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1.
目的研究养殖喘水苔海绵Tedania anhelans化学成分及其生物活性,为药源海绵规模化养殖和开发提供依据。方法综合利用薄层色谱、硅胶色谱、ODS C18色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、半制备高效液相色谱(HPLC)等方法对化学成分进行了分离;通过质量光谱测定(MS)、核磁共振(NMR)等方法并结合相关文献,对化合物结构进行鉴定。结果从养殖喘水苔海绵Tedania anhelans中分离得到13个化合物,分别为胆固醇(1)、3β-羟基-24-亚甲基胆甾-5-烯-7-酮(2)、胆甾-5-烯-3β,7α-二醇(3)、胆甾-5-烯-3β,7β-二醇(4)、3β-羟基胆甾-5-烯-7-酮(5)、胸苷(6)、去甲基胸苷(7)、环(脯氨酸-缬氨酸)二肽(8)、piperazirum(9)、(E)-4-(1H-indol-3-yl)but-3-en-2-one(10)、3-吲哚乙酸甲酯(11)、3-吲哚甲醛(12)、毛脉五味子醇(13)。结论13个化合物均为首次从该种海绵中分离得到,化合物8在50μmol·L?1浓度水平对HSV-2病毒抑制率为60.7%。  相似文献   
2.
3.
4.
目的: 探讨白藜芦醇对骨髓间充质干细胞(MSC)衰老的影响及其机制。方法: 分离SD乳鼠(7日龄)MSC,传代培养至第3代后检测0、1、10、50 g/L D-半乳糖对MSC衰老的影响,确定D-半乳糖诱导MSC衰老的最佳浓度。再将细胞随机分为10、50、100 μmol/L白藜芦醇组及对照组。衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色观察各组细胞衰老变化;DCFH-DA染色检测总活性氧水平;MitoSOX Red染色检测线粒体活性氧水平;线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1法)检测线粒体膜电位变化;纯化线粒体膜通道孔(mPTP)比色法检测线粒体膜通道开放水平;蛋白质印迹法检测衰老相关蛋白p53、p16、γ-H2AX表达和细胞质内线粒体细胞色素C外泄水平。结果: 10、50 g/L D-半乳糖可明显增加SA-β-gal染色阳性MSC数量和线粒体活性氧水平(均P < 0.01)。与对照组比较,白藜芦醇组SA-β-gal染色阳性细胞数减少(均P < 0.01),p53、p16和γ-H2AX表达减少,细胞内总活性氧和线粒体活性氧水平下降(均P < 0.01),线粒体膜电位下降(P < 0.05或P < 0.01),膜通道开放水平降低(P < 0.05或P < 0.01),细胞质内细胞色素C外泄减少。结论: 白藜芦醇可保护MSC线粒体功能,延缓MSC衰老。  相似文献   
5.
PurposeAiming to clarify the role of mitochondria in cell fate decision of cultured human corneal endothelial cell (cHCEC) subpopulations.MethodsThe mitochondrial respiratory ability were examined with Mito stress and Mito fuel flex test assays using an extracellular flux analyzer (XFe24; Agilent Technologies; Santa Clara, CA) for human corneal endothelium tissues, mature cHCECs and a variety of cell state transitioned cHCECs. Tricarboxylic acid cycle and acetyl-coenzyme A–related enzymes was analyzed by proteomics for cell lysates using liquid chromatography–tandem mass spectrometry for cHCEC subpopulations.ResultsThe maximum oxygen consumption rate was found to become stable depending on the maturation of cHCECs. In the Mito stress tests, culture supplements, epidermal growth factor, SB203580, and SB431543 significantly repressed oxygen consumption rate, whereas a Rho-associated protein kinase inhibitor Y-27632 increased. Tricarboxylic acid cycle and mitochondria acetyl-coenzyme A–related enzymes were selectively upregulated in mature cHCECs, but not in cell state transitioned cHCECs. The maximum oxygen consumption rate was found to be higher in healthy human corneal endothelium tissues than those with deeply reduced cell density. An upregulated tricarboxylic acid cycle was linked with metabolic rewiring converting cHCECs to acquire the mitochondria-dependent oxidative phenotype.ConclusionsMitochondrial metabolic intermediates and energy metabolism are tightly linked to the endothelial cell fate and function. These findings will help us to standardize a protocol for endothelial cell injection.  相似文献   
6.
目的观察多聚嘧啶序列结合蛋白相关剪接因子(PSF)对缺氧诱导的人视网膜微血管内皮细胞(hRMECs)功能的影响。方法采用三质粒系统构建慢病毒颗粒(LV)-PSF。LV-PSF体外感染hRMECs后通过流式细胞计数法测定其感染效率。应用实时定量PCR(RT-PCR)检测经LV-PSF感染的hRMECs中PSF mRNA表达水平。将实验分为体内和体外两部分。体内实验:7日龄健康C57B/L6小鼠20只,采用随机数字表法分为正常组、氧诱导视网膜病变(OIR)组、OIR+LV-空载体(Vec)组和OIR+LV-PSF组,每组5只。除正常组外,其余3组构建OIR模型。OIR组除缺氧刺激外,不做其余处理。OIR+LV-Vec组和OIR+LV-PSF组小鼠分别玻璃体腔注射LV-Vec或LV-PSF。观察LV-PSF对视网膜新生血管(RNV)形成的影响。体外实验:将hRMECs分为正常组、缺氧组、空载组、PSF高表达组。正常组为正常体外培养的hRMECs;缺氧组为缺氧刺激3 h恢复正常培养条件24 h的hRMECs;空载组、PSF高表达组分别为用LV-Vec、LV-PSF感染48 h,再用缺氧刺激3 h恢复正常培养条件24 h的hRMECs。采用MTT比色法观察PSF对细胞增生能力的影响。采用细胞划痕实验和Transwell迁移实验观察PSF对缺氧刺激下细胞迁移能力的影响。采用RT-PCR观察各组细胞中HIF-1α、VEGF及PSF的mRNA表达。结果成功构建可稳定高表达PSF的LV-PSF,流式细胞仪测定其感染效率为97%,RT-PCR测得经LV-PSF感染的hRMECs中PSF mRNA水平明显上调。体内实验:OIR组、OIR+LV-Vec组小鼠RNV面积较正常组明显增加(t=18.31、43.71),OIR+LV-PSF组小鼠RNV面积较OIR组(t=11.30)、OIR+LV-Vec组(t=15.47)明显减小,差异均有统计学意义(P<0.05)。体外实验:MTT比色法检测结果显示,缺氧组hRMECs增生能力较正常组明显增强(t=2.57),PSF高表达组hRMECs增生能力较正常组、缺氧组、空载组明显降低(t=5.26、5.46、3.73),差异均有统计学意义(P<0.05)。细胞划痕实验结果显示,缺氧刺激3 h恢复正常条件24 h或48 h均可刺激缺氧组与空载组细胞明显迁移(t=8.35、13.84,P<0.05);而与缺氧组与空载组比较,PSF高表达组细胞迁移不明显(t=10.99、18.27、9.75、8.93、26.94、7.01,P<0.05)。Transwell小室实验结果显示,正常组和空载组微孔膜上染色的细胞数较多,而PSF高表达组微孔膜上染色的细胞数明显减少(t=9.33、6.15,P<0.05)。RT-PCR检测结果显示,与正常组比较,缺氧组、空载组hRMECs中HIF-1α、VEGF的mRNA表达明显增加(t=15.23、21.09,P<0.05),PSF mRNA表达无明显变化(t=0.12、2.15,P<0.05);与缺氧组、空载组比较,PSF高表达组hRMECs中HIF-1α、VEGF的mRNA表达明显下降(t=10.18、13.10,P<0.05),PSF mRNA表达明显增加(t=65.00、85.79,P<0.05)。结论PSF可减少OIR模型小鼠RNV面积。PSF可能通过HIF-1α/VEGF信号通路抑制缺氧诱导的hRMECs增生和迁移。  相似文献   
7.
目的观察非小细胞肺癌(non small cell lung cancer,NSCLC)中肺腺癌A549细胞在顺铂(cisplatin,CP)联合雷帕霉素(rapamycin,RAPA)或3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)作用下的结果,为提高顺铂的化疗效果提供理论依据。方法 2013年3月至2014年6月期间,通过对人肺腺癌细胞株A549(由河北医科大学第四医院科研中心提供)经四甲基偶氮唑盐3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium (MTT)实验检测顺铂、雷帕霉素和3-MA对A549细胞的增殖抑制率,计算出各药物的50%细胞抑制浓度(50%inhibitory concentration,IC50),并以此作为实验浓度。实验分为4组:对照组(无药物干预)、顺铂组(加15μmol/L的顺铂)、顺铂+雷帕霉素组(加10nmol/L的雷帕霉素1h后再加15μmol/L的顺铂)、顺铂+3-MA组(加3μmol/L的3-MA 1h后再加15μmol/L的顺铂),将对数生长期的肺癌A549细胞以每孔1.0×10^6/ml密度接种于6孔培养板中,待细胞长至孔底面积约70%~80%后分别加入稀释好的药物,分别培养24、48、72h。肺癌A549细胞的生长迁移情况用细胞划痕实验检测,mTOR、LC3-Ⅱ及Bax mRNA和蛋白的表达情况用RT-PCR(逆转录-聚合酶链反应)、Western blot(蛋白质印迹)法检测。数据处理采用SPSS 17.0统计软件进行分析。结果顺铂IC50:15μmol/L;雷帕霉素IC50:10nmol/L;3-MA IC50:3μmol/L。划痕实验显示24h顺铂+雷帕霉素组细胞迁移能力最弱,48h和72h顺铂+3-MA组细胞迁移能力最弱。RT-PCR显示顺铂+雷帕霉素组LC3-ⅡmRNA的2-△△Ct值(24h:1.686±0.069;48h:1.803±0.083;72h:1.836±0.056)与顺铂组(24h:1.489±0.031;48h:1.325±0.007;72h:1.428±0.080)相比表达量均明显上升(24hF=149.780,P<0.01;48hF=111.599,P<0.01;72hF=167.855,P<0.01);而顺铂+3-MA组的Bax mRNA的2-△△Ct值(48h:1.864±0.104;72h:1.935±0.068),与顺铂组(48h:1.346±0.080,72h:1.462±0.029)相比,表达量均明显上升(48hF=52.853,72hF=202.118;P值均<0.01)。Western blot显示顺铂+雷帕霉素组LC3-Ⅱ蛋白(48h:0.556±0.010;72h:0.571±0.009)与顺铂组(48h:0.426±0.0107;72h:0.492±0.009)相比表达量均显著上升(48hF=372.056,72hF=930.500;P值均<0.01);而顺铂+3-MA组的Bax蛋白(48h:0.897±0.022;72h:0.916±0.005),与顺铂组(48h:0.463±0.011;72h:0.581±0.007)相比,表达量均显著上升(48hF=1100.412,72hF=5715.778;P值均<0.01)。结论顺铂联合雷帕霉素或3-MA较单独使用顺铂能更好的抑制A549细胞的生长,长时间用药时顺铂联合3-MA作用最强。  相似文献   
8.
9.
The regeneration of whole osteochondral constructs with a physiological structure has been a significant issue, both clinically and academically. In this study, we present a method using rabbit bone marrow stromal cells (BMSCs) cultured on a silk–RADA peptide scaffold in a specially designed two‐chambered co‐culture well for the generation of multilayered osteochondral constructs in vitro. This specially designed two‐chambered well can simultaneously provide osteogenic and chondrogenic stimulation to cells located in different regions of the scaffold. We demonstrated that this co‐culture approach could successfully provide specific chemical stimulation to BMSCs located on different layers within a single scaffold, resulting in the formation of multilayered osteochondral constructs containing cartilage‐like and subchondral bone‐like tissue, as well as the intermediate osteochondral interface. The cells in the intermediate region were found to be hypertrophic chondrocytes, embedded in a calcified extracellular matrix containing glycosaminoglycans and collagen types I, II and X. In conclusion, this study provides a single‐step approach that highlights the feasibility of rabbit BMSCs as a single‐cell source for multilayered osteochondral construct generation in vitro. Copyright © 2013 John Wiley & Sons, Ltd.  相似文献   
10.
Background: Previous studies have demonstrated that bone demineralization can improve consolidation in bone grafts. The biologic mechanisms underlying this phenomenon remain unclear. Methods: Twelve adult male guinea pigs were used in this experiment. Forty‐five bone samples removed from the calvaria of nine animals were divided in groups (n = 9) according to the time of demineralization with citric acid (50%, pH 1): 15, 30, 90, and 180 seconds and non‐demineralized samples (control). Preosteoblasts (MC3T3‐E1) were cultured on the bone samples for 24, 48, and 72 hours (n = 3). Fifteen samples removed from the remaining three animals were analyzed by scanning electron microcopy/energy dispersive spectrometry (SEM/EDS) after demineralization (n = 3). Results: The number of preosteoblasts increased significantly with time in all groups. The bone surface area covered by these cells increased with time, except in the control group. Intragroup differences occurred between 24 and 72 hours (P <0.05). Samples demineralized for 30 seconds showed greater area covered by preosteoblast cells than for the other times of demineralization in all periods of cell culture (P <0.05) without a statistically significant difference compared with 15 seconds. SEM/EDS showed diminished content of calcium (Ca) after 15 seconds of demineralization, but the Ca content increased after 180 seconds of demineralization (P <0.05). The phosphorus (P) amount increased significantly only after 30 seconds of demineralization (P <0.5). The sulfur (S) content was increased in demineralized samples in relation to non‐demineralized ones, reaching the highest level after 90 seconds, when the difference became significant in relation to all the other times of demineralization (P <0.05). Magnesium (Mg) content did not differ significantly between demineralized and non‐demineralized samples. Conclusions: Bone surfaces demineralized for 30 seconds increased the spreading of preosteoblasts as well as the surface area covered by these cells. Bone demineralization deserves to be studied in periodontal and maxillofacial regenerative procedures.  相似文献   
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