越鞠丸合甘麦大枣汤加减对谷氨酸诱导的HT22细胞损伤模型的神经保护作用

目的:探讨越鞠丸合甘麦大枣汤加减(YJGZ)对谷氨酸诱导的小鼠海马神经元细胞系(HT22)细胞损伤的神经保护作用。方法:HT22细胞系无菌培养,以高浓度谷氨酸建立细胞损伤模型,并制备YJGZ水提液和含药血清,分为正常组,模型组,YJGZ含药血清组(1%,5%,10%),YJGZ水提液组(166 mg·L~(-1)),尼莫地平组(100μmol·L~(-1))。噻唑蓝(MTT)比色法检测各组细胞存活率;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率及细胞内活性氧自由基(ROS)的含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马N-甲基-D-天冬氨酸受体亚单位2B蛋白(NR2B),环磷腺苷效应元件结合蛋白(CREB),磷酸化CREB(p-CREB),细胞外调节蛋白激酶(ERK),磷酸化ERK(p-ERK)的蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组细胞存活率显著下降(P 0. 01),乳酸脱氢酶(LDH)释放率明显增加(P 0. 05),细胞内活性氧(ROS)水平明显增加(P 0. 05),NR2B蛋白的表达明显升高(P 0. 05),CREB,p-CREB,ERK,p-ERK蛋白表达水平明显降低(P 0. 05);与模型组比较,YJGZ水提液组和尼莫地平组均能显著提高谷氨酸模型条件下HT22细胞的存活率(P 0. 01),减少细胞损伤,减少LDH的释放率,降低细胞内ROS水平(P 0. 05,P 0. 01),降低NR2B蛋白的表达水平(P 0. 05),增加CREB,p-CREB,ERK,p-ERK蛋白的表达(P 0. 05); YJGZ含药血清组与模型组比较,HT22细胞存活率并没有提高。结论:YJGZ水提液对谷氨酸诱导的HT22细胞损伤具有显著的保护作用。     

越鞠丸加味治疗冠心病心绞痛30例临床观察

目的:观察越鞠丸加味治疗肝郁气滞型冠心病心绞痛的临床疗效。方法:随机将60例肝郁气滞型冠心病心绞痛患者分为治疗组和对照组各30例,对照组采用消心痛治疗,治疗组采用越鞠丸加味治疗,主要观察两组治疗后心绞痛疗效、心电图疗效以及两组治疗前后中医证候积分变化情况和硝酸甘油的减少量。结果:治疗组在心绞痛和心电图疗效方面与对照组比较,P>0.05;在中医证候改善、硝酸甘油减少量方面也明显优于对照组(P<0.05或P<0.01)。结论:越鞠丸加味治疗本病疗效满意。     

基于肝脏TMT标记定量蛋白质组学技术研究越鞠丸防治“双心疾病”的作用机制

目的 观察越鞠丸治疗“双心疾病”的效果，并研究其中的作用机制。方法 选用6周龄健康雄性SPF级载脂蛋白E敲除（AopE^-/-）小鼠30只、同源C57BL/6J小鼠10只进行实验。将30只AopE^-/-小鼠分为模型组、越鞠丸低剂量组（7.58 g·kg^-1·d^-1）、越鞠丸高剂量组（30.32 g·kg^-1·d^-1），每组10只；C57BL/6J小鼠10只作为空白组，各组灌胃12周。饲养期间通过慢性不可预知应激刺激（CUMS）联合高脂饲料诱导的方法构建“双心疾病”模型。灌胃给药后，通过各组小鼠行为学实验结果［旷场实验（OFT）、糖水偏嗜实验（SPT）］、全自动生化分析仪检测小鼠血清天冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）、5-羟色胺（5-HT）、去甲肾上腺素（NE）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）的含量及小鼠主动脉、肝脏油红O、苏木素-伊红（HE）染色，心肌组织Masson染色进行模型评价。最后通过肝脏TMT标记定量蛋白质组学技术研究其中的作用机制。结果 模型小鼠出现明显的抑郁、焦虑、兴趣丧失、绝望等表现，主动脉、肝脏病理观察也出现明显脂质沉积，心肌组织出现明显心肌纤维化增多的表现，越鞠丸灌胃给药后能改善“双心疾病”模型小鼠的上述症状与指标。与空白组比较，第12周模型组小鼠站立次数、中心区域累计时间、总移动距离、移动速度、糖水偏嗜率均显著下降（P<0.01），与模型组比较，越鞠丸低、高剂量组小鼠上述指标均显著降低（P<0.01）。取材后，与空白组比较，模型组AST、ALT、TG水平显著增多（P<0.01），5-HT、NE、HDL-C水平均显著下降（P<0.01）。肝脏TMT标记定量蛋白质组学结果提示“双心疾病”模型小鼠主要引起ApoE、UDP葡醛酸基转移酶家族1成员A5（UGT1A5）、FASN等蛋白表达水平的变化，涉及乙酰辅酶A代谢、对细菌的反应、细胞氨基酸分解代谢等过程，与肝脏代谢功能异常有关。越鞠丸防治“双心疾病”涉及了高迁移率族核小体结合域2（HMGN2）、CALD1、Mup7等蛋白表达水平的变化，并对“双心疾病”发病有关的生物过程和异常的通路起到纠正作用，主要有肌肉收缩、紧密连接通路、心肌收缩通路、黏着斑通路等。结论 CUMS联合高脂饲料诱导AopE^-/-小鼠构建“双心疾病”模型方法合理；越鞠丸可以纠正“双心疾病”模型小鼠抑郁、焦虑状态，同时能减轻其主动脉斑块并纠正异常的血脂、肝功水平；可纠正“双心疾病”模型小鼠的异常生物过程与通路；实验筛选的差异蛋白及所涉及的生理病理变化是下一步研究的重点。