关。  相似文献
3.
王琳  王宝恩  肖培根  汪建  乔延江  谈学海 《中草药》2004,35(10):1147-1150
目的 研究复方861对人肝星状细胞(LX-2)中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)基因表达的调节作用。方法应用基于SYBR-Green Ⅰ的实时定量荧光PCR方法,研究复方861分别作用24、48、72h后,LX-2细胞中α-SMAmRNA含量的变化情况。结果 复方861在48和72h可以显著降低LX-2细胞中α-SMA mRNA含量。结论 复方861可抑制LX-2细胞中α-SMA基因的表达,提示其抗肝纤维化作用可能与其抑制I,X-2细胞的活化有关。  相似文献
4.
张岗  翟清华  张大为  胡本祥  郭顺星 《中草药》2014,45(23):3443-3448
目的 克隆珍稀濒危兰科药用植物铁皮石斛镁离子转运蛋白(magnesium transporter,MGT)基因(DoMGT1)并进行生物信息学和表达分析.方法 采用RT-PCR和RACE技术,获得基因cDNA全长;利用生物信息学软件预测蛋白的理化性质、结构域及亚细胞定位等分子特征;用DNASTAR 6.0和MEGA 4.0分别进行氨基酸多序列比对和进化关系分析;借助实时定量PCR(qPCR)检测基因表达模式.结果 克隆到DoMGT1(GenBank注册号KJ995532),cDNA全长1 625 bp,编码一条由425个氨基酸组成的肽链,相对分子质量47 400,等电点4.79;DoMGT1蛋白含有CorA家族镁离子转运蛋白保守结构域(313~420)和镁离子转运蛋白MRS2/LPE10保守域(27~420);DoMGT1与多种植物MGTs基因一致性为46%~63%,编码蛋白与水稻OsMGTD、OsMGTE、OsMGTF等聚在一起,与AtMGT4共同构成植物MGTs基因的一大类群;DoMGT1基因转录本在石斛根、茎、叶器官中为组成型表达,叶中相对表达量较高,为根中的3.46倍;茎次之,为根的1.54倍.结论 成功克隆到一个镁离子转运蛋白基因DoMGT1,其转录本在叶中高的表达特征暗示该基因可能在铁皮石斛叶的生长发育中发挥重要作用.  相似文献
5.
张 岗  胡本祥  张大为  陈 伟  郭顺星 《中草药》2014,45(8):1143-1149
目的 分离珍稀濒危药用植物铁皮石斛咖啡酰辅酶A氧甲基转移酶(caffeoyl CoA O-methyltransferase,CCoAOMT)基因(DoOMT)并进行生物信息学和表达模式分析。方法 采用RT-PCR和RACE技术获取基因cDNA全长;利用生物信息学软件预测蛋白的理化性质、结构域和三维建模等分子特性;用DNASTAR 6.0和MEGA 4.0分别进行氨基酸多序列比对和进化关系分析;借助实时定量PCR检测基因表达模式。结果 分离到DoOMT(GenBank注册号KF876839),cDNA全长1 005 bp,编码一条由239个氨基酸组成的多肽,相对分子质量为2.708×104,等电点5.03;DoOMT蛋白不含跨膜域和信号肽,具有氧甲基转移酶family 3、甲基转移酶的保守结构域(13~238、31~238)和8个保守基序;DoOMT与植物CCoAOMTs蛋白一致性为49.4%~78.7%,所在分支隶属于CCoAOMTs分子进化的1b类群,与单子叶植物香草亲缘关系最近;DoOMT基因转录本在石斛根、茎、叶器官中为组成型表达,茎中相对表达量较高,为叶中的4.562倍,根和叶中无显著差异。结论 铁皮石斛CCoAOMT基因DoOMT的分子特征为进一步研究其在铁皮石斛次生代谢和生长发育过程中的作用奠定基础。  相似文献
6.
陈娟  谷巍  段金廒  宿树兰  邵婧  孙红梅  耿超 《中草药》2014,45(21):3149-3152
目的对主产地广东遂溪、福建漳浦及引种栽培地区江苏南京、淮安的不同生长期穿心莲Andrographis paniculata活性成分及关键酶基因表达情况进行分析,研究穿心莲活性成分积累动态,探讨其最佳采收期及分子机制。方法用HPLC法测定穿心莲内酯及脱水穿心莲内酯量,并用实时荧光定量PCR技术从m RNA水平比较研究不同生长期穿心莲关键酶ent-柯巴基焦磷酸合酶(CPS)基因的表达情况。结果不同产地穿心莲生长过程基本一致,在营养生长时期生长迅速,进入生殖生长后生长趋于平缓。4个产地穿心莲样品中活性成分变化趋势相近,穿心莲内酯量均在始花期达到最高,脱水穿心莲内酯量变化较平缓;穿心莲CPS基因的相对表达量在蕾期至始花期相对较高,与穿心莲内酯量呈显著正相关。4个产地穿心莲的穿心莲内酯与脱水穿心莲内酯之和均达到《中国药典》2010年版标准。结论穿心莲最佳采收期应以物候期为评判依据,其最佳采收期为始花期。  相似文献
7.
目的 克隆珍稀濒危药用植物铁皮石斛Dendrobium officinale 赤霉素3-氧化酶(gibberellin 3-oxidases,GA3ox)基因(DoGA3ox),并进行生物信息学和表达分析。方法 采用RACE 和RT-PCR 技术获得DoGA3ox 基因cDNA 全长;利用生物信息学软件预测其编码蛋白的理化性质、结构域及亚细胞定位等分子特性;用DNASTAR 7.0 和MEGA 6.0 软件分别对其进行氨基酸多序列比对和进化关系分析;借助实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测基因表达模式。结果 克隆到DoGA3ox基因(GenBank 注册号KT597694),cDNA 全长1 318 bp,编码一条由353 个氨基酸组成的多肽,相对分子质量为39 052.5,等电点6.21;DoGA3ox 蛋白不含跨膜域和信号肽,具有GA3ox 的保守结构域DIOX_N(40~130)和2OG-FeII_Oxy(197~299);DoGA3ox 与大葱、油棕、海枣、野茶树及蓝猪耳GA3ox 蛋白一致性分别为55%、56%、54%、51%、50%,与单子叶植物大葱、油棕和海枣的亲缘关系较近。qRT-PCR 实验结果显示DoGA3ox 基因在铁皮石斛种子共生(非共生)萌发1~3级时,其相对表达量呈现出先升高后降低再升高的趋势,分别为未萌发种子的13.44(5.21)、7.28(2.32)和9.40(6.21)倍,由此可知,该基因在共生萌发种子中的表达量高于非共生萌发种子。结论 首次克隆得到1 个DoGA3ox 基因的全长cDNA,其转录本在共生和非共生不同萌发级别种子中的表达特性说明该基因在铁皮石斛种子萌发中起着重要调控作用。  相似文献
8.
目的:探究5/6肾切除所致慢性肾衰动物模型在病理发展过程中血中生化指标及肾脏基因表达的变化。方法:将SD大鼠随机分为假手术组(Sham)和5/6肾切组(NX),分别于术后6周、8周末处死,收集血清、血浆和肾脏组织,测定血清肌酐、血浆醛固酮含量及肾脏组织TGF-β1、TNF-α和IL-17基因的表达。结果:病理组动物血清肌酐、血浆醛固酮含量较假手术组显著性升高,肾脏组织TGF-β1、TNF-α和IL-17基因表达较假手术组升高,且8周病理组各项指标升高幅度大于6周病理组。结论:RAAS参与慢性肾衰病变过程,引发肥大、炎症等一系列变化,并且随时间延长而病程加深。  相似文献
9.
张岗  刘阿萍  邵庆庆  杨文婷  李雪  郭顺星 《中草药》2016,47(20):3688-3695
目的 分离珍稀濒危药用植物铁皮石斛蔗糖转运蛋白(sucrose transporter, SUT)基因(DoSUT1)并进行生物信息学和表达模式分析。方法 采用RT-PCR和RACE技术获基因全长;利用生物信息学软件预测蛋白的理化性质、结构域和亚细胞定位等分子特性;用DNASTAR 6.0和MEGA 4.0分别进行氨基酸多序列比对和进化关系分析;借助实时定量PCR检测基因表达模式。结果 分离到DoSUT1(GenBank注册号KF876842),cDNA全长1 920 bp,编码一条由538个氨基酸组成的多肽,相对分子质量57 400,等电点9.61;DoSUT1蛋白含12个跨膜域,具有高等植物蔗糖/H+共转运家族和协助扩散超家族的保守结构域(60-524、63-531);DoSUT1与多种植物SUT基因编码蛋白有较高的一致性,与玉米、大麦等单子叶植物SUT亚家族中的SUT4聚类在一起;DoSUT1基因具有组织表达特异性,其转录本在石斛叶和茎中表达量较高,分别为根中的2.783和2.150倍。结论 DoSUT1基因的分子特征为进一步研究其在铁皮石斛糖代谢调控中的作用奠定基础。  相似文献
10.
目的:通过研究基质金属蛋白酶(MMP-2)及内源性基质金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP-2)在慢性心衰中的作用,从分子生物学角度探讨中药不同配伍对慢性心衰心室重构的影响,并进一步阐明其作用机理。方法:本实验以冠脉结扎法配合力竭式游泳、减食等方法造成大鼠慢性心衰动物模型,分成模型组、西药组、益气中药组、活血中药组、益气活血中药组、益气活血利水中药组和正常组。利用实时荧光定量PCR技术及SABC免疫组化法检测慢性心衰大鼠MMP-2、TIMP-2表达的变化情况。结果:慢性心衰动物模型组大鼠心肌MMP-2表达明显升高,TIMP-2表达降低,与假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.01);经过治疗,各用药组大鼠心肌组织MMP-2表达明显降低,TIMP-2表达升高,其中益气活血组、益气活血利水组中药与西药组比较,差异无统计学意义(P>0.05),且益气活血利水组疗效明显优于益气活血组(P<0.01)。结论:证明益气活血利水中药可通过作用于心肌组织中MMP-2、TIMP-2的表达,抑制或逆转心室重构的过程,从而达到治疗慢性心衰的目的。  相似文献
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