异鼠李素对人肝微粒体CYPs活性及大鼠原代肝细胞毒性作用研究

目的 研究异鼠李素对肝脏6种CYPs的体外抑制作用,以及对大鼠原代肝细胞的毒性作用。方法 采用人肝微粒体（HLMs）体外温孵法研究异鼠李素对6种细胞色素P450酶（CYPs）——CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4、CYP2E1、CYP1A2和CYP2C9的体外抑制作用;使用HPLC-MS/MS法检测异鼠李素和HLMs共同孵育后的代谢产物;利用体外培养的低CYPs活性的大鼠原代肝细胞,考察不同剂量异鼠李素对细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）的影响。结果 50 μmol/L的异鼠李素对CYP2E1和CYP1A2有一定的抑制作用,抑制率分别为59.48%和39.91%;异鼠李素和HLMs共同孵育后,产生去甲基化代谢产物3,3'',4'',5,7-五羟基黄酮,转化为极性和水溶性较高的代谢物;30、100、300 μmol/L的异鼠李素会使大鼠原代肝细胞培养液中的ALT和LDH显著上升（P＜0.01）,100、300 μmol/L异鼠李素使AST显著上升（P＜0.05、0.01）,呈浓度相关性。结论 异鼠李素在体外主要经HLMs代谢,同时对CYP2E1和CYP1A2有一定的抑制作用,可能会使CYP2E1和CYP1A2的底物药物在体内的浓度产生变化,导致一系列药物的相互作用;大量使用异鼠李素可能会造成一定程度的肝细胞损伤,且呈现浓度相关性。临床应用应合理设置剂量,并注意潜在的药物之间的相互作用。     

f_2相似因子法评价银杏酮酯缓释微丸大类成分总黄酮和各类成分的体外释放相关性研究

目的引入f_2相似因子法对银杏酮酯(GBE)缓释微丸的大类成分总黄酮和各类成分(包括黄酮类和萜内酯类)的释放曲线进行分析,以能较全面地评价其体外释放。方法运用紫外分光光度法、高效液相-质谱联用(HPLC-MS)测定GBE缓释微丸中大类成分(总黄酮)和各类成分(槲皮苷、异鼠李素、芦丁、槲皮素、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C、白果内酯)的体外释放率,并进行f_2相似因子计算;采用扫描电镜法观察微丸释药前后的微观结构,结合方程拟合分别对微丸中总黄酮和各类成分的释药机制解析,以验证f_2相似因子法的可靠性。结果优化工艺的GBE微丸黄酮类和内酯类的各成分与大类成分总黄酮的f_2均大于50,说明大类成分总黄酮与各类成分体外释放曲线具有较好的相关性。释药机制解析进一步验证了该结果的可靠性。结论 f_2相似因子法可运用于多组分中药缓释制剂大类成分和各类成分的体外释放评价。     

油菜花粉中黄酮类化合物的提取与分析

目的 研究油菜花粉中黄酮类化合物的提取方法并进行提取工艺优化,同时建立HPLC-UV法测定槲皮素、山柰酚和异鼠李素3种黄酮类化合物的方法.方法 以总黄酮得率为指标,优选油菜花粉中黄酮类化合物的最佳提取方法和工艺参数;采用Capcell PAK-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,乙腈-pH 2.2磷酸水溶液(35∶65)洗脱,检测波长360 nm,体积流量1.00 mL/min,柱温40℃,对提取物中3种黄酮类成分进行分析测定.结果 渗漉法为提取油菜花粉中黄酮类化合物的理想方法;3种黄酮类成分分离度良好,各成分质量浓度与峰面积在测定范围内线性关系良好,重现性、稳定性和加样回收率均符合要求.结论 渗漉法适合提取油菜花粉中的黄酮类化合物,所建立的HPLC法稳定可靠、简便易行,可用于油菜花粉中黄酮类化合物的同时定量分析,为油菜花粉原料及其提取物的质量控制和评价奠定了基础.     

Rat lens aldose reductase inhibitory constituents of Nelumbo nucifera stamens

Aldose reductase, the principal enzyme of the polyol pathway, has been shown to play an important role in the complications associated with diabetes. A methanol extract of the stamens of Nelumbo nucifera Gaertn. was shown to exert an inhibitory effect on rat lens aldose reductase (RLAR), and thus was fractionated using several organic solvents, including dichloromethane, ethyl acetate and n-butanol. The ethyl acetate-soluble fraction, which manifested potent RLAR-inhibitory properties, was then purified further via repeated measures of silica gel and Sephadex LH-20 column chromatography. Thirteen flavonoids: kaempferol (1) and seven of its glycosides (2-9), myricetin 3',5'-dimethylether 3-O-beta-d-glucopyranoside (10), quercetin 3-O-beta-d-glucopyranoside (11) and two isorhamnetin glycosides (12, 13) were isolated from N. nucifera, as well as four non-flavonoid compounds: adenine (14), myo-inositol (15), arbutin (16) and beta-sitosterol glucopyranoside (17). These compounds were all assessed with regard to their RLAR-inhibitory properties. Among the isolated flavonoids, those harboring 3-O-alpha-l-rhamnopyranosyl-(1-->6)-beta-d-glucopyranoside groups in their C rings, including kaempferol 3-O-alpha-l-rhamnopyranosyl-(1-->6)-beta-d-glucopyranoside (5) and isorhamnetin 3-O-alpha-l-rhamnopyranosyl-(1-->6)-beta-d-glucopyranoside (13), were determined to exhibit the highest degree of rat lens aldose reductase inhibitory activity in vitro, evidencing IC(50) values (concentration required for a 50% inhibition of enzyme activity) of 5.6 and 9.0 microm, respectively.     

Assessment of isorhamnetin 3‐O‐neohesperidoside from Acacia salicina: protective effects toward oxidation damage and genotoxicity induced by aflatoxin B1 and nifuroxazide

Antioxidant activity of isorhamnetin 3‐O‐neohesperidoside, isolated from the leaves of Acacia salicina, was determined by the ability of this compound to inhibit xanthine oxidase activity and to scavenge the free radical 2,2′‐azino‐bis (3‐ethylbenzthiazoline‐6‐sulfonic acid) (ABTS^.?) diammonium salt. Antigenotoxic activity was assessed using the SOS chromotest assay. This compound has the ability to scavenge the ABTS^.+ radical by a hydrogen donating mechanism. We also envisaged the study of the antioxidant effect of this compound by the enzymatic xanthine/xanthine oxidase (X/XOD) assay. Results indicated that isorhamnetin 3‐O‐neohesperidoside was a potent inhibitor of xanthine oxidase and superoxide anion scavengers. Moreover, this compound induced an inhibitory activity against nifuroxazide and aflatoxine B1 (AFB1) induced genotoxicity. Taken together, these observations provide evidence that isorhamnetin 3‐O‐neohesperidoside isolated from the leaves of A. salicina is able to protect cells against the consequences of oxidative stress. Copyright © 2010 John Wiley & Sons, Ltd.     

基于网络药理学和分子对接技术探讨归芍地黄汤加减方治疗抽动秽语综合征的作用机制

目的 基于网络药理学和分子对接技术结合体内实验验证,探讨归芍地黄汤加减方治疗抽动秽语综合征（Tourette syndrome,TS）的作用机制。方法 通过检索TCMSP和BATMAN-TCM数据库获得归芍地黄汤加减方的活性成分及作用靶点,检索GeneCards和OMIM数据库获得TS疾病相关靶点,将二者靶点取交集,得到交集靶点。利用Cytoscape软件构建活性成分-靶点网络,并对交集靶点进行蛋白质-蛋白质相互作用（protein-protein interaction,PPI）及网络拓扑分析。利用R语言软件及相关程序包对交集靶点进行基因本体（geneontology,GO）功能及京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）通路富集分析,对网络拓扑分析后筛选出的关键靶点进行分子对接,并通过动物实验对关键靶点和信号通路进行验证。结果 筛选得到归芍地黄汤加减方治疗TS的活性成分8个,交集靶点32个。主要活性成分包括槲皮素、豆甾醇、β-谷甾醇、异鼠李素,关键靶点包括白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-...     

基于“初生-次生代谢产物”互作途径的大果沙棘和中华沙棘差异性研究

目的 分析大果沙棘Hippophae rhamnoides vat. sp L.与中华沙棘H. rhamnoides初生/次生代谢物的差异,并对其生物合成途径变化进行分析。方法 采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF-MS/MS）法对2个种属的沙棘进行初生及次生代谢产物表征,基于二水平析因-星点设计法（plackett burman-central composite design,PB-CCD）设计对沙棘UPLC-DAD指纹图谱进行研究,优化液相方法,指认共有峰;以偏最小二乘-判别分析（partial least squares discriminant analysis,PLS-DA）、聚类分析及京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）通路富集分析对大果沙棘、中华沙棘进行差异初生代谢物筛选及相关代谢通路富集;进一步采用质谱多反应检测（multiple reaction monitoring,MRM）对筛选得到具有差异的初生代谢物和次生代谢物进行定量分析;最后,对2个品种沙棘的差异性成...     

苦参根中化学成分及其体外抗肿瘤活性研究

目的 研究苦参Sophora flavescens根的化学成分及其体外抗肿瘤活性.方法 利用大孔树脂柱色谱、硅胶柱色谱、ODS柱色谱及半制备型HPLC等进行分离纯化,结合理化性质及波谱数据鉴定化合物的结构;评估了从苦参根提取物中分离得到的11个化合物对人乳腺鳞状癌HCC1806细胞,人乳腺癌MCF-7细胞,宫颈癌HeL...     

江淮地区春柴胡HPLC特征图谱研究

目的建立春柴胡HPLC特征图谱,为春柴胡的质量评价提供依据。方法色谱条件:Waters Symmetry C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈-1mL·L-1甲酸,梯度洗脱;流速为1.0mL·min-1;检测波长为365nm。以"中药色谱特征图谱相似度评价系统2004A版"对数据进行分析。结果建立了春柴胡HPLC特征指纹图谱的共有模式,共标定了7个共有峰,指认了其中3个共有峰分别为槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸苷、槲皮素和异鼠李素,并对10批春柴胡特征图谱与对照特征图谱计算相似度,其结果均大于0.96。结论建立的春柴胡HPLC特征图谱特征性和专属性强,方法快速、简便、可靠,可用于春柴胡药材的质量控制。     

UPLC法测定银杏叶茶中总黄酮醇苷的含量

目的建立银杏叶茶中槲皮素、山柰素和异鼠李素的超高效液相色谱分析法。方法色谱柱:Thermo Scientific AcclaimTM RSLC 120C18 ODS(100mm×2.1mm,2.2μm);流动相:甲醇-4mL·L~(-1)磷酸溶液(50∶50);流速:0.3mL·min~(-1);检测波长:360nm。结果槲皮素在4.503~90.06ng、山柰素在3.586~71.72ng、异鼠李素在2.111~42.22ng范围内线性关系良好;平均回收率分别为98.95%(RSD=0.87%),98.80%(RSD=0.90%)和98.78%(RSD=1.39%)。结论该方法简单,分析速度快,准确度高,可用于快速检测银杏叶茶中总黄酮醇苷的含量。