Effect of the heme oxygenase gene on mycelial growth and polysaccharide synthesis in Ganoderma lucidum

The heme oxygenase gene has antioxidant and cytoprotective effects in organisms, but no related research has been conducted in Ganoderma lucidum. For the first time, we cloned the HMX1 gene in G. lucidum. The CDS is 1092 bp in length and encodes 363 amino acids. The HMX1 protein was prokaryotically expressed and purified, and the enzyme activity of the purified protein was measured. The value of K_m was 0.699 μM, and V_m was 81.9 nmol BV h⁻¹ nmol⁻¹ protein. By constructing the silencing vector pAN7-dual-HMX1i, the transformants HMX1i1 and HMX1i2 were obtained. Compared with the wild-type (WT), the average growth rate of HMX1i1 and HMX1i2 decreased by 31% and 23%, respectively, and the mycelium biomass decreased by 53% and 48%, respectively. Compared with the WT, the extracellular polysaccharide content of HMX1i1 and HMX1i2 increased by 59% and 51%, and the intracellular polysaccharide content increased by 24% and 22%, respectively. These results indicate that the HMX1 gene affects mycelial growth and polysaccharide synthesis in G. lucidum.     

芝芪菌质提取物免疫活性研究

目的 探究芝芪菌质及其各部位免疫活性。 方法 芝芪菌质为灵芝菌丝-黄芪药渣的固体发酵复合体。通过小鼠碳粒廓清实验,鸡红细胞吞噬功能实验,小鼠血清溶血素、免疫球蛋白M(IgM)和免疫球蛋白G(IgG)的含量检测,以及小鼠脾淋巴细胞增殖实验,筛选了芝芪菌质水提液,芝芪菌质水浸液,芝芪菌质水提液经大孔树脂分离的部位(水洗脱液、40%乙醇洗脱液和95%乙醇洗脱液)的非特异性和特异性免疫活性。 结果 碳粒廓清实验中,K值最高为水浸液和水提液组的0.23,α值最高为水提液组的2.44。吞噬指数最高为水浸液和水提液组的0.36,鸡红细胞吞噬百分率最佳为水浸液组的47.25%。小鼠溶血素含量最高为水洗脱组的0.4。IgM含量最高为水提液组的34.19 mg·L-1,而IgG最高则是水浸液组的44.50 mg·L-1。淋巴细胞增殖指数最高为40%乙醇洗脱液组的1.23。 结论 芝芪菌质水提液、芝芪菌质水浸液和40%乙醇洗脱液具有显著的免疫增强功效,为芝芪菌质制成增强人体抵抗力的功能性食品及药品提供实验数据和理论参考。     

贞芪扶正冲剂对颌面部鳞癌化疗患者生存质量的影响

目的:探讨贞芪扶正冲剂对颌面部鳞癌化疗患者生存质量的影响。方法:将272例颌面部鳞癌患者随机分为治疗组136例(口服贞芪扶正冲剂+化疗)与对照组136例(单纯化疗)。两组均采用平阳霉素+顺铂+甲氨蝶呤化疗方案。至少完成两个疗程的化疗,每疗程化疗前后进行生存质量对比评价。结果:治疗组与对照组比较,KarnofskyPS(KPS)评分改善者分别为80、26例次,第二疗程为87、30例次。两组KPS评分分布上的变化差异有统计学意义。结论:中药贞芪扶正冲剂为纯天然中草药制剂,辅助化疗可以改善患者的KPS评分值,增加患者的体重,稳定患者的白细胞数,减轻患者化疗并发症的发生率,从而提高患者的生存质量。     

富硒灵芝对妊娠期糖尿病大鼠脂代谢的调节作用

【摘要】 目的 探讨富硒灵芝对妊娠期糖尿病（GDM）大鼠脂代谢的作用,为富硒灵芝可安全用于孕妇提供参考依据。 方法 选取100只SD大鼠（20只雄性,80只雌性）,随机选取12只雌鼠作为正常组,其余68只雌鼠给予高脂饲料喂养8周后,将雄鼠与雌鼠按1∶4同笼过夜,次日确定妊娠后的所有高脂饲料喂养的雌鼠给予腹腔注射链脲佐菌素 (STZ,35 mg/kg)制备GDM模型,模型构建成功后,将其随机分为模型组、盐酸二甲双胍组,以及富硒灵芝（低、中和高剂量）组,每组各12只。分别于治疗0、7 d和处死前尾静脉取血法收集大鼠血糖,检测血糖变化,药物治疗14 d后处死,收集血液检测血脂［总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）］及肝功能［天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）］,收集肝脏组织采用苏木精-伊红（HE）染色检测肝脏病理学,酶联免疫吸附法（Elisa）检测肝脂,同时蛋白免疫印迹法（Western Blot）检测肝脏脂代谢酶固醇原件调节蛋白-1c（SREBP-1c）、乙酰辅酶A羧化酶α（ACCα）、硬脂酰辅酶A去饱和酶1（SCD1）和过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPARα）蛋白表达特点。 结果 HE染色结果可见正常组肝细胞清晰可见,纹理清晰,模型组则呈明显脂肪颗粒浸润,与模型组相比,各治疗组均有一定好转;与正常组相比,模型组AST、ALT、TC、TG和LDL-C明显升高 (P＜0.05),HDL-C明显降低(P＜0.05),富硒灵芝和盐酸二甲双胍组均可以明显降低AST、ALT、TC、TG和LDL-C含量（P＜0.05）,升高HDL-C (P＜0.05);与正常组相比,模型组血糖明显升高 (P＜0.05),与模型组相比,在治疗1周和2周后,盐酸二甲双胍组血糖明显降低 (P＜0.05),治疗第14天,富硒灵芝高剂量组血糖低于模型组 (P＜0.05);与正常组相比,模型组肝脏组织中SREBF1 及 ACCα 蛋白表达明显升高 (P＜0.05),SCD和PPARα明显降低 (P＜0.05),与模型组相比,各治疗组均改善 (P＜0.05)。 结论 富硒灵芝对妊娠期糖尿病大鼠脂代谢具有明显的调节作用,今后或许可用于妊娠期糖尿病孕妇的辅助治疗。     

基于UPLC-Q-TOF-MS技术的霍山野生及栽培赤芝的代谢组学分析

目的:通过对霍山野生赤芝(HW)、仿野生赤芝(HI)和栽培赤芝(HC)的差异性研究,为进一步评价野生、仿野生和栽培的赤芝质量提供参考。方法:采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱法(UPLC-Q-TOF-MS)对HW、HI和HC进行代谢物测定,采用主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘-法判别分析(OPLS-DA)等多变量统计分析方法进行HW和HC代谢组学分析,并对差异代谢物定性鉴定。结果:PCA结果显示,HW和HI、HC在t[2]主成分方向区分明显,差异大;HI与HC差异较小。OPLS-DA结果表明,HW中灵芝酸C2、灵芝酸D、灵芝酸A含量显著高于HC;而HC中赤芝酸A、赤芝酸E2和赤芝酸D 3种成分含量显著高于HW。结论:通过对霍山野生赤芝和霍山栽培赤芝的差异性分析,并对差异性化合物进行了定性研究,从而为野生和栽培的赤芝的品质鉴别提供参考。     

HPLC法快速测定8种中药中齐墩果酸和熊果酸

目的建立一种快速分析方法,同时测定中药材马鞭草Verbena officinalis、女贞子Ligustrum lucidum、夏枯草Prunella vulgaris、白花蛇舌草Hedyotis diffusa、败酱草Patrinia scabiosaefolia、枇杷叶Eriobotrya japonica、山楂Crataegus pinnatifida、木瓜Chaenomeles Fructus papaya中齐墩果酸和熊果酸的量。方法使用快速溶剂萃取法,采用甲醇作为提取溶剂,静态萃取时间6 min,制备样品溶液,液相色谱分析采用Acclaim C_(30)色谱柱,以乙腈-0.2%醋酸(85∶15)为流动相,体积流量为0.3 mL/min,紫外检测波长为205 nm。结果样品提取时间为10 min,待测物齐墩果酸和熊果酸达到基线分离,且无样品基质干扰,r大于0.999,平均回收率在95.8%～102.7%,本法测定结果与《中国药典》2015年版方法的平均质量分数差异不显著。结论本方法简便、快速,且一法多用,可用于8种中药中齐墩果酸和熊果酸的测定。     

神经酰胺脂质体对灵芝发酵液中大分子极性成分的经皮递送效果研究

  目的  研究神经酰胺脂质体(Cerosomes, CS)对灵芝发酵液(Ganoderma lucidum fermentative liquid, GLFL)大分子极性成分的经皮递送效果及机制, 为GLFL高效经皮给药制剂的开发提供依据。  方法  以水溶性大分子荧光素异硫氰酸酯-葡聚糖(Fluorescein isothiocyanate-dextran, FD)为荧光探针, 采用Franz扩散池和大鼠离体皮肤考察神经酰胺对脂质体经皮递送效果的影响, 并采用荧光显微镜观察皮内荧光分布。采用薄膜分散法制备载有灵芝发酵液的神经酰胺脂质体(GLFL-CS), 考察其形态、粒径、包封率及稳定性。应用傅里叶变换衰减全反射红外光谱法(ATR-FTIR)研究经皮渗透机制。  结果  体外经皮递送实验表明, 神经酰胺和大豆磷脂比例为1 ∶ 6的FD-GLFL-CS[C/S(1 ∶ 6)]12 h皮内滞留量最高, 分别为FD-GLFL及FD-GLFL-CL的2.87倍和1.78倍。荧光显微镜观察结果发现CS能够促进更多的药物向皮肤深层渗透。所制备的GLFL-CS呈类球形, 分布均匀, 平均粒径为(259.3±16.7)nm, GLFL蛋白多肽类成分的包封率为(43.03±0.90)%。ATR-FTIR结果表明, CS可以改变皮肤水合能力以及角质层脂质和角蛋白的主要特征峰位移及峰面积。  结论  CS可能通过增强角质层水合作用, 改变皮肤角质层结构, 降低屏障作用, 从而显著提高水溶性大分子极性物质的经皮递送。      

灵芝多糖联合二甲双胍对2型糖尿病模型大鼠氧化应激的影响

目的研究灵芝多糖联合二甲双胍对2型糖尿病大鼠氧化应激的影响。方法 采用斯泼累格·多雷（SD）大鼠高脂饮食4周后,腹腔注射小剂量链脲佐菌素30 mg.kg-1造模。成模后将大鼠随机分为模型对照组、灵芝多糖组（给予灵芝多糖600 mg.kg-1）、二甲双胍组（给予二甲双胍600 mg.kg-1）及联合用药组（给予灵芝多糖300 mg.kg-1＋二甲双胍300 mg.kg-1）,另设正常对照组。给药治疗12周末测量大鼠空腹血糖;测定血清超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）水平。结果用药组空腹血糖水平均低于模型对照组（P<0.01）,其中联合用药组血糖显著低于单独用药组（P<0.01）。与模型对照组比较,用药组血清TC、TG水平明显下降（P<0.05或P<0.01）,与单独用药组比较,联合用药组血清TC、TG水平明显降低（P<0.05或P<0.01）;与模型对照组比较,用药组血清SOD水平明显升高（P<0.01）;与单独用药组比较,联合用药组血清SOD水平明显升高（P<0.05）。与模型对照组比较,用药组血清MDA水平明显降低（P<0.01）,联合用药组血清MDA较单独用药组明显降低（P<0.05）。与模型对照组比较,用药组血清CAT、GSH-Px水平明显升高（P<0.05或P<0.01）,联合用药组血清CAT、GSH-Px水平较单独用药组明显升高（P<0.05）。结论 灵芝多糖、二甲双胍联合用药能够有效对抗2型糖尿病大鼠体内氧化应激作用,效果优于单独用药,其机制可能与增强体内SOD、CAT、GSH-Px水平及调节血脂障碍有关。     

灵芝多糖肽对培养乳大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的研究灵芝多糖肽(GLPP)对培养乳大鼠心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用。方法用出生1~3 d的SD乳大鼠进行心肌细胞原代培养,取培养3~4 d的心肌细胞分为正常对照组、H/R组和GLPP给药组(12.5,25,50和100 mg·L-1)。MTT法检测细胞存活率;电镜检测细胞形态改变和线粒体损伤;用AnnexinⅤ-FITC/PI双标记细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡百分率;以Fluo-3/AM荧光指示剂负载,用激光扫描共聚焦显微镜观察心肌细胞内钙离子荧光强度变化;以活性氧(ROS)敏感的荧光探针2,7-二氢二氯荧光素(DCFH-DA)标记细胞,激光共聚焦显微镜下观察ROS含量变化。结果与正常对照组比较,H/R组细胞存活率降低(P<0.05);GLPP 12.5,25,50和100 mg·L-1组细胞存活率与H/R组比较明显增加(P<0.01)。与正常对照组比较,H/R组可见线粒体损伤,GLPP给药组可以减轻线粒体损伤。流式细胞仪检测结果表明,与正常对照组比较,H/R组细胞凋亡率增加(P<0.01);GLPP组与H/R组比较细胞凋亡率明显减小(P<0.01)。与正常对照组比较,H/R组[Ca2+]i增加,细胞内ROS含量增高(P<0.01);与H/R组比较,GLPP给药组细胞[Ca2+]i减少,细胞内ROS含量降低(P<0.01)。结论GLPP对H/R损伤的乳大鼠心肌细胞具有保护作用,其作用机制可能与减少细胞内自由基含量和减轻细胞内钙超负荷有关。     

The role of polysaccharide peptide of Ganoderma lucidum as a potent antioxidant against atherosclerosis in high risk and stable angina patients

ObjectivesAntioxidants can reduce oxidative radicals that affect the early phase of atherogenesis, that is endothelial dysfunction. Polysaccharide Peptide (PsP) derived from Ganoderma lucidum has an active substance in the form of β-glucan. Previous studies have proven the PsP of Ganoderma lucidum as an effective antioxidant in atherosclerotic rats and shows no toxicity in animal model. This study aims to prove the effect of PsP as potent antioxidant in high risk and stable angina patients.MethodThis is a clinical trial conducted to 37 high risk and 34 stable angina patients, which were determined based on ESC Stable CAD Guidelines and Framingham risk score, with pre and post test design without control group. The parameters are superoxide dimustase (SOD) and malondialdehyde (MDA) concentration, circulating endothelial cell (CEC) and endothelial progenitor cell (EPC) counts. The patients were given PsP 750 mg/day in 3 divided dose for 90 days. Paired t-test was performed for normally distributed data, and Wilcoxon test for not normally distributed data, and significant level of p ≤ 0,05.ResultsSOD level in high risk patients slightly increased but not statistically significant with p = 0,22. Level of SOD in stable angina group significantly increased with p = 0,001. MDA concentration significantly reduced in high risk and stable angina patients with p = 0.000. CEC significantly reduced both in high risk and stable angina patients, with p = 0.000 in both groups. EPC count significantly reduced in high risk and stable angina with p = 0.000.ConclusionPsP of Ganoderma lucidum is a potent antioxidant against pathogenesis of atherosclerosis in stable angina and high risk patients